馮秀艷,韓　翰,周偉強(qiáng)

(1. 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院遼寧省環(huán)境污染與微生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧 沈陽(yáng)　110034; 2. 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院內(nèi)分泌科,遼寧 沈陽(yáng)　110002)

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SAHA在Leptin誘導(dǎo)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖過(guò)程中的調(diào)控作用

馮秀艷1,2,韓翰1,周偉強(qiáng)1

(1. 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院遼寧省環(huán)境污染與微生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧 沈陽(yáng)110034; 2. 沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院內(nèi)分泌科,遼寧 沈陽(yáng)110002)

摘要:目的為了闡明SAHA調(diào)控Leptin誘導(dǎo)的乳腺癌ER+細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，我們采用實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記細(xì)胞分析系統(tǒng)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)Leptin對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的影響。方法通過(guò)自動(dòng)細(xì)胞分析儀Muse Cell Analyzer分析Leptin和SAHA對(duì)MCF-7細(xì)胞活力、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞周期產(chǎn)生的影響，并應(yīng)用細(xì)胞凋亡抗體芯片測(cè)定Leptin和SAHA兩種處理因素作用MCF-7細(xì)胞后相關(guān)凋亡通路分子表達(dá)變化的情況。結(jié)果低濃度Leptin對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)有誘導(dǎo)作用，其濃度為0.625 nmol·L-1時(shí)作用效果最明顯。細(xì)胞分析結(jié)果表明，SAHA能明顯抑制Leptin誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞增殖，經(jīng)SAHA處理后MCF-7細(xì)胞活力明顯下降，細(xì)胞凋亡率明顯增多，細(xì)胞被大量阻滯于G0/G1期。凋亡抗體芯片篩查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SAHA可明顯誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞內(nèi)促凋亡因子Bax、Caspase-3的表達(dá)，并且與凋亡產(chǎn)生密切相關(guān)的TRAIL DR5、p21CIP1蛋白的表達(dá)也明顯上升，Claspin、Clusterin、XIAP、Survivin蛋白的表達(dá)明顯下降，而Leptin對(duì)上述蛋白的表達(dá)具有相反作用。結(jié)論Leptin、SAHA對(duì)乳腺癌ER+細(xì)胞MCF-7的影響可能與乳腺癌細(xì)胞內(nèi)凋亡通路激活有關(guān)，特別是與內(nèi)源性線(xiàn)粒體凋亡通路引發(fā)的Caspase-3釋放密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：細(xì)胞凋亡；乳腺癌；雌激素受體陽(yáng)性細(xì)胞；MCF-7；SAHA；瘦素

乳腺癌是威脅女性健康的常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年來(lái)發(fā)病率已居全球女性惡性腫瘤首位。據(jù)臨床統(tǒng)計(jì)，乳腺癌患者中0.7～0.8為雌激素受體(estrogen receptor，ER)陽(yáng)性乳腺癌[1]，因此針對(duì)乳腺癌ER及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的研究成為探究乳腺癌發(fā)生、發(fā)展原因的重要內(nèi)容。瘦素(Leptin)是由167個(gè)氨基酸組成的16 ku蛋白質(zhì)。它通過(guò)與相應(yīng)受體OB-Rb結(jié)合而發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)。由于機(jī)體內(nèi)Leptin水平和乳腺癌發(fā)生有著千絲萬(wàn)縷的聯(lián)系，它可作為一種獨(dú)立危險(xiǎn)因素參與乳腺癌的形成過(guò)程[2]。研究表明，人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7有OB-Rb表達(dá)，并且Leptin可影響MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)，這可能與Leptin誘發(fā)乳腺上皮細(xì)胞分泌生長(zhǎng)因子，加速乳腺癌細(xì)胞周期進(jìn)程有關(guān)[3]。

隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)乙?；?、甲基化、泛素化、磷酸化、糖基化等表觀(guān)遺傳性狀改變?cè)谌橄侔┌l(fā)生、發(fā)展中具有重要的調(diào)控作用。其中乙?；揎椫饕怯绊懟蜣D(zhuǎn)錄活性，對(duì)基因組DNA序列無(wú)改變[4]。在正常乳腺細(xì)胞中，組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶(histone acetyltransferase, HAT)將乙酰輔酶A上的疏水乙酰基部分轉(zhuǎn)移至染色質(zhì)核心組蛋白氨基末端上特定賴(lài)氨酸殘基上，使DNA易于解聚、舒展，從而激活特定基因的轉(zhuǎn)錄。而組蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase, HDAC)則通過(guò)移去組蛋白氨基末端賴(lài)氨酸殘基的乙?；种苹虻霓D(zhuǎn)錄。在乳腺細(xì)胞功能異常時(shí)，HDAC的活性明顯增強(qiáng)，組蛋白處于低乙?；癄顟B(tài)，基因表達(dá)平衡狀態(tài)被破壞，使一些調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡的基因表達(dá)失衡，導(dǎo)致乳腺癌的形成[5-6]。

SAHA(suberoylanilide hydroxamic acid)作為繼HMBA(hexamethy lenebisacetamide)之后的第2代羥肟酸類(lèi)的組蛋白去乙?；敢种苿?，主要用于治療持續(xù)惡化或復(fù)發(fā)的T細(xì)胞淋巴瘤(CTCL)[7]。在本實(shí)驗(yàn)中，我們將觀(guān)察SAHA對(duì)Leptin誘導(dǎo)的乳腺癌ER+細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞增殖的影響，闡明SAHA調(diào)控Leptin誘導(dǎo)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的分子機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)；RPMI 1640培養(yǎng)基，胎牛血清、青霉素以及鏈霉素購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；SAHA和人重組Leptin蛋白購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司；Muse Cell Cycle kit、Muse Annexin & Dead Cell kit、Muse Count & Viability kit 試劑盒購(gòu)自德國(guó)Merck Millipore公司；人固相凋亡抗體芯片試劑盒購(gòu)自美國(guó)R&D公司；其它化學(xué)試劑購(gòu)自美國(guó)Sigma-Aldrich公司。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)將人乳腺癌MCF-7細(xì)胞用含0.1胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液(含100 mg·L-1青、鏈霉素)體積分?jǐn)?shù)為0.05的CO2、37 ℃飽和濕度下培養(yǎng)。

1.2.2實(shí)時(shí)細(xì)胞增殖檢測(cè)將1×107·L-1乳腺癌MCF-7細(xì)胞接種于xCELLigence實(shí)時(shí)無(wú)標(biāo)記動(dòng)態(tài)細(xì)胞分析系統(tǒng)的E-Plate 96板(Roche)各孔中，待細(xì)胞進(jìn)行無(wú)血清同步化處理后，各孔分別加入不同濃度的Leptin(0、0.625、1.25、2.5、6.25、12.5、62.5 nmol·L-1)進(jìn)行孵育，以DMSO為對(duì)照組。通過(guò)xCELLigence系統(tǒng)中各孔微電阻量的變化動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)0～60 h范圍內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。通過(guò)每孔中細(xì)胞指數(shù)(cell index, CI)的變化了解MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3細(xì)胞活力檢測(cè)將5×108·L-1乳腺癌MCF-7細(xì)胞接種于6孔板各孔中，無(wú)血清培養(yǎng)液同步化處理后加入0.625 nmol·L-1Leptin和20 μmol·L-1SAHA與MCF-7細(xì)胞共同孵育32 h。細(xì)胞活力及細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)參照試劑盒程序進(jìn)行。將與Leptin和SAHA孵育后的細(xì)胞經(jīng)胰酶消化，收集的2×105個(gè)細(xì)胞加入450 μL Count & Viability reagent靜置5 min后應(yīng)用自動(dòng)細(xì)胞分析儀Muse Cell Analyzer(Millipore)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.4細(xì)胞凋亡檢測(cè)按“1.2.2”方法將Leptin和SAHA與MCF-7細(xì)胞共同培養(yǎng)32 h后，收集1×106個(gè)細(xì)胞，與100 μL Muse Annexin V & Dead Cell reagent室溫孵育20 min。應(yīng)用自動(dòng)細(xì)胞分析儀Muse Cell Analyzer檢測(cè)各處理因素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡發(fā)生的情況。

