王　玲，孟高樂，鞠春影，李建路，張桂春，陳麗娜

(1.遼寧省沈陽市興城療養(yǎng)院檢驗(yàn)科，遼寧沈陽 125105；2.吉林省武警總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科,吉林長(zhǎng)春 130052；

3.解放軍第313醫(yī)院檢驗(yàn)科,遼寧葫蘆島 125000；4.中國人民解放軍93062部隊(duì)44分隊(duì),吉林長(zhǎng)春 132101；

5.寧波美康生物科技股份有限公司,浙江寧波 315104)

?

常規(guī)肝功酶法項(xiàng)目在POCT分析儀上的抗干擾性能初步評(píng)價(jià)

王玲1，孟高樂2，鞠春影3，李建路4，張桂春5，陳麗娜5

(1.遼寧省沈陽市興城療養(yǎng)院檢驗(yàn)科，遼寧沈陽 125105；2.吉林省武警總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科,吉林長(zhǎng)春 130052；

3.解放軍第313醫(yī)院檢驗(yàn)科,遼寧葫蘆島 125000；4.中國人民解放軍93062部隊(duì)44分隊(duì),吉林長(zhǎng)春 132101；

5.寧波美康生物科技股份有限公司,浙江寧波 315104)

摘要:目的對(duì)天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)在POCT分析儀上的抗干擾性能進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。方法根據(jù)CLSI EP7-A2文件，對(duì)AST、ALT 和GGT進(jìn)行干擾評(píng)價(jià)試驗(yàn)。結(jié)果配對(duì)差異試驗(yàn)結(jié)果顯示：342 μmol/L 結(jié)合膽紅素(CB)、342 μmol/L 非結(jié)合膽紅素(FB)、0.03 g/L 抗壞血酸(Vc)、2 g/L血紅蛋白(Hb)、1450 濁度乳糜對(duì)AST、ALT測(cè)定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對(duì)高濃度GGT測(cè)定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對(duì)低濃度GGT測(cè)定無干擾；Hb 為2 g/L時(shí)對(duì)低濃度GGT測(cè)定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36；進(jìn)一步的劑量效應(yīng)試驗(yàn)顯示，Hb對(duì)低濃度的GGT檢測(cè)會(huì)產(chǎn)生一定的線性干擾效應(yīng)。結(jié)論P(yáng)OCT分析儀上的AST、ALT、GGT試劑具有較強(qiáng)的抗干擾能力，能夠滿足臨床應(yīng)用。

關(guān)鍵詞:天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶；丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶；γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶；抗干擾

基于微流控芯片技術(shù)的即時(shí)檢驗(yàn)技術(shù)(POCT)已成為當(dāng)前檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展的潮流和熱點(diǎn)，主要特點(diǎn)是快速得出結(jié)果，操作簡(jiǎn)便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術(shù)的進(jìn)步，以及人們對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)及治療水平提高的要求，POCT逐漸受到關(guān)注[1]。微流控芯片技術(shù)是21世紀(jì)最為重要的前沿技術(shù)之一，它把生物、化學(xué)、醫(yī)學(xué)分析過程中的樣品制備、反應(yīng)、分離、檢測(cè)等基本操作單元集成到一塊微米尺度的芯片上[2]，自動(dòng)完成分析全過程。將微流控芯片技術(shù)引入到POCT設(shè)備，開創(chuàng)了POCT發(fā)展的新局面。結(jié)合微流控芯片技術(shù)的POCT分析儀兼具高準(zhǔn)確度、低需血量、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)試劑用量少、成本低等優(yōu)點(diǎn)，非常適用于中國這樣具有龐大基層醫(yī)療系統(tǒng)且試劑使用量極大的國家。因此建立操作簡(jiǎn)易、價(jià)格低廉、實(shí)時(shí)報(bào)告的POCT分析系統(tǒng)對(duì)發(fā)揮廣大基層醫(yī)院在疾病預(yù)防及診療中的作用有重要的意義。

