王亞男　師　偉　呂姝菡　劉好宇　劉金星

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東　濟南　250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東　濟南　250014

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盆腔炎后遺癥動物模型的研究進展

王亞男1師偉1呂姝菡1劉好宇1劉金星2*

1.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟南250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，山東濟南250014

【摘要】盆腔炎性疾病后遺癥動物模型作為盆腔炎后遺癥發(fā)病機制、預(yù)防、治療、開發(fā)新藥的重要載體，在盆腔炎性疾病后遺癥的研究中發(fā)揮著極為重要的作用。筆者通過對目前SPID動物造模方法進行總結(jié)，從手術(shù)及非手術(shù)方面對其建立的方法進行綜述。

【關(guān)鍵詞】盆腔炎性后遺癥；動物模型；研究進展；綜述

盆腔炎性疾病后遺癥[1](sequelae of pelvic inflammatory disease,SPID)SPID)是盆腔炎性疾病未得到及時正確的診斷治療，而發(fā)生的女性上生殖道及周圍組織破壞、粘連、增生、瘢痕、積水及腫物形成等一系列的后遺癥，既往稱慢性盆腔炎?？梢鸩辉?、異位妊娠、慢性盆腔痛，常反復(fù)發(fā)作，從而嚴(yán)重影響婦女的生殖健康及生活質(zhì)量。動物模型對于全面深入系統(tǒng)的研究SPID 具有重要意義，隨著科研技術(shù)的不斷進步發(fā)展，SPID 的造模方法也在逐漸完善，現(xiàn)總結(jié)如下。

1手術(shù)法

1.1異物置入誘發(fā)的模型將異物置入子宮體內(nèi)，可引發(fā)局部炎性反應(yīng)及機體的免疫反應(yīng)。吳虓飛等[2]將大鼠麻醉后做背部縱切口，暴露右側(cè)子宮，在卵巢下1cm處作一切口，將消毒后的塑料管放入子宮內(nèi)，并與子宮切口縫合固定，觀察子宮明顯紅腫，子宮壁增厚，較左側(cè)的子宮明顯變粗，子宮明顯腫脹，即完成造模。

1.2化學(xué)性燒傷誘發(fā)的模型目前通常采用苯酚膠漿法，因該法操作簡單，造模成功率高，因而在SPID大鼠模型中應(yīng)用較廣泛，通過苯酚對局部組織的化學(xué)性燒傷而達致炎目的，建立慢性盆腔炎動物模型。研究中常用苯酚膠漿( 苯酚、西黃芪膠、甘油加水制成或由液化苯酚、蒸餾水以及羧甲基纖維素鈉配置而成)。馬云等[3]采用一側(cè)子宮注入，麻醉大鼠后，于下腹部正中切口2cm，暴露子宮，用注射器，于子宮分岔處進針入子宮腔內(nèi)，朝右側(cè)方向緩慢推注苯酚膠漿，術(shù)畢，逐層關(guān)腹，造模完成。呂曉軍等[4]亦采取開腹單側(cè)注入苯酚膠漿法,使子宮內(nèi)膜腔壁結(jié)構(gòu)改變，上皮細胞增生、變性及壞死，慢性炎癥細胞浸潤，造模成功。劉慶等[5]采用鹽酸致炎法，麻醉大鼠后,行剖腹術(shù),暴露子宮,向雙側(cè)宮腔注入0.3mol/L鹽酸,以管腔充盈為度,關(guān)腹。鏡下可見管壁變薄,部分上皮變性、脫落,黏膜下層充血、水腫,炎細胞浸潤,造模成功。

1.3器械損傷聯(lián)合細菌感染誘發(fā)的模型機械損傷和慢性刺激也是誘發(fā)盆腔炎的主要原因之一。流行病學(xué)研究指出[6],使用宮內(nèi)節(jié)育器者較不使用者患盆腔炎的危險提高,有宮腔操作史的患盆腔炎的危險率明顯增高。臨床研究者在細菌感染致炎造模方法基礎(chǔ)上加入了機械損傷這一操作，造模成功率高，故被越來越多的采納運用。而手術(shù)法與細菌法相結(jié)合方便了模型的建立，臨床上常采用單一細菌聯(lián)合機械損傷法盆腔炎模型和混合細菌聯(lián)合機械損傷法盆腔炎模型兩種。