1.2.5細(xì)胞周期檢測(cè)按“1.2.2”方法將Leptin和SAHA與MCF-7細(xì)胞共同培養(yǎng)32 h后，將收集的細(xì)胞300×g離心5 min后加入1 ml預(yù)冷的體積分?jǐn)?shù)為0.7的乙醇-20 ℃過(guò)夜孵育。將乙醇固定后的MCF-7細(xì)胞加入200 μL Muse Cell Cycle reagent室溫避光靜置30 min后，通過(guò)自動(dòng)細(xì)胞分析儀Muse Cell Analyzer測(cè)定細(xì)胞周期。

1.2.6固相凋亡抗體芯片檢測(cè)將大約1×107個(gè)經(jīng)Leptin和SAHA處理后的MCF-7細(xì)胞按抗體芯片試劑盒程序進(jìn)行裂解，14 000×g離心5 min后，應(yīng)用BCA蛋白分析試劑盒測(cè)定Leptin和SAHA各處理組樣品的蛋白濃度。將200 μg蛋白樣品液加入已放有抗體包被PVDF膜的4孔板，各孔中4 ℃振蕩過(guò)夜。然后將蛋白樣品-抗體膜經(jīng)PBS沖洗后分別加入1.5 mL生物素標(biāo)記的二抗振蕩孵育1 h。PVDF膜經(jīng)沖洗后加入HRP偶聯(lián)的鏈霉親和素孵育30 min。將等體積混合的ECL化學(xué)發(fā)光底物A、B 液均勻加在PVDF膜上，顯色5 min?；瘜W(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光后，應(yīng)用Gelpro Analyzer software(Media Cybernetics)計(jì)算膜上各抗體標(biāo)記點(diǎn)的灰度值來(lái)決定Leptin和SAHA各處理組對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡蛋白表達(dá)的影響。

2結(jié)果

2.1Leptin誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞增殖的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)為了解Leptin對(duì)乳腺癌ER+細(xì)胞MCF-7的誘導(dǎo)作用，我們應(yīng)用xCELLigence RTCA分析系統(tǒng)實(shí)時(shí)觀(guān)測(cè)不同濃度Leptin對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。從Fig 1中可以看出，低濃度Leptin對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)有刺激作用，0.625～6.25 nmol·L-1的Leptin都表現(xiàn)出較明顯的誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)的效應(yīng)，其中以0.625 nmol·L-1濃度的Leptin產(chǎn)生的誘導(dǎo)作用最明顯。但隨著Leptin作用時(shí)間的延長(zhǎng)，標(biāo)示細(xì)胞生長(zhǎng)的CI曲線(xiàn)在孵育48 h后趨于一致，由此在本實(shí)驗(yàn)中我們選定0.625 nmol·L-1濃度的Leptin為誘導(dǎo)MCF-7生長(zhǎng)的最適濃度，32 h為L(zhǎng)eptin作用MCF-7細(xì)胞的最適處理時(shí)長(zhǎng)。另外我們還發(fā)現(xiàn)，高濃度Leptin(12.5或62.5 nmol·L-1)處理的MCF-7細(xì)胞，其CI曲線(xiàn)明顯下降，這說(shuō)明高濃度Leptin對(duì)MCF-7細(xì)胞具有毒性作用，可明顯抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)。

2.2Leptin、SAHA對(duì)乳腺癌細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡的影響為了更直觀(guān)探究Leptin和SAHA對(duì)乳腺癌ER+細(xì)胞MCF-7生長(zhǎng)狀態(tài)的影響，我們分別應(yīng)用0.625 nmol·L-1Leptin和先前實(shí)驗(yàn)測(cè)定的針對(duì)MCF-7最適SAHA濃度(20 μmol·L-1)與MCF-7細(xì)胞孵育32 h后測(cè)定細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡。細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果顯示：與DMSO對(duì)照組相比，經(jīng)SAHA單獨(dú)處理后乳腺癌MCF-7細(xì)胞活力明顯下降，活細(xì)胞比率從0.86下降到0.76，而死細(xì)胞比率由0.14上升到0.24，與此對(duì)應(yīng)的是Leptin處理后活細(xì)胞比率上升至0.95，表明Leptin誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)的效果很明顯(Fig 2A)。細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果顯示：與DMSO對(duì)照組相比，SAHA處理后的MCF-7細(xì)胞出現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡，細(xì)胞的早、晚期凋亡誘導(dǎo)率分別達(dá)到0.04和0.45，而Leptin處理后的MCF-7細(xì)胞早、晚期凋亡誘導(dǎo)率則為0.01和0.04(Fig 2B)。