本研究是對(duì)寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司所研發(fā)的POCT分析儀及配套的試劑盤片套餐中的天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)項(xiàng)目的抗干擾性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，確定是否適合臨床推廣使用。

1材料與方法

1.1材料天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)凍干粉末。

1.2儀器與試劑

1.2.1POCT分析儀及試劑寧波美康保生生物醫(yī)學(xué)工程有限公司的POCT分析儀及其配套的試劑盤片，其中試劑盤片含有AST、ALT、GGT項(xiàng)目的檢測(cè)試劑，試劑以凍干粉末的形式存在，且每一個(gè)試劑盤片僅供單人單次使用。

1.2.2POCT分析儀操作將試劑盤放置于POCT分析儀試劑盤倉內(nèi)，用移液槍將170 μL的樣品通過盤片上的樣本孔注入試劑盤片，蓋上儀器的上蓋，執(zhí)行檢測(cè)程序以完成檢測(cè)，一次測(cè)試同時(shí)得到AST、ALT、GGT的結(jié)果。

1.2.3干擾物質(zhì)干擾物質(zhì)FB、CB均購于百靈威科技有限公司，Vc、Hb和乳糜分別購于上海生工生物工程有限公司、上海瑞齊生物科技有限公司和華瑞制藥有限公司。

1.2.3.1基礎(chǔ)樣本準(zhǔn)備參考EP7-A2文件推薦的分析物水平，每個(gè)分析物選擇兩個(gè)濃度[3]。AST、ALT低值72～88 U/L，高值360～440 U/L，GGT低值90～100 U/L，高值450～550 U/L的新鮮血清(無溶血、黃疸和脂血)作為基礎(chǔ)樣本。

1.2.3.2干擾物貯存液準(zhǔn)備在弱光下，用0.1 mol/L NaOH配制6.84 mmol/L FB、用蒸餾水配制6.84 mmol/L CB溶液，并分裝于棕色試劑瓶中，避免在自然光下長(zhǎng)期暴露； 用冰水配制0.6 g/L 的Vc儲(chǔ)存液，配制過程中最大限度避免接觸空氣，兩個(gè)小時(shí)之內(nèi)所有測(cè)試應(yīng)完成；用蒸餾水分別配制40 g/L 的Hb溶液，29000濁度的乳糜樣本[3]。

1.3方法

1.3.1配對(duì)差異試驗(yàn)

1.3.1.1干擾血清的配制用基礎(chǔ)樣本按照1∶20比例稀釋5種干擾物的貯存液和空白液分別作為測(cè)試樣本和對(duì)照樣本，稀釋后測(cè)試樣本中干擾物質(zhì)FB、CB、Vc、Hb和乳糜的濃度分別是342 μmol/L、342 μmol/L、0.03 g/L、2 g/L和1450濁度。

1.3.1.2重復(fù)次數(shù)的確定計(jì)算最大允許干擾值(dmax)/批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差(s)比值(dmax/s)，查dmax/s與重測(cè)次數(shù)對(duì)應(yīng)表(見表1)，得出高低2個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定次數(shù)。其中s由基礎(chǔ)樣本重復(fù)測(cè)定20次計(jì)算得到；dmax為各項(xiàng)目臨床意義差別標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)AST、ALT和GGT的臨床意義差別標(biāo)準(zhǔn)均定為10%[3]。根據(jù)EP7-A2文件要求以交互順序進(jìn)行測(cè)定并進(jìn)行干擾效應(yīng)分析。

表1　　95%的置信限和檢驗(yàn)效能檢測(cè)不同的干擾

1.3.2干擾劑量效應(yīng)試驗(yàn)參考EP7-A2文件，以高濃度樣本和低濃度樣本按比例混合成5個(gè)系列濃度樣本，按照升序-降序-升序順序重復(fù)測(cè)定3次。根據(jù)EP7-A2文件進(jìn)行劑量效應(yīng)分析。