1.3.1單一細菌聯(lián)合機械損傷法盆腔炎模型目前臨床[7-9]多采用大腸桿菌所致大鼠慢性盆腔炎模型，造模方法是開腹后暴露并固定右側(cè)子宮,用注射器抽取大腸桿菌懸液,用機械損傷子宮內(nèi)膜組織后注入菌液，按照病理觀察指標(biāo)及積分標(biāo)準(zhǔn)評判，實驗組與空白組指標(biāo)差異性顯著提高，造模成功。

1.3.2混合細菌聯(lián)合機械損傷法盆腔炎模型法楊林波等[10]將大鼠子宮暴露后，將混合細菌懸液(按大腸桿菌與金黃色葡萄球菌2∶1的比例)在注射器機械損傷子宮內(nèi)膜組織后注入宮腔，肉眼觀察到模型組盆腔充血，纖維組織粘連明顯，即成功制備動物模型。孫晶等[11]用烏拉坦進行腹腔麻醉，麻醉滿意后，動物取俯臥位，固定頭和四肢于操作臺上。背部碘伏消毒，分別取雙側(cè)子宮、輸卵管、卵巢體表投射區(qū)切口，長約1cm，用眼科手術(shù)器械找出子宮，用注射器抽取混合細菌懸液(按大腸桿菌、乙型溶血性鏈球菌和金黃色葡萄球菌2∶1∶1比例)，沿輸卵管-卵巢方向于宮腔內(nèi)緩慢注射，每側(cè)注入0.1ml菌液，縫合切口處肌肉組織及皮膚，局部組織充血、水腫，提示造模成功。師偉等[12]亦使用混合菌加機械損傷造模法造模成功。

2非手術(shù)法

因臨床多數(shù)盆腔炎患者是由病原體從外生殖器上行感染所致，主要包括外源性病原體(沙眼衣原體、淋病奈瑟菌和支原體等)和內(nèi)源性病原體(需氧菌和厭氧菌)，當(dāng)女性生殖道的自然防御功能遭破壞，或機體免疫功能降低、內(nèi)分泌發(fā)生變化時，下生殖道的病原體上行，或外源性病原體侵入，均可導(dǎo)致盆腔炎發(fā)生，因而非手術(shù)即病原體下行感染所誘發(fā)的動物模型更接近人類盆腔炎。

2.1沙眼衣原體感染小鼠模型陳木開等[13]通過對小鼠陰道內(nèi)接種小鼠肺炎沙眼衣原體,21d內(nèi)輸卵管發(fā)生急性炎癥,21d后輸卵管出現(xiàn)扭曲、積水等慢性炎癥，提示造模成功。Jalal H等[14]在沙眼衣原體接種前，將小鼠皮下注射醋酸甲羥孕酮 2.5mg，實驗組分別于陰道內(nèi)接種30μl E型Ct懸液( 約2.5×107IFU/ml) ，對照組接種 30μl SPG，空白組不做任何處理。35d后實驗組小鼠雙側(cè)子宮增粗，呈氣球樣腫脹，質(zhì)硬，宮腔內(nèi)積膿積液，證明造模成功。韓建德等[15]通過對小鼠陰道內(nèi)接種肺炎沙眼衣原體,3周后輸卵管出現(xiàn)扭曲、阻塞、積水等慢性炎癥,提示造模成功。

2.2解脲支原體感染模型因人是支原體的唯一宿主，Taylor Robinson 等[16]發(fā)現(xiàn)用雌激素將小鼠預(yù)處理的方法，可以成功的建立生殖道解脲支原體的感染模型，而沒有經(jīng)過雌激素預(yù)處理過的小鼠，無法在生殖道完成定植。這種造模方法一直在解脲支原體研究中廣泛的借鑒、應(yīng)用。Zhu GX等[17]將小鼠用E2預(yù)處理后，在陰道注射解脲支原體懸液，3周后肉眼可見子宮及輸卵管一定程度的水腫,光鏡下觀察間質(zhì)中性粒細胞不同程度的浸潤,腺體擴張增生，提示造模成功。Shkarupeta 等[18]參照 Taylor Robinson 的造模方法，用 BALB /c 小鼠建立了人型支原體感染的模型。劉弘等[19]采用雌性小鼠制模,造模前小鼠陰道分泌物解脲支原體培養(yǎng)均為陰性,然后將小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇注射液,每周1次,共4次。第二次注射后在陰道接種解脲支原體感染液,待液體被陰道載膜完全吸收后放回籠內(nèi),分籠喂養(yǎng)。每天接種1次,連續(xù)3次。1周后再加強接種感染液1次。造模結(jié)束后1周取小鼠陰道分泌物進行解脲支原體液體培養(yǎng)。模型組肉眼可見輸卵管水腫,光鏡下觀察載膜層及間質(zhì)中性粒細胞的不同程度的浸潤,腺體擴張或增生，間質(zhì)疏松水腫，提示造模成功。