2.3Leptin和SAHA對(duì)乳腺癌細(xì)胞周期的影響我們觀(guān)察了Leptin和SAHA對(duì)MCF-7細(xì)胞周期產(chǎn)生的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)， Leptin和SAHA對(duì)MCF-7細(xì)胞周期的影響程度有明顯的不同。經(jīng)SAHA處理后，MCF-7細(xì)胞大多被阻抑于G0/G1期，G0/G1期細(xì)胞比率從DMSO對(duì)照組的0.69上升到0.81，S期細(xì)胞比率從0.21下降到0.10，而G2/M期比率無(wú)明顯變化；Leptin處理后MCF-7細(xì)胞G0/G1期、G2/M期細(xì)胞比率分別下降到0.58和0.03，而S期比率則上升到0.39(Fig 3)。這說(shuō)明Leptin和SAHA對(duì)MCF-7細(xì)胞周期的影響主要集中在S期，對(duì)G2/M期進(jìn)程的影響不明顯。

2.4Leptin和SAHA對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡相關(guān)分子表達(dá)變化的影響為了明確Leptin和SAHA對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡影響的途徑，我們應(yīng)用固相細(xì)胞凋亡抗體芯片，測(cè)定了Leptin和SAHA兩種處理因素對(duì)MCF-7細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)所產(chǎn)生的變化。結(jié)果表明，單獨(dú)SAHA處理可明顯誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞內(nèi)促凋亡因子Bax、Caspase-3的表達(dá)，并抑制Claspin、Clusterin、XIAP、Survivin蛋白的表達(dá)，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)；而Leptin則作用相反，經(jīng)0.625 nmol·L-1Leptin作用后，MCF-7細(xì)胞的Bax、Caspase-3的表達(dá)明顯下降，而Clusterin、Claspin、XIAP、Survivin的表達(dá)明顯上升，與對(duì)照組相比其差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。另外我們還發(fā)現(xiàn)，與凋亡產(chǎn)生密切相關(guān)的TRAIL DR5、p21CIP1在SAHA的作用下也明顯升高(Fig 4，Tab1)。

*P<0.05,**P<0.01vsBasal

3討論

雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌作為最主要的乳腺癌類(lèi)型，研究其特有的生物學(xué)特性，進(jìn)而完善其內(nèi)分泌治療手段和尋找抑制其轉(zhuǎn)移的新方法都具有重要的臨床價(jià)值。

近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)瘦素作為重要的脂肪因子廣泛參與多種腫瘤如卵巢癌、乳腺癌、腎癌等的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。有研究指出瘦素可作為乳腺癌一種新的促生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞增殖，且與乳腺癌分期、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展全過(guò)程[8]。在本實(shí)驗(yàn)中，我們應(yīng)用外源性L(fǎng)eptin與人乳腺癌ER+細(xì)胞MCF-7共同孵育，發(fā)現(xiàn)低濃度Leptin(0.625～6.25 nmol·L-1)可明顯刺激MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)，其中0.625 nmol·L-1Leptin誘導(dǎo)增殖的效果最明顯。相關(guān)細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，在0.625 nmol·L-1Leptin誘導(dǎo)下，MCF-7細(xì)胞活力增強(qiáng)，細(xì)胞凋亡發(fā)生率下降，進(jìn)入S期細(xì)胞增多。這些數(shù)據(jù)都從不同角度證實(shí)了Leptin確實(shí)有誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的特性，并且Leptin可能通過(guò)自分泌或旁分泌方式擴(kuò)大傳播增殖信號(hào)以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素作用的結(jié)果，其中離不開(kāi)表觀(guān)遺傳學(xué)病因的作用。組蛋白乙?；揎検潜碛^(guān)遺傳學(xué)中的重要組成部分，當(dāng)去乙?；富钚栽鰪?qiáng)時(shí)組蛋白低乙酰化，阻礙基因轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子結(jié)合蛋白進(jìn)入啟動(dòng)子結(jié)合位點(diǎn)，從而抑制特定基因的轉(zhuǎn)錄。近年來(lái)，相關(guān)乳腺癌Ⅱ期臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SAHA表現(xiàn)出良好的抑瘤療效[9]。在本實(shí)驗(yàn)中，SAHA也顯示出明顯的抑制MCF-7增殖的特性。經(jīng)20 μmol·L-1SAHA處理MCF-7細(xì)胞后，細(xì)胞活力明顯降低，早晚期細(xì)胞凋亡發(fā)生率明顯增多，細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示，SAHA處理后MCF-7細(xì)胞被大量阻滯于G0/G1期。