2結(jié)果

2.1配對(duì)差異試驗(yàn)AST低濃度基礎(chǔ)樣本測(cè)定均值為75.5 U/L，高濃度基礎(chǔ)樣本測(cè)定均值為365.2 U/L；ALT低濃度基礎(chǔ)樣本測(cè)定均值為84.1 U/L，高濃度基礎(chǔ)樣本測(cè)定均值為434.8 U/L； GGT低濃度基礎(chǔ)樣本測(cè)定均值為104.0 U/L，高濃度基礎(chǔ)樣本測(cè)定均值為464.8 U/L。計(jì)算可得，AST低濃度基礎(chǔ)樣本dmax為7.55，dmax/s為4.91；高濃度基礎(chǔ)樣本dmax為36.51，dmax/s為12.56；ALT低濃度基礎(chǔ)樣本dmax為8.41，dmax/s為4.62；高濃度基礎(chǔ)樣本dmax為42.48，dmax/s為15.02；GGT低濃度基礎(chǔ)樣本dmax為10.40，dmax/s為4.98；高濃度基礎(chǔ)樣本dmax為46.48，dmax/s為10.00。查對(duì)應(yīng)表可知，AST、ALT和GGT高、低濃度水平的重測(cè)次數(shù)均為3次。

342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L 抗壞血酸(Vc)、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對(duì)AST、ALT測(cè)定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對(duì)高濃度GGT測(cè)定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對(duì)低濃度GGT測(cè)定無干擾；Hb為2 g/L時(shí)對(duì)低濃度GGT測(cè)定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36。結(jié)果見表2～7。

表2　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對(duì)低濃度 AST 測(cè)定的干擾

表3　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對(duì)高濃度 AST 測(cè)定的干擾

表4　　FB、CB、Vc、Hb和乳糜對(duì)低濃度 ALT 測(cè)定的干擾

表5　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對(duì)高濃度 ALT 測(cè)定的干擾

表6　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對(duì)低濃度 GGT 測(cè)定的干擾

表7　　FB、CB、Vc、 Hb和乳糜對(duì)高濃度 GGT 測(cè)定的干擾

2.2劑量效應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果顯示，Hb對(duì)高濃度GGT測(cè)定可產(chǎn)生線性干擾，干擾效應(yīng)結(jié)果見表8，其線性方程式為Y=10.133X+101.667，R2=0.961，見表8、圖1。

表8　　Hb對(duì)高濃度GGT檢測(cè)的干擾劑量效應(yīng)結(jié)果

-：無數(shù)據(jù)。

圖1　　Hb對(duì)低濃度GGT干擾的劑量效應(yīng)圖

3討論

POCT是一項(xiàng)新興的技術(shù)領(lǐng)域，主要特點(diǎn)是能快速得出結(jié)果，操作簡(jiǎn)便，容易使用和小型化。隨著診斷和輔助技術(shù)的進(jìn)步以及人們對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)及治療水平要求的提高，POCT逐漸受到關(guān)注。近年來，隨著微流控芯片加工技術(shù)的迅速發(fā)展和微流控分析方法研究的不斷深入，微全分析系統(tǒng)已將醫(yī)療檢測(cè)試驗(yàn)室的部分功能轉(zhuǎn)移到便攜式的POCT檢測(cè)設(shè)備中，基于微流控芯片技術(shù)的POCT技術(shù)可將血球血清分離、血清稀釋、測(cè)定等步驟通過芯片自動(dòng)化作業(yè)完成，可達(dá)到多種標(biāo)記同步檢測(cè)的目的，實(shí)現(xiàn)了少量樣品即可分析、操作簡(jiǎn)便、無交叉污染、可自動(dòng)化作業(yè)的目標(biāo)，開創(chuàng)了POCT發(fā)展的新局面[1,4]。

