蘭彩霞
(寧夏涇源縣動物疾病預(yù)防控制中心,寧夏涇源 756400)
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淺談動物檢測樣品的采集、保存、運(yùn)輸
蘭彩霞
(寧夏涇源縣動物疾病預(yù)防控制中心,寧夏涇源 756400)
動物病料樣品的采集是動物疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查或免疫監(jiān)測所不可缺少的重要步驟,而實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、有效性除受實(shí)驗(yàn)方法、檢測試劑、實(shí)驗(yàn)操作等因素的影響外,還要受到樣品的采集,運(yùn)輸、保存等因素的影響。本文通過檢測樣品在采集、保存和運(yùn)輸過程中必須注意的幾個主要環(huán)節(jié),說明樣品是監(jiān)測工作順利開展的基礎(chǔ),也決定了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
1.1 剖檢基本條件
凡發(fā)現(xiàn)患畜急性死亡懷疑是炭疽,則不可隨意解剖,應(yīng)采取患畜耳尖靜脈的血液做初步檢驗(yàn),萬不得已時,局部解剖作脾臟觸片的顯微鏡檢查。只有確定不是炭疽后,方可進(jìn)行剖檢。
1.2 采取病料的種類
根據(jù)不同的疾病或檢驗(yàn)?zāi)康?,采其相?yīng)的臟器、內(nèi)容物、分泌物、排泄物或其他材料;進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、抗體檢測、環(huán)境衛(wèi)生檢測時,樣品的數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計學(xué)的要求。采樣時應(yīng)小心謹(jǐn)慎,以免對動物產(chǎn)生不必要的刺激或損害和對采樣者構(gòu)成威脅。
1.3 內(nèi)臟病料的采取
如患畜已死亡,應(yīng)盡快采集,最遲不超過6h;血液樣品在采集前一般禁食8h。
1.4 技術(shù)人員的安全
應(yīng)做好人身防護(hù),嚴(yán)防人畜共患病感染;應(yīng)防止污染環(huán)境,防止疫病傳播,做好環(huán)境消毒和病害肉尸的處理。
刀、剪、鑷子等用具煮沸消毒30min,使用前用酒精擦拭,用時進(jìn)行火焰消毒。器皿經(jīng)103kPa高壓30min ,或經(jīng)160℃干烤2h滅菌;注射器和針頭煮沸30min。采取一種病料,使用一套器械與容器,不可重復(fù)采其他病料或容納其他臟器材料。采過病料的用具應(yīng)先消毒后清洗。檢查過的器械要放在2mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液中浸泡2h以上,才可再使用。
3.1 采血方法
對動物采血部位的皮膚先剃毛,75%的酒精消毒,待干燥后采血,采血可用針管、針頭、真空管,將血液沿管壁滴到開口的試管內(nèi)。
3.2 采血種類
3.2.1 全血樣品
進(jìn)行血液學(xué)分析,細(xì)菌、病毒或原蟲培養(yǎng),通常用全血樣品,樣品中加抗凝劑枸櫞酸鈉。采血時應(yīng)直將血液滴入抗凝劑中,并緩緩連續(xù)搖動,充分混合。
3.2.2 血清樣品
用作血清樣品的血液中不加抗凝劑,血液在室溫下靜置2h~4h(防止曝曬),待血液凝固,經(jīng)低速離心分離出血清。若需長時間保存,則將血清置20℃以下保存,但要盡量防止或減少反復(fù)凍融。樣品容器上貼詳細(xì)標(biāo)簽。
4.1 采樣方法
用常規(guī)解剖器械剝離病、死動物的皮膚,體腔用消毒的器械打開,所需病料按無菌操作方法從新鮮尸體中采集。剖開腹腔后,注意不要損壞腸道。
