長效GLP-1類似物HYHN抗糖尿病藥理作用評價

楊苗苗，李彩娜，白國良，王 星，申竹芳

（北京協和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院藥物研究所，北京100050）

T5代謝性疾病

T5-1

長效GLP-1類似物HYHN抗糖尿病藥理作用評價

楊苗苗，李彩娜，白國良，王 星，申竹芳

（北京協和醫(yī)學院中國醫(yī)學科學院藥物研究所，北京100050）

摘要：目的評價長效GLP-1類似物HYHN的降血糖作用，分析不同給藥頻率對其降血糖作用的影響，初步研究其抗糖尿病相關機制。方法以正常ICR小鼠為模型，隨機分為正常對照、HYHN不同劑量（2.5，5和10 mg·kg-1）組和陽性對照組。于單次皮下注射給藥后不同時間，分別灌胃給予葡萄糖負荷（2 g·kg-1），考察HYHN對小鼠糖負荷后30 min血糖的降低作用及作用持續(xù)時間；另三組動物分別為正常對照組、HYHN 5 mg·kg-1qd組和HYHN 5 mg·kg-1q5d組，以糖負荷后30 min血糖為指標，比較HYHN不同給藥頻率的作用差異；采用小鼠NIT-1胰島β細胞，考察HYHN對細胞活力的影響，并瞬時轉染GLP-1受體通路報告基因質粒，研究其受體激活活性；用小鼠原代胰島，考察其對胰島素分泌的影響及其特點。結果HYHN單次給藥可劑量依賴性地降低小鼠糖負荷后血糖，10 mg·kg-1在給藥后第6天的降糖百分數仍可達29.2%；HYHN 5 mg·kg-1qd和q5d對小鼠糖負荷后血糖的降低作用相當（20.2%vs25.9%）。HYHN在10-9~10-6mol·L-1范圍內，能夠不同程度地激活GLP-1受體；在10-8~10-6mol·L-1范圍內，能夠濃度依賴性增加NIT-1細胞的活力。在高糖條件下（16.8 mmol·L-1），HYHN 10-8和10-6mol·L-1分別使小鼠原代胰島分泌胰島素的能力增加6倍以上，但對低糖條件下（2.8 mmol·L-1）的胰島素分泌無影響。結論HYHN具有長效和明顯的降血糖作用，不同給藥頻率的降血糖作用相當。作用機制主要與其激活GLP-1受體、促進NIT-1細胞增殖和葡萄糖依賴性地促進胰島素分泌有關。

關鍵詞：HYHN；降血糖作用；給藥頻率；胰島素分泌

T5-2

高表達Sptlc2基因促油酸誘導的HSC-T6細胞凋亡及自噬

傅 念1*，陳 穎1*，陽學風1，劉 青1，張 文1，陳臨溪2

（1.南華大學附屬南華醫(yī)院，湖南衡陽 421002；2.南華大學藥物藥理研究所，湖南衡陽 421001）

摘要：目的明確神經酰胺從頭合成途徑關鍵酶絲氨酸棕櫚酰轉移酶長鏈亞基2（Sptlc2）對肝星狀細胞（HSC-T6）凋亡及自噬的影響。方法體外培養(yǎng)HSC-T6細胞株，分正常對照組、油酸組、空載體組、Sptlc2轉染組，除正常對照組外，其余各組均采用100 μmol·L-1油酸共培養(yǎng)HSC-T6細胞。轉染48 h后，檢測各組HSC-T6細胞內Sptlc2 mRNA表達情況。流式細胞儀檢測各組HSC-T6細胞凋亡情況。MDC染色法熒光顯微鏡下觀察各組HSC-T6細胞內自噬體數量。Western blotting技術檢測凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2，自噬標志蛋白LC3B，自噬相關蛋白Atg5、Beclin-1的表達情況。結果Sptlc2轉染組總凋亡率明顯升高，與油酸組、對照組比較差異具有顯著統計學意義（P<0.01）。MDC染色示，Sptlc2轉染組與油酸組、空載體組比較，自噬體數量明顯增多。Sptlc2轉染組凋亡相關蛋白Bax表達明顯增加，凋亡相關蛋白Bcl-2表達明顯減少，Bax/Bcl-2比值明顯變大，與油酸組、空載體組比較差異具有顯著統計學意義（P<0.01）；Sptlc2轉染組與油酸組、空載體組比較，自噬標志蛋白LC3B-Ⅱ表達明顯增加，自噬標志蛋白LC3B-Ⅰ表達明顯減少，LC3B-Ⅱ/LC3B-I比值明顯變大，差異具有顯著統計學意（P<0.01）；同時，自噬相關蛋白Beclin-1、Atg5表達均增加，差異具有統計學意義（P<0.05）。結論油酸可以誘導HSCT6細胞凋亡及自噬。上調神經酰胺從頭合成途徑關鍵酶Sptlc2可以促進油酸誘導的HSC-T6細胞凋亡及自噬。