2.3解脲脲原體感染小鼠模型鄭冰潔[20]在研究解脲脲原體14血清型BALB/C小鼠感染模型中發(fā)現(xiàn)，將小鼠經(jīng)雌激素預(yù)處理后經(jīng)陰道接種無菌Uu液體培養(yǎng)基及顏色改變單位濃度為1×107CCU/ml的各型標(biāo)準(zhǔn)菌液，21d后送病理，1/3/11/8以慢性炎癥為主，表現(xiàn)為漿細胞、嗜酸性粒細胞浸潤，宮腔腺體擴張粘連等。為進一步準(zhǔn)確建立盆腔炎性疾病后遺癥動物模型做了準(zhǔn)備。

2.4淋病奈瑟菌感染大鼠模型淋病奈瑟菌的唯一宿主是人類,淋病研究一直為缺乏有效的動物模型所困擾。人類細胞膜上存在多種參與淋病奈瑟菌黏附定植的特異性受體,如菌毛受體hCD46、Opa蛋白受體hCEACAM1等。因此,表達hCD46和hCEACAM1的轉(zhuǎn)基因小鼠可望成為淋病研究的理想動物模型。Jerse[21]將雌二醇緩釋藥丸植入小鼠的真皮內(nèi)，同時再注射抗生素,取淋病奈瑟菌混懸液接種于小鼠陰道內(nèi),成功建立了較好的淋病奈瑟菌小鼠感染模型,并利用該模型進行了疫苗研究方面的深入探討。劉海鵬等[22]利用 17-β-雌二醇將小鼠預(yù)處理后,取淋病奈瑟菌混懸液用加樣槍接種于小鼠陰道內(nèi),動態(tài)監(jiān)測小鼠陰道分泌物，發(fā)現(xiàn)小鼠感染時間并不是很長，需進一步研究。

2.5非手術(shù)化學(xué)燒傷法誘發(fā)的模型付桂香等[23]用錐形靜脈切開針，進入陰道深部注入苯酚膠漿，模型組左側(cè)子宮內(nèi)膜腺上皮明顯增生增厚,上皮層次明顯增多,核分裂相較多見,上皮細胞有變性壞死,呈扁平狀,上皮下增生的淋巴細胞較多,成功制作了大鼠陰道及宮頸炎模型。

3小結(jié)

隨著對盆腔炎后遺癥發(fā)病機制的不斷深入研究和探討,動物實驗?zāi)Ｐ鸵嘣诓粩嗟匮葑?。只有選擇與人類盆腔炎相近的感染源、感染途徑、病變特點的動物實驗?zāi)Ｐ?才能提高動物模型與臨床疾病的一致性，進一步較客觀地評價出藥物的療效。臨床上，盆腔炎性疾病后遺癥多是有盆腔炎性疾病未得到及時正確的診斷或治療引發(fā)的，屬于一個慢性遷延的過程，而目前，國內(nèi)絕大多數(shù)盆腔炎性后遺癥動物模型所采用的造模方法為手術(shù)聯(lián)合細菌感染或單純化學(xué)燒傷的方法，國外多采用支原體與衣原體感染所致的陰道上行感染動物模型，所復(fù)制的模型大多是在急性感染階段，并不符合盆腔炎性疾病后遺癥的病變特點。而下生殖道長期上行感染病原菌及手術(shù)急性感染期后的慢性遷延期，較符合臨床發(fā)病情況與診段。國內(nèi)盆腔炎性疾病后遺癥主要通過陰道上行感染需氧菌，如大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，支原體、衣原體而致的疾病，建議應(yīng)進一步開展不同感染源陰道上行感染致炎模型的研究,如能造模成功,其藥物療效就更有針對性,治療盆腔炎后遺癥的中藥新藥的藥效學(xué)評價體系將更科學(xué)、規(guī)范和完善。

參考文獻

[1]謝幸，茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：258-264.

[2]吳虓飛,金翠英，周建平，等.參靈膠囊對動物慢性盆腔炎的治療作用[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012，43(1) : 79-84.

[3]馬云,羅艷琴，宋路遙，等.菝葜治療慢性盆腔炎有效部位的藥效學(xué)篩選研究[J] South Med Univ, 2013, 33(1): 145-149.