每個組織塊應(yīng)單獨(dú)放在已消毒的容器內(nèi),容器壁上注明日期、組織或動物名稱。注意防止組織間相互污染。
4.2 采樣種類
4.2.1 病原分離樣品的采集
用于微生物學(xué)檢驗(yàn)的病料應(yīng)新鮮,盡可能地減少污染;用于細(xì)菌分離的樣品采集,首先以燒紅的刀片燙烙臟器表面,在燒烙部位刺一孔,用滅菌后的鉑耳伸入孔內(nèi),取少量組織或液體,作涂片鏡檢或劃線種于適宜的培養(yǎng)基上。
4.2.2 組織病理學(xué)檢查樣品的采集
采集包括病灶及臨近正常組織的組織塊,立即放入10倍于組織塊的10%福爾馬林溶液中固定。組織塊厚度不超過0.5cm,組織塊切忌擠壓、刮摸和用水洗。如作冷凍切片用,則將組織塊放在0℃~4℃容器中,盡快送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。
5.1 腸管
只需選擇病變最明顯的部分,將其中的內(nèi)容物棄去,用滅菌生理鹽水輕輕沖洗;腸內(nèi)容物放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中送檢;從體外采集糞便,用拭子小心地插到直腸黏膜表面采集糞便,然后將拭子放入盛有滅菌的30%甘油鹽水緩沖保存液中送檢。
5.2 呼吸道
應(yīng)用滅菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉或氣管內(nèi)的分泌物,蘸取分泌物后立即將拭子浸入保存液中,密封低溫保存。常用的保存液有pH7.2~7.4的滅菌肉湯或磷酸鹽緩沖鹽水,一般每支拭子需保存液5mL。
6.1 胎兒
將流產(chǎn)后的整個胎兒,用塑料薄膜、油布或數(shù)層不透水的油紙包緊,裝入木箱內(nèi),立即送往實(shí)驗(yàn)室。
6.2 小家畜及家禽
將整個尸體包入不透水塑料薄膜、油紙或油布中,裝入木箱內(nèi),送往實(shí)驗(yàn)室。
送往實(shí)驗(yàn)室的樣品應(yīng)有一式二份的流調(diào)登記表、采樣登記表,一份隨樣品送實(shí)驗(yàn)室,另一份備案。注明要求做何種試驗(yàn);
(1)樣品采集要有代表性和合理性。開展疫病監(jiān)測采樣時要根據(jù)監(jiān)測方案的整體要求、目的、方法,選擇具有代表性的場或點(diǎn),盡可能充分、全面地反映總體的特征。同時還要考慮動物的飼養(yǎng)密度、日齡、體質(zhì)強(qiáng)弱、地勢及交通特點(diǎn)等因素,只有這樣,采集的監(jiān)測樣品才能綜合評估出總體疫病的流行和分布趨勢。
(2)樣品采集的時效性和適量性。由于監(jiān)測項(xiàng)目的不同,樣品采集是有時間要求的,目前疫病監(jiān)測主要通過病原監(jiān)測和抗體監(jiān)測兩種方法。不適宜在免疫后15天內(nèi)采樣,無論是采取抗體監(jiān)測還是病原檢測,都會影響監(jiān)測結(jié)果的真實(shí)、準(zhǔn)確。
(4)要避免樣品泄漏。裝在試管或廣口瓶中的病料密封后裝在冰瓶中運(yùn)送,防止試管和容器傾倒。如需寄送,則用帶螺口的瓶子裝樣品,并用膠帶或石蠟封口。將裝樣品的并有識別標(biāo)志的瓶子放到更大的具有堅(jiān)實(shí)外殼的容器內(nèi),并墊上足夠的緩沖材料。
(5)制成的涂片、觸片、玻片上注明號碼,并另附說明。玻片最好用涂片盒子盛裝,再用自封袋包裝,在保證不被壓碎的條件下運(yùn)送。
(6)所有樣品都要貼上詳細(xì)標(biāo)簽。
參考文獻(xiàn)
[1] 鐘群芳.淺談動物樣品采集、運(yùn)輸與保管的體會[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2006,(2):58.