關鍵詞：Sptlc2基因；油酸；HSC-T6；細胞凋亡；自噬

*共同第一作者。

T5-3

Sirt1在高糖刺激腎小球微血管內皮細胞損傷中的作用

侯碧玉，張 莉，杜冠華

（中國醫(yī)學科學院北京協和醫(yī)學院藥物研究所，藥物靶點研究和新藥篩選北京市重點實驗室，北京 100050）

摘要：目的糖尿病腎病是造成糖尿病患者高致殘率高死亡率的重要原因，沉默信息調節(jié)因子（Sirt1）主要參與細胞衰老、代謝、凋亡等生理和病理過程，在多種代謝性疾病中發(fā)揮了重要作用。本實驗研究高糖環(huán)境對腎小球微血管內皮細胞的損傷，探索Sirt1在其中的作用。方法采用葡萄糖30 mmol·L-1損傷人源腎小球微血管內皮細胞（HRGEC）24 h，加入Sirt1激活劑或抑制劑繼續(xù)作用24 h后檢測細胞活力，并通過Transwell實驗考查細胞通透性，ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)液上清中IL-6含量，采用DCFH-DA探針檢測活性氧（ROS）含量，并采用高內涵方法檢測線粒體膜電位變化。結果高糖作用后內皮細胞活力顯著下降，相較于正常細胞下降13.51%，內皮細胞通透性增加（P<0.05）。高糖造成細胞炎癥反應加強，同時線粒體膜電位顯著下降（P<0.01），細胞內ROS產生增加（P<0.01）。經過高糖培養(yǎng)的內皮細胞Sirt1表達水平下降，高糖條件下給予HRGEC 10 μmol·L-1Sirt1激活劑白藜蘆醇后可觀察到細胞存活能力，內皮通透性顯著改善（P<0.05），同時相較高糖刺激的細胞，其炎癥水平下降（P<0.05），線粒體膜電位升高（P<0.05），而細胞內ROS含量下降。采用SIRT1抑制劑Sirtinol 10 μmol·L-1作用于高糖刺激后的細胞，上述改善作用并未出現。結論高糖引發(fā)的腎微血管損傷主要與腎小球損傷有關，高糖造成腎小球內皮細胞氧化應激增加，炎癥反應增加，進而導致細胞存活能力下下降，內皮通透性增加，Sirt1能夠調節(jié)內皮細胞炎癥反應，抑制氧化應激，對高糖造成的腎小球微血管內皮損傷有一定的改善作用，可能作為治療糖尿病腎病潛在的新靶點。

關鍵詞：糖尿病腎??；微血管內皮細胞；氧化應激；炎癥；SIRT1

T5-4

依帕司他對2型糖尿病大鼠肝纖維化的影響

趙月蓉1，2，侯碧玉2，柳晨歌2，王曉波1，2，管淑玉1，張 莉2，杜冠華1

（1.廣東藥科大學，廣東廣州 510006；2.中國醫(yī)學科學院藥物研究所藥物靶點研究與新藥篩選北京市重點實驗室，北京100050）

摘要：目的探討依帕司他對2型糖尿病大鼠并發(fā)肝纖維化的影響。方法采用高糖高脂飲食喂養(yǎng)及腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素（STZ）建立2型糖尿病SD大鼠模型。將造模成功的大鼠分為模型對照組，依帕司他組（100 mg·kg-1），另設正常對照組。灌胃給藥8周，觀察依帕司他對糖尿病大鼠肝纖維化的影響。結果依帕司他治療8周，大鼠空腹血糖和血脂水平較模型組降低，肝功能指標AST，ALT分別下降了15.47%和42.95%。HE染色和Masson染色可見糖尿病大鼠肝出現脂肪變性和纖維化病變，依帕司他治療后病變減輕。天狼星紅染色表明，依帕司他組大鼠肝組織Ⅰ型和Ⅲ型膠原纖維明顯減少（P<0.5），纖維化狀態(tài)得到改善。依帕司他組大鼠血清MDA，8-OHdG和AGE與模型組相比分別降低了50.59%，18.29%和27.71%，SOD活力增加了37.52%。結論依帕司他能改善2型糖尿病大鼠肝纖維化，其作用機制可能與改善氧化應激，減少糖基化終末產物的產生有關。