[4]呂曉軍，何開勇，潘望平，等.赤母婦炎寧膠囊治療慢性盆腔炎的實驗研究[ J] 中國醫(yī)藥導(dǎo)報,2015,12(4):23-28.

[5]劉慶，吳高媛．中藥穴位注射加CO2激光照射對大鼠子宮內(nèi)膜炎的病理形態(tài)學(xué)及免疫功能的影響[J].中國計劃生育學(xué)雜志，2005,16(7):413-416.

[6]何品姝.放取宮內(nèi)節(jié)育器與人工流產(chǎn)術(shù)后感染的問題[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2003, 19(10):1315-1316.

[7]谷風(fēng)，陶紅星，沈祖泓，等.澤丹沖劑對盆腔炎性大鼠子宮 TGF-β1、 Smad 3 的影響研究[J]陜西中醫(yī)，2015,33(1):120-122.

[8]張三元,聞莉.大腸桿菌所致大鼠慢性盆腔炎動物模型的建立[J] 醫(yī)學(xué)研究通訊,2001,33(2):11-14.

[9]向紹杰,孟莉,喬敏,等.盆炎凈顆粒對大腸桿菌所致大鼠慢性盆腔炎模型的影響[J]2009,26(5)：17-19.

[10]楊林波,江偉華，巴東嬌，等.柳葉蠟梅灌腸劑對慢性盆腔炎大鼠子宮病理形態(tài)學(xué)的影響,[J] 中國中醫(yī)藥科技,2012，19(4):344-345.

[11]孫晶，陳瑩.婦炎寧湯對慢性盆腔炎模型大鼠體內(nèi)炎癥細胞因子及粘連相關(guān)指標(biāo)的影響, [J]中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2015，33(7):1729-1732.

[12]師偉,劉瑞芬,楊曉娜，等.活血化瘀法對慢性盆腔炎雌性大鼠血清前炎癥細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-8水平的影響，[J]中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2012,9(32):1-2.

[13]陳木開, 韓建德, 陳小紅, 等. M oPn沙眼衣原體致小鼠生殖道感染模型的初步研究 [J]. 中國人畜共患病雜志, 2004, 20(8):687.

[14]Jalal H，Verlander NQ，Kumar N，et al.Genital chlamydial infection: association between clinical features， organism genotype and load[J]．J Med Microbiol，2011， 60( Pt 7) : 881-888．

[15]韓建德,陳木開,李斌,等.沙眼衣原體致小鼠輸卵管炎的病理研究「J].中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版),2005,26(5):520-522,532.

[16]Taylor Robinson D，F(xiàn)urr PM．Observations on experimental colonisation of mice by ureaplasmas of human origin． Med Microbiol， 2002( 51) : 866-870．

[17]Zhu GX, Lu C, Chen CJ,et al.Pathogenicity of Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum in the lower genital tract of female BALB/c mice [J].Can J Microbiol，2011,57 (12): 987-92.[18]Shkampeta MM， Govorun VM． Experimental Mycoplasma hominis Infection of the genital tract in BALB /c mice [J]． Immunology and microbiology，2004，1: 53-56．

[19]劉弘,趙紅,苑賀英,等.解脈支原體血清8型感染小鼠盆腔炎癥性疾病模型的建立「J].中日友好醫(yī)院學(xué)報,2011,25(2):98-100,121.

[20]鄭冰潔．生殖道支原體流行病學(xué)研究及BALB/c小鼠下生殖道感染模型建立[D].北京:北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院研究生院,2014:31-72.

[21]Jerse AE,Wu H,Packiam M,et al.Estradiol-Treated Female Mice as Surrogate Hosts for Neisseria gonorrhoeae GenitalTract Infections [J].Front Microbiol,2011,2:107.

[22]劉海鵬,廖芳.淋病奈瑟菌感染動物模型的建立及探討[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2005,5(6):762-764.

[23]付桂香，李平，賈麗娜，等．婦科消炎0號在大鼠和小鼠的抗炎和抗菌作用[ J]. 中國新藥雜志, 2008, 17(14):1233-1237.

基金項目：國家自然基金項目(81373675)；山東省基金編號(ZR2010HL063)。

作者簡介：王亞男(1990-)，女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向：中醫(yī)婦科疾病的臨床研究。 通信作者：劉金星，男，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)婦科疾病的臨床研究，E-mail：ljx276@sina.com

【中圖分類號】R711.33

【文獻標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)10-0042-02

(收稿日期：2016.03.24)