本試驗(yàn)根據(jù)文件[5-7]，對(duì)POCT分析儀配套的試劑盤片套餐中的AST、ALT、GGT項(xiàng)目進(jìn)行抗干擾試驗(yàn)，從影響AST、ALT、GGT檢測(cè)的樣本中常見的干擾物質(zhì)考慮，選擇342 μmol/L FB、342 μmol/L CB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb和1450濁度的乳糜為干擾物測(cè)試濃度，配對(duì)差異試驗(yàn)結(jié)果顯示：342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對(duì)AST、ALT測(cè)定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、2 g/L Hb、1450 濁度乳糜對(duì)高濃度GGT測(cè)定均無干擾；342 μmol/L CB、342 μmol/L FB、0.03 g/L Vc、1450 濁度乳糜對(duì)低濃度GGT測(cè)定無干擾；Hb 為2 g/L時(shí)對(duì)低濃度GGT測(cè)定有一定的干擾，其中dobs為20.33，dc為2.36。進(jìn)一步的劑量效應(yīng)試驗(yàn)顯示，Hb對(duì)低濃度的GGT檢測(cè)會(huì)產(chǎn)生一定的線性干擾效應(yīng)。

另外，試驗(yàn)顯示，干擾物質(zhì)乳糜對(duì)檢測(cè)結(jié)果均沒有影響，這方面還需要進(jìn)一步商榷。本試驗(yàn)的POCT分析儀是利用離心力結(jié)合微流控技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)分析的，結(jié)合觀察測(cè)試后的試劑盤，乳糜樣本均被離心力除去。另外一方面，臨床脂血樣本，猜測(cè)也會(huì)通過同樣的離心方式被除去部分，不過需要進(jìn)一步的試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

Hb在GGT反應(yīng)波長(zhǎng)下有一定程度的吸光度增高[8]，而本試驗(yàn)結(jié)果顯示Hb對(duì)低濃度的GGT檢測(cè)會(huì)產(chǎn)生一定的線性干擾效應(yīng)。結(jié)合POCT本身所具有的個(gè)性化特點(diǎn)，后期在儀器設(shè)計(jì)中進(jìn)行優(yōu)化，即對(duì)樣本進(jìn)行初步篩查，溶血程度嚴(yán)重的樣本被判定為不合格樣本，需重新取樣。

綜上所述，POCT分析儀上的AST、ALT、GGT試劑具有較強(qiáng)的抗干擾能力，再結(jié)合POCT儀器的個(gè)性化特點(diǎn)，能夠滿足臨床應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1]Peter B.L,Carolin M,Alice S,et al.Point-of-care testing (POCT):Current techniques and future perspectives[J].Trends in Analyt Chem,2011,30(6): 887-898.

[2]林炳承,秦建華.微流控芯片實(shí)驗(yàn)室[M].北京:科學(xué)出版社,2006:2-10.

[3]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP7-A2 Interference Testing in Clinical Chemistry[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2002．

[4]杜晶輝,劉宗彬,張望.快速分選富集循環(huán)腫瘤細(xì)胞的微流控芯片[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2013,23(6):1364-1366.

[5]袁云仙.膽紅素對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的干擾及消除研究[J].中國醫(yī)藥指南,2011,9(13):111-112.

[6]孫虹,牛華,趙崇吉，等.膽紅素、血紅蛋白和乳糜微粒對(duì)生化檢測(cè)結(jié)果的干擾評(píng)價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,32(21):2509-2512.

[7]程正江.血紅蛋白和膽紅素干擾臨床生化分析的機(jī)理初探[J].國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊(cè),2004,25(6):488-493.

[8]沈伽弟.溶血對(duì)臨床生化檢驗(yàn)的干擾和影響[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1994,9(1):250-253.

·臨床研究·

收稿日期：(2015-07-28)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.045A

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3615-03