遲紹琴,陳奕微，師宏詞，孫宇飛，鄭立新

(1.深圳市龍崗區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)中心，廣東深圳 518172；2.廣東省計(jì)劃生育科學(xué)研究所，廣東廣州 510000)

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ELISA方法篩查T(mén)ORCH感染的質(zhì)量控制方法探討

遲紹琴1,陳奕微1，師宏詞1，孫宇飛1，鄭立新2

(1.深圳市龍崗區(qū)計(jì)劃生育服務(wù)中心，廣東深圳 518172；2.廣東省計(jì)劃生育科學(xué)研究所，廣東廣州 510000)

摘要:目的探討實(shí)驗(yàn)室定性檢測(cè)TORCH感染指標(biāo)(風(fēng)疹病毒IgG、巨細(xì)胞病毒IgG和IgM、弓形蟲(chóng)IgG和IgM，簡(jiǎn)稱(chēng)五項(xiàng))的室內(nèi)質(zhì)量控制方法。方法采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，正態(tài)分布數(shù)據(jù)，用ELISA方法檢測(cè)的陽(yáng)性率比值和標(biāo)準(zhǔn)差，設(shè)定1+2s為失控規(guī)則，繪制半Lerey-Jennings質(zhì)控圖；非正態(tài)分布數(shù)據(jù)、小概率事件，則采用直接概率計(jì)算法，回顧分析57批次的檢測(cè)數(shù)據(jù)。結(jié)果風(fēng)疹病毒IgG陽(yáng)性率為86.66%、巨細(xì)胞病毒IgG/IgM的陽(yáng)性率為98.87%和0.13%、弓形蟲(chóng)IgG/IgM陽(yáng)性率為2.43%和1.71%，五項(xiàng)指標(biāo)在臨界值范圍的分別有151、3、5、176、27個(gè)標(biāo)本數(shù)據(jù)。失控次數(shù)為巨細(xì)胞病毒IgG 1次，弓形蟲(chóng)IgG/IgM分別是1次和4次。 結(jié)論ELISA定性檢測(cè)TORCH感染指標(biāo)的室內(nèi)質(zhì)控，可以采用日常檢測(cè)陽(yáng)性率或陰性率數(shù)據(jù)監(jiān)控假陽(yáng)性。臨界值范圍的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步復(fù)檢或確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。

關(guān)鍵詞:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);定性檢測(cè);TORCH;室內(nèi)質(zhì)控

經(jīng)典的TORCH感染在圍生醫(yī)學(xué)中稱(chēng)為T(mén)ORCH綜合征，是一組以胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)受損為主，多器官受累的臨床綜合征，包括小頭畸形、腦積水、腦內(nèi)鈣化、遲發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙、耳聾、白內(nèi)障、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、先天性心臟病、肝脾腫大、骨髓抑制、胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩等，是孕前優(yōu)生健康檢查的常規(guī)項(xiàng)目[1]。ELISA方法定性免疫測(cè)定被廣泛應(yīng)用于孕前TORCH感染的篩查，然而，關(guān)于TORCH感染指標(biāo)(風(fēng)疹病毒IgG、巨細(xì)胞病毒IgG和IgM、弓形蟲(chóng)IgG和IgM)的室內(nèi)質(zhì)控方面，除了做好測(cè)定前、后的質(zhì)量控制外，測(cè)定中進(jìn)口質(zhì)控品的昂貴，國(guó)內(nèi)還沒(méi)有合適的質(zhì)控品，導(dǎo)致此項(xiàng)目的室內(nèi)質(zhì)控處于比較尷尬的地步。因此，建立一個(gè)室內(nèi)質(zhì)控方法，對(duì)于甄別實(shí)驗(yàn)的假陽(yáng)性、保證檢測(cè)質(zhì)量尤為重要。

1資料與方法

1.1一般資料來(lái)源于本實(shí)驗(yàn)室2013年4～12月共57批次ELISA方法定性檢測(cè)的TORCH感染指標(biāo)：風(fēng)疹病毒IgG、巨細(xì)胞病毒IgG和IgM、弓形蟲(chóng)IgG和IgM陽(yáng)性或陰性數(shù)據(jù)。

1.2方法ELISA定性檢測(cè)TORCH試劑盒為德國(guó)維潤(rùn)賽潤(rùn)研發(fā)有限公司研發(fā)，密封的患者樣品可在冰箱中2～8 ℃保存7 d，小于或等于-20 ℃可保存更久，避免樣品反復(fù)凍融。已稀釋的樣品可在2～8 ℃保存一星期。操作嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。臨界值判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1。

表1　　臨界值判定標(biāo)準(zhǔn)