為了探究Leptin、SAHA對(duì)乳腺癌ER+細(xì)胞的影響，我們應(yīng)用固相細(xì)胞凋亡蛋白芯片篩查了Leptin、SAHA作用MCF-7細(xì)胞后相關(guān)凋亡因子表達(dá)的變化。從結(jié)果中可以看出，在Leptin的作用下，MCF-7細(xì)胞內(nèi)Bax、Caspase-3的表達(dá)明顯降低，XIAP、Survivin、Clusterin表達(dá)增加；而SAHA處理后的細(xì)胞Bax、Caspase-3的表達(dá)明顯上升，XIAP、Survivin、Clusterin表達(dá)下降。Bax是一種重要的凋亡促進(jìn)因子，它可形成二聚體并抑制Bcl-2、Bcl-x的表達(dá)而促進(jìn)凋亡的產(chǎn)生[10]。Caspase-3作為凋亡過(guò)程中最重要的關(guān)鍵反應(yīng)元件，是細(xì)胞凋亡的主要執(zhí)行者和效應(yīng)分子，是多種凋亡激活信號(hào)傳遞的匯集點(diǎn)，它的活化是凋亡發(fā)生進(jìn)入不可逆階段的標(biāo)志[11]。而Survivin作為凋亡抑制因子，可直接抑制Caspase-3、Caspase-7的活性，從而抑制凋亡，有利于癌細(xì)胞的異常增殖和惡性轉(zhuǎn)化[12]。XIAP(X-linked inhibitor of apoptosis protein)是凋亡抑制蛋白家族成員，可通過(guò)抑制凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中Caspase分子的活性而對(duì)細(xì)胞凋亡產(chǎn)生抑制作用[13]。Clusterin可通過(guò)與細(xì)胞質(zhì)中Bax共同作用抑制細(xì)胞色素C的釋放而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的[14]。因此，從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，Leptin、SAHA對(duì)乳腺癌ER+細(xì)胞MCF-7的影響可能與乳腺癌細(xì)胞內(nèi)凋亡通路是否激活，特別是內(nèi)源性線(xiàn)粒體凋亡通路引發(fā)的Caspase-3釋放密切相關(guān)。

在本實(shí)驗(yàn)中，當(dāng)用Leptin或SAHA處理MCF-7細(xì)胞后，TRAIL DR5受體表達(dá)發(fā)生明顯變化。TRAIL DR受體是TRAIL (TNF related apoptosis-inducing ligand)功能受體，負(fù)責(zé)傳遞細(xì)胞外凋亡信號(hào)，激活細(xì)胞內(nèi)多種誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡蛋白的表達(dá)。有研究證實(shí)，在乳腺癌組織中TRAIL的表達(dá)遠(yuǎn)低于正常乳腺組織，而DR受體也呈現(xiàn)低表達(dá)，這提示乳腺癌的發(fā)生可能與TRAIL失活有關(guān)，也可能與TRAIL受體表達(dá)低引起的凋亡信號(hào)傳遞不足出現(xiàn)凋亡逃逸有關(guān)[15]。在本實(shí)驗(yàn)中，Leptin抑制了MCF-7細(xì)胞表面TRAIL DR5受體的表達(dá)，而SAHA處理后TRAIL DR5受體表達(dá)明顯上升。因此，我們推測(cè)，在Leptin或SAHA作用乳腺癌MCF-7細(xì)胞過(guò)程中，TRAIL DR5受體介導(dǎo)的外源性死亡受體通路可能參與了相應(yīng)的生物學(xué)作用。