關鍵詞：依帕司他；鏈脲佐菌素；2型糖尿?。桓卫w維化

T5-5

利拉魯肽對糖尿病大鼠腎損傷過程中MyD88蛋白表達及炎癥因子的影響

江思瑜1，梁 嬋1，吳曉光2，劉歡歡1

（1.承德醫(yī)學院2013級麻醉本科，河北承德 067000；2.承德醫(yī)學院基礎研究所，河北承德 067000）

摘要：目的旨在觀察利拉魯肽對糖尿病大鼠腎損傷過程中炎癥因子表達的影響，并闡明其機制，為利拉魯肽應用于臨床治療糖尿病腎病提供參考。方法健康SD大鼠84只，隨機選取21只為正常組，常規(guī)飼養(yǎng)。其余63只通過飼喂含高脂肪、高糖飲食，8周后ip鏈脲佐菌素（30 mg·kg-1）的方式進行造模，造模過程中大鼠無死亡，再隨機分為模型組、利拉魯肽組（利拉魯肽0.10 mg·kg-1，sc）、陽性對照組（二甲雙胍150 mg·kg-1，ig）。常規(guī)生化法檢測大鼠尿糖、血糖、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白含量。HE染色和Masson染色觀察大鼠腎臟病理變化。SABC免疫組化法檢測MyD88蛋白表達。ELISA試劑盒檢測IL-1，IL-18和NF-κB含量。結果利拉魯肽組所測指標：血糖、尿糖、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白含量，MyD88蛋白表達，IL-1，IL-18和NF-κB含量均低于模型組（P<0.05），高于正常組（P<0.05），與陽性對照組差異不明顯（P>0.05）。正常組腎小球體積正常、基膜及系膜區(qū)無明顯病變，其余三組均發(fā)生腎小球變大、基膜加厚、系膜加寬等病理改變，利拉魯肽組病理改變程度弱于模型組，與陽性對照組差異不突出。結論利拉魯肽通過降低MyD88蛋白表達，抑制其介導的炎癥信號通路激活NF-κB，減少機體IL-1和IL-18炎癥因子的生成，避免糖尿病對腎的損傷。

關鍵詞：MyD88；Ⅱ-1；IL-18；利拉魯肽；腎損傷

T5-6

孕期炎癥刺激致子代大鼠血脂異常的機制初探

曹大巖，劉 雅，李曉輝

（第三軍醫(yī)大學藥物研究所，重慶 400038）

摘要：目的探索孕期炎癥刺激對子代個體的血脂的影響及其機制。方法復制孕期炎癥刺激致子代大鼠高血壓的模型。子代個體出生后，每周測量體重，子代8周齡時取材。檢測血脂以及肝功能指標；HE染色觀察肝臟形態(tài)；透射電鏡觀察肝細胞亞細胞結構改變；蛋白免疫以及分析線粒體電子呼吸鏈復合物蛋白的表達；檢測線粒體膜電位、細胞色素c氧化酶活性和ATP含量。結果孕期炎癥刺激可導致子代個體血脂水平紊亂，肝功能受損。HE染色以及透射電鏡結果發(fā)現孕期刺激后子代個體肝細胞凋亡，線粒體腫脹。孕期刺激后子代個體肝線粒體膜電位顯著降低（P<0.01），肝ATP含量低于對照組（P<0.05），細胞色素c氧化酶活性升高（P<0.01）。WB分析線粒體電子呼吸鏈復合物蛋白的表達發(fā)現，孕期炎癥刺激子代肝中ComplexⅠ的表達顯著升高（P<0.01），ComplexⅡ的表達顯著降低（P<0.01），而ComplexⅢ和ComplexⅣ的表達并沒有發(fā)生改變。結論孕期炎癥刺激可能通過誘導子代個體的肝的線粒體損傷來導致子代個體肝脂代謝異常。