*PC：標(biāo)準(zhǔn)血清OD值。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，正態(tài)分布數(shù)據(jù)，建立半Lerey-Jennings質(zhì)控圖。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

統(tǒng)計(jì)分析ELISA方法檢測(cè)TORCH感染指標(biāo)的57批次4 684份標(biāo)本。風(fēng)疹病毒IgG的陽(yáng)性率為86.66%，其陽(yáng)性率經(jīng)Kolmogorov-Smimov 檢驗(yàn)均值為0.868 7±0.040 9、呈正態(tài)分布。巨細(xì)胞病毒IgG陰性率為1.13%(陽(yáng)性率為98.87%)，巨細(xì)胞病毒IgM陽(yáng)性率為0.13%、弓形蟲(chóng)IgG的陽(yáng)性率為2.43%，弓形蟲(chóng)IgM陽(yáng)性率1.71%、差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。五項(xiàng)處于臨界值范圍的分別有151、3、5、176、27個(gè)標(biāo)本數(shù)據(jù)。

風(fēng)疹病毒IgG：以陽(yáng)性率均值0.868 7，標(biāo)準(zhǔn)差0.040 9，繪制半Lerey-Jennings質(zhì)控圖。結(jié)果所有數(shù)據(jù)均小于0.950 5界限值，第51批次的結(jié)果為0.95，但沒(méi)有超出+2s，全部在控。見(jiàn)圖1。

圖1　　風(fēng)疹病毒IgG陽(yáng)性率質(zhì)控圖

直接概率計(jì)算法：巨細(xì)胞病毒IgG第55次，P=0.004 5<0.05，為1次失控，3個(gè)陰性標(biāo)本需要重做；巨細(xì)胞病毒IgM無(wú)失控；弓形蟲(chóng)IgG第57次，P=0.026 6，為1次失控，6個(gè)陽(yáng)性標(biāo)本重做；弓形蟲(chóng)IgM第28、29、31、36次的P值為0.005 58、0.005 58、0.001 21、0.022 3，4次均為失控，相應(yīng)批次的24個(gè)陽(yáng)性標(biāo)本重新檢測(cè)。其余所有批次P>0.05，為合格批次即在控。

3討論

室內(nèi)質(zhì)量控制由實(shí)驗(yàn)室工作人員采取一定的方法步驟，連續(xù)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，旨在監(jiān)測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精密度，提高本室常規(guī)工作中批內(nèi)、批間標(biāo)本檢驗(yàn)的一致性，以確定測(cè)定結(jié)果是否可靠、可否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作[4]。利用控制物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法是最廣泛應(yīng)用的質(zhì)量質(zhì)控形式，然而，有一些局限性，如控制物昂貴，控制物可能顯示出不同于患者標(biāo)本的特征。由于通常在檢測(cè)過(guò)程的分析階段使用控制物，不能檢出導(dǎo)致誤差的分析前因素，它們可能存在于標(biāo)本的收集、標(biāo)記、運(yùn)輸和處理的各個(gè)環(huán)節(jié)中[5]。全國(guó)免費(fèi)孕前優(yōu)生健康檢查項(xiàng)目TORCH，女性項(xiàng)目為風(fēng)疹病毒IgG、巨細(xì)胞病毒IgG和IgM、弓形蟲(chóng)IgG和IgM，自2010年開(kāi)展此項(xiàng)檢測(cè)以來(lái)，臨床實(shí)驗(yàn)室較多采用ELISA方法檢測(cè)人血清中特異性IgG和IgM抗體，以判斷受到感染的情況。但是，TORCH感染指標(biāo)的進(jìn)口質(zhì)控物價(jià)格高，國(guó)內(nèi)還沒(méi)有合適的質(zhì)控品，加之環(huán)境、人員、試劑盒、儀器設(shè)備的差異，同為孕前婦女人群，各地報(bào)道的感染率亦不同[6-8]，陳建軍等[6]報(bào)道的五項(xiàng)陽(yáng)性率為95.4%、92.8%、0.44%、2.26%、6.59%，胡萍等[7]報(bào)道弓形蟲(chóng)、巨細(xì)胞病毒感染率為2.42%，徐小芳等[8]報(bào)道的TORCH-IgM為0.94%。本研究的檢測(cè)結(jié)果為：風(fēng)疹病毒IgG的陽(yáng)性率為86.66%，巨細(xì)胞病毒IgG陽(yáng)性率98.87%，巨細(xì)胞病毒IgM陽(yáng)性率為0.13%、弓形蟲(chóng)IgG的陽(yáng)性率為2.43%，弓形蟲(chóng)IgM陽(yáng)性率1.71%。