綜上所述，在本實(shí)驗(yàn)中，我們系統(tǒng)地研究了Leptin、SAHA對(duì)乳腺癌ER+細(xì)胞系MCF-7細(xì)胞活力和細(xì)胞凋亡變化的影響，通過(guò)形態(tài)學(xué)觀(guān)察、細(xì)胞周期測(cè)定了解Leptin、SAHA對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的作用，并應(yīng)用凋亡抗體芯片探討了Leptin、SAHA作用MCF-7細(xì)胞后相關(guān)凋亡通路及分子表達(dá)變化的情況，我們的研究工作有助于深入理解SAHA調(diào)控Leptin誘導(dǎo)的乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的分子機(jī)制，為不遠(yuǎn)的將來(lái)研發(fā)新型抗乳腺癌藥物奠定一定的理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

(致謝：衷心感謝沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院“遼寧省環(huán)境污染與微生態(tài)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室”為本實(shí)驗(yàn)提供的實(shí)驗(yàn)資源及實(shí)驗(yàn)設(shè)備；感謝實(shí)驗(yàn)室全體工作人員對(duì)本實(shí)驗(yàn)的大力協(xié)助。)

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cell line MCF-7 induced by leptin. MethodsHuman breast cancer cell MCF-7 was incubated with SAHA and/or leptin, and cell viability, apoptosis and cell cycle of MCF-7 cells were detected by Muse Cell Analyzer. The expression of proteins related with apoptosis was determined by apotosis antibody array. ResultsReal-time cell proliferation assays indicated that the induction effect of leptin for MCF-7 cells reached the peak at a concentration of 0.625 nmol·L-1. SAHA reduced the viability of MCF-7 cells, induced G0/G1phase arrest in the cell cycle, and triggered the apoptosis. Meanwhile, SAHA significantly induced the protein expressions of some apoptotic factors, including Bax, Caspase-3, TRAIL DR5, p21CIP1, and inhibited the expressions of Claspin, Clusterin, x-linked inhibitor of apoptosis protein(XIAP) and survivin. However, leptin had reverse effects on the related expression of the proteins. ConclusionThe effects of cell proliferation by leptin and SAHA treatment in breast cancer ER positive cell line MCF-7 may involve in the activation of apoptosis pathway, in particular with releasing of Caspase-3 trigged by endogenous mitochondrial apoptosis pathway.

Regulation of SAHA on cell proliferation induced by leptin in breast cancer cell line MCF-7

FENG Xiu-yan1，2, HAN Han1,ZHOU Wei-qiang1

(1.KeyLaboratoryofEnvironmentalPollutionandMicroecologyofLiaoningProvince,ShenyangMedicalCollege,Shenyang110034,China;2.DeptofEndocrinology,the2ndHospitalofShenyangMedicalCollege,Shenyang110002，China)

Key words：cell apoptosis; breast cancer; estrogen receptor positive; MCF-7; SAHA; leptin

Abstract:To clarify the molecular mechanism of SAHA in the cell proliferation of ER-positive breast cancer

收稿日期:2015-12-24,修回日期:2016-02-08

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81172509)；遼寧省教育廳基金資助項(xiàng)目(No L2012370)

作者簡(jiǎn)介:馮秀艷(1972-)，女，碩士，研究方向：抗癌藥物分析，E-mail：fengxy1972@hotmail.com； 周偉強(qiáng)(1970- )，男，博士，教授，研究方向：腫瘤調(diào)控，通訊作者,E-mail：zhouwq@hotmail.com

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.04.013

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1978(2016)04-0503-06

中國(guó)圖書(shū)分類(lèi)號(hào)：R329.24；R329.25；R392.11；R737.9；R977.12

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-3-18 11:22網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160318.1122.026.html