韋禮斌，謝　寧，玉海玲，嚴海鳳

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗科/廣西艾滋病臨床治療中心，廣西南寧 530023)

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白細胞檢測的臨床可報告范圍驗證

韋禮斌，謝寧，玉海玲，嚴海鳳

(南寧市第四人民醫(yī)院檢驗科/廣西艾滋病臨床治療中心，廣西南寧 530023)

摘要:目的對sysmex XT-2000i全自動血液分析儀測定白細胞(WBC)的分析測量范圍及臨床可報告范圍進行驗證。方法參照EP6-A指南的要求進行實驗和驗證。結(jié)果sysmex XT-2000i全自動血液分析儀測定WBC的線性范圍為(0～309.1)×109/L；臨床可報告范圍為(0～12 364)×109/L。結(jié)論sysmex XT-2000i全自動血液分析儀測定WBC的分析測量范圍符合廠家聲明的性能，臨床可報告范圍能滿足臨床工作的需要。

關鍵詞:白細胞；分析測量范圍；臨床可報告范圍

任何作定量分析的儀器所檢測的定量分析項目其線性范圍都是要為臨床服務的，只有結(jié)合臨床實際才具有實用價值[1]。因此筆者參照美國臨床實驗室改進修正案(CLIA)EP6-A指南對sysmex XT-2000i全自動血液分析儀測定WBC的線性范圍和臨床可報告范圍進行驗證[2]，現(xiàn)報道如下。

1材料與方法

1.1材料高值白細胞(WBC)標本一份。

1.2儀器與試劑sysmex XT-2000i全自動血液分析儀及其配套試劑、質(zhì)控物。

1.3方法sysmex XT-2000i全自動血液分析儀廠家聲明在允許誤差范圍為±6%時WBC的線性范圍為(0~310)×109/L(1/2的CLIA,88 規(guī)定的WBC允許誤差范圍為小于±7.5%。),驗證其線性范圍和臨床可報告范圍，在儀器運行正常并且完成了每天的常規(guī)室內(nèi)質(zhì)控的情況下進行相關的實驗。高值WBC的制備：取無溶血、無黃疸、無脂血的當天檢測后的的抗凝血，3 000 r/min離心5 min，棄血漿，收集白膜層移至試管，待收集到的白膜層裝滿試管后再離心10 min，再棄血漿，再次收集濃縮的白膜層，第三次將白膜層移至試管離心5 min，棄血漿后收集的濃縮白膜即形成高值標本(H)。如此反復收集直至足夠量WBC，充分混勻后平行測定所收集的高值WBC的濃度，再與儀器配套的稀釋液按 0∶500、50∶450、100∶400、200∶300、300∶200、400∶100、500∶0進行混合，配制成一系列WBC濃度的待測標本，包含或接近儀器廠家聲明的線性范圍。分別將待測標本平行測定2次并記錄測量結(jié)果。在Microsoft Excel2003上以Y軸作為實測值，X軸作為預期值，作直線回歸，同時獲得兩者的相關性?；厥諏嶒灒簩⒏咧档腤BC標本用稀釋液按2、10、20、40、80、160倍稀釋，并將每個濃度梯度平行測定2次。計算出實測均值后與預期值做比較，計算回收率,回收率=(測定值/預期值)×100%?；厥章试?0.0%～110.0%，結(jié)果可接受。

2結(jié)果

系列 WBC濃度(接近廠家聲明的線性)的測定值與預期值的結(jié)果見表1。WBC的測定值與預期值的散點圖(圖1)顯示散點圖近似一條過原點的直線，系列WBC濃度的測定值與預期值成很好的線性關系(Y=0.985 3X,R2=0.999 8)，因此由表1、圖1可確認sysmex XT-2000i全自動血液分析儀測定WBC的線性范圍為(0～309.1)×109/L。稀釋回收實驗測定結(jié)果(表2)顯示高值WBC在稀釋倍數(shù)小于和等于40倍時，回收率均在100.0%～110.0%，因此確定WBC臨床可報告范圍為(0～12 364)×109/L(309.1×109/L×40=12 364×109/L)。

表1　　系列 WBC濃度的測定值與預期值的結(jié)果

圖1　系列WBC濃度(×109/L)的測定值

稀釋倍數(shù)測定結(jié)果1(×109/L)測定結(jié)果2(×109/L)實測均值(×109/L)預期值(×109/L)回收率(%)1∶2157.94160.12159.03154.55102.91∶1032.1131.0131.5630.91102.11∶2016.1515.3315.7415.46101.81∶408.057.457.757.73100.31∶803.583.023.303.8685.51∶1601.681.301.491.9377.2