1965年，Hoffmann和Waid描述了使用患者數(shù)據(jù)的均值(正態(tài)均值)對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。之后，國(guó)外學(xué)者在臨床生化定量方面運(yùn)用日常檢測(cè)結(jié)果來(lái)進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控[ 9-10]，李金明等[2]、陳曲波等[3]建立了定性免疫測(cè)定HBsAg基于日常測(cè)定結(jié)果的室內(nèi)質(zhì)控方法，在ELISA定性免疫檢測(cè)方面給予了改進(jìn)，但在TORCH監(jiān)控中還未見(jiàn)報(bào)道。本研究使用標(biāo)本數(shù)據(jù)進(jìn)行質(zhì)控將節(jié)省成本，直接控制標(biāo)本的結(jié)果，而不是間接地推斷分析過(guò)程的質(zhì)量[5]，在沒(méi)有合適質(zhì)控物的情況下，是統(tǒng)計(jì)質(zhì)控方法的補(bǔ)充，可以提高檢驗(yàn)質(zhì)量。孕前檢測(cè)風(fēng)疹病毒IgG、巨細(xì)胞病毒IgG，主要是關(guān)注結(jié)果陰性的婦女，提示孕前接種疫苗和避免孕期感染，所以，用半Lerey-Jennings質(zhì)控圖，采用12S規(guī)則，監(jiān)控假陽(yáng)性的發(fā)生。當(dāng)小概率事件發(fā)生時(shí)(失控)，分析其原因是：第28、29次由于當(dāng)天工作量加大，可能是洗版不徹底，第31次是沒(méi)有新鮮配制洗液，導(dǎo)致弓形蟲(chóng)IgM失控。第55次巨細(xì)胞病毒IgG失控是洗板機(jī)管路不通暢。第36次和第57次弓形蟲(chóng)IgG/IgM失控，排除上述原因外是否與群體侍養(yǎng)寵物比例高有關(guān)，待查。失控后相關(guān)標(biāo)本一定重新檢測(cè)。因此，積極探討室內(nèi)質(zhì)控方法，并且控制好所有實(shí)驗(yàn)條件，才能保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確，因?yàn)榧訕?、洗板、溫育等?duì)ELISA方法均有影響。試劑盒的性能也需要進(jìn)一步的驗(yàn)證，因?yàn)轱L(fēng)疹病毒IgG和弓形蟲(chóng)IgG在臨界值范圍的標(biāo)本較多。所以，鑒于目前的方法學(xué)，巨細(xì)胞病毒IgM、弓形蟲(chóng)IgM陽(yáng)性和弓形蟲(chóng)IgG/IgM兩項(xiàng)均為陽(yáng)性的標(biāo)本，以及所有處于臨界值范圍的標(biāo)本，應(yīng)當(dāng)查找原因、復(fù)檢或進(jìn)一步做確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。

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·論著·

Study on quality control of ELISA method for screening TORCH infection

ChiShaoqin1,ChenYiwei1,ShiHongci1,SunYufei1,ZhengLixin2

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LonggangDistrictFamilyPlanningServiceCenter,Shenzhen,Guangdong

518172,China;2.GuangdongProvincialResearchInstituteofFamilyPlanningScience,Guangzhou,Guangdong510000,China)

Abstract:ObjectiveOnto investigate the indoor quality control method for qualitatively detecting the laboratory indicators of TORCH infection (rubella virus IgG,cytomegalovirus IgG and IgM,toxoplasma IgG and IgM).MethodsThe statistical method,normal distribution data,ratio and standard deviation of positive rate detected by the ELISA method were adopted,1+2swas set as the out of control rules,the semi Lerey-Jennings quality control chart was drawn;the direct probability calculation method was adopted for the non-normal distribution data and small probability event.The testing data of 57 batches were retrospectively analyzed.ResultsThe positive rate of rubella virus IgG was 86.66%,cytomegalovirus IgG/IgM positive rates were 98.87% and 0.13%,toxoplasma gondii IgG/IgM positive rates were 2.43% and 1.71%,the data of 151,3,5,176,27 samples had the critical value range of five indicators.The number of out of control was once for cytomegalovirus IgG,once and 4 times for Toxoplasma gondii IgG/IgM.ConclusionThe indoor quality control for the ELISA qualitative detection of TORCH infection can adopt the data of daily detection positive rate or negative rate for monitoring the false positive.The critical value range of specimens should be further conducted the recheck or confirmation experiment.

Key words:enzyme linked immunosorbent assay;qualitative detection;TORCH;indoor quality control

收稿日期：(2015-06-12)

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2015.24.017A

文章編號(hào)：1673-4130(2015)24-3550-02