3討論

美國臨床實驗室修正法規(guī) (CLIA)規(guī)定了檢測系統(tǒng)性能評估的最基本要求為精密度、準確度、可報告范圍和參考區(qū)間[2]。精密度，準確度的評估可分別通過室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評來實現(xiàn)，這些工作已經(jīng)成為日常工作的一部分，可報告范圍和參考區(qū)間的評估由于各種原因在臨床實驗室中不易操作。筆者通過本研究發(fā)現(xiàn)，WBC檢測的臨床可報告范圍的驗證不易操作難點主要是高值標本的不易獲得，要獲取接近上限范圍高值的混合血高值標本(H)的操作的確比較繁瑣；H標本系列濃度的稀釋也較繁瑣。我國頒布的《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》明確要求:醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室應當保證檢測系統(tǒng)的完整性和有效性。因此為了保證臨床實驗室檢測系統(tǒng)的完整性和有效性，即使再繁瑣也必須實現(xiàn)對檢測系統(tǒng)4大基本性能的評估。

線性范圍是指在定量檢測分析中，由檢測系統(tǒng)直接測量未經(jīng)過任何處理(如稀釋、濃縮或其他預處理)的分析物得到的可靠結(jié)果范圍，在該范圍內(nèi)，分析物的測量值與真值呈線性比例關系。臨床可報告范圍是指定量檢測項目向臨床能報告的檢測范圍，分析物可作預處理[3]。

EP6-A指南采用多項式線性回歸分析的方法作為目前分析測量范圍最好的統(tǒng)計學方法。規(guī)定了分析用于驗證的材料必須具有該方法的基質(zhì)效應，用于驗證線性范圍的標本類型應與臨床測試的標本相似，所有標本應不含廠家所標定的干擾因素，如溶血、黃疸、脂血等。理想的基質(zhì)標本類型為患者標本，可推薦的稀釋液稀釋患者樣本等。選擇的測量濃度范圍應包含或等于廠家聲明的最低和最高濃度范圍。評估線性時至少要求5個不同濃度水平樣本，每個水平重復測定2次。然后對測量值做線性回歸。

Sysmex XT-2000i全自動血液分析儀廠家聲明在允許誤差范圍為±6%時的線性范圍為(0～310)×109/L。本研究通過驗證后確認sysmex XT-2000i全自動血液分析儀測定WBC在(0～309.1)×109/L之間呈良好的線性關系，與廠家聲明基本一致。本研究的稀釋回收試驗顯示高值標本在稀釋倍數(shù)小于和等于40倍時，回收率均在100.0%～110.0%，并且隨著稀釋倍數(shù)的增大，回收率逐漸下降，當稀釋倍數(shù)為80倍時，回收率85.5%，低于90%，結(jié)果為不可靠了，因此對于超過儀器測定WBC線性范圍的標本，可用儀器自帶的稀釋液做稀釋再測量，然后乘上稀釋倍數(shù)(最大稀釋倍數(shù)不要超過40倍)所獲得的值完全符合WBC臨床可報告范圍。

隨著現(xiàn)代科技和全自動血細胞制造技術的發(fā)展,現(xiàn)代的血細胞計數(shù)儀測WBC的線性范圍越來越寬,因此WBC線性范圍驗證對高值標本的要求高。在驗證過程中高值標本做不到隨處可得，作者通過查閱資料和自行摸索，參考了楊有業(yè)等[4]推薦的用試驗后混合標本制備高值WBC標本和稀釋高值WBC標本的方法,使得驗證得以順利進行。本方法改良之處在于稀釋液用儀器自配的稀釋液,以盡量保證分析用于驗證的材料必須具有適合該方法的基質(zhì)效應,最大限度地避免基質(zhì)效應等影響[5-6]；此外本法縮短了離心時間,加快了離心速度同樣也制備出了合乎要求驗證的高值WBC標本,節(jié)約了時間,簡化了工序,是制備合乎驗證要求的高值WBC標本可推薦的改良方法。

參考文獻

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·臨床研究·

收稿日期：(2015-09-25)

文獻標識碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.051A

文章編號：1673-4130(2015)24-3625-02