關鍵詞：線粒體；血脂；孕期炎癥刺激

T5-7

大黃酸在中毒性腎功能損傷中的保護作用

王 雪，韓利文，何秋霞，孫 晨，王榮春，陳錫強，韓 建，劉可春

（山東省科學院生物研究所山東省生物檢測技術工程實驗室，山東濟南 250014）

摘要：目的通過觀察大黃酸在馬兜鈴酸A引起的斑馬魚腎臟損傷中的作用，獲得大黃酸保護腎功能活性的實驗數據，為臨床腎毒性損傷治療提供參考。方法將腎發(fā)育完成的斑馬魚幼魚（4 dpf）用馬兜鈴酸A處理24 h造成馬兜鈴酸腎損傷模型，治療組在損傷模型基礎上同時加入大黃酸處理。處理結束后，鏡下觀察各組幼魚的表型變化，并記錄異常數；提取各組幼魚組織中的肌酐成分，用肌酐檢測試劑盒測定其含量變化情況；并用qPCR定量檢測各組幼魚組織中的炎性相關因子（cox2a）和致纖維化因子（TGF-β1）表達變化情況。結果馬兜鈴酸A處理24 h后，部分幼魚出現眼周水腫及血循環(huán)系統功能異常，表現為心跳微弱、心腔縮小，主干及節(jié)間血流緩慢甚至停滯，幼魚異常發(fā)生率與馬兜鈴酸A呈量效依賴性特點；馬兜鈴酸A處理組幼魚組織中的肌酐含量比對照組升高，并有顯著性差異；qPCR結果顯示，馬兜鈴酸A處理組幼魚組織中cox2a和TGF-β1表達量也比對照組顯著上升，說明馬兜鈴酸A處理造成斑馬魚幼魚腎功能損傷。同時加入大黃酸的治療組中，幼魚異常發(fā)生比例比模型組顯著降低，幼魚組織中的肌酐含量也明顯低于模型組，同時，大黃酸能下調cox2a的表達，但對馬兜鈴酸A引起的TGF-β1表達量的上升無影響。結論大黃酸對馬兜鈴酸A引起的斑馬魚幼魚腎損傷有一定的保護作用。

關鍵詞：斑馬魚；腎；大黃酸；馬兜鈴酸A；腎損傷；

T5-8

粗壯女貞總苷降血脂作用及其基于AMPK通路的降脂作用機制

孫 樂1，楊潤梅1，高南南1，許利嘉1，賀震旦2，金 文1

（1.中國醫(yī)學科學院北京協和醫(yī)學院藥用植物研究所，北京100193；2.深圳大學醫(yī)學院藥學系，廣東深圳518060）

摘要：目的探討粗壯女貞（CN）總苷降血脂作用及其基于腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路的降脂作用機制。方法Syrian金黃地鼠隨機分為正常組、高脂模型組，陽性藥非諾貝特組及CN總苷高、中、低劑量組。除正常組外，其余各組地鼠應用高脂飼料誘導建立混合型高脂血癥模型。造模1周后取血，檢測血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C）含量，確定模型形成。之后連續(xù)給藥30 d，在給藥10，20及30 d分別取血檢測血清中TC，TG，LDL-C，HDL-C及游離脂肪酸（FFA）含量。在給藥30 d后剖取肝測定肝TG和TC含量。并應用實時定量PCR檢測CN總苷對肝中AMPK、CD36、肉毒堿棕櫚酰轉移酶1（CPT1）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）的mRNA表達水平的影響；并用Western blotting法檢測AMPK和其上游調控蛋白肝激酶B1（LKB1）的磷酸化蛋白和總蛋白水平，并檢測羥甲基戊二酸單酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶的蛋白表達量。結果給藥10，20及30 d后，與模型組相比，CN總苷高劑量組血清中的TC，TG，LDL-C和FFA含量均顯著降低（P<0.01）；給藥30 d后肝中TC和TG含量極顯著降低（P<0.01）。實時定量PCR結果顯示，與模型組相比，CN總苷可以明顯升高AMPK的相對表達量（P<0.01），但CD36，ACC和CPT1的相對表達量無明顯變化。Western蛋白印跡結果顯示，與模型組相比，CN總苷高劑量組肝中的LKB1，phospho-LKB1及phospho-AMPK的相對表達量均提高，其中phospho-LKB1相對表達量顯著提高（P<0.01）。結論CN總苷能有效降低高脂血癥金黃地鼠的血脂和肝脂水平，其機制可能是CN總苷促進肝LKB1磷酸化從而激活AMPK通路上與脂質代謝相關的靶蛋白。

關鍵詞：CN總苷；降脂；AMPK；LKB1

T5-9

茶黃素降低黃嘌呤聯合氧嗪酸鉀誘導高尿酸血癥小鼠的血漿尿酸作用及機制探究

周啟蒙，杜冠華

（中國醫(yī)學科學院北京協和醫(yī)學院藥物研究所，北京市藥物靶點研究與新藥篩選重點實驗室，北京 100050）

摘要：目的觀察茶黃素降低黃嘌呤聯合氧嗪酸鉀誘導的高尿酸血癥小鼠的血漿尿酸效果并進行機制探究。方法采用黃嘌呤灌胃聯合氧嗪酸鉀腹腔注射制備小鼠高尿酸血癥模型。取血漿利用尿酸酶法測定血漿尿酸含量，苦味酸法測定血漿肌酐含量，脲酶-谷氨酸脫氫酶法檢測血漿尿素氮含量；分光光度法檢測黃嘌呤氧化酶活性。結果與空白組相比，模型組小鼠血漿尿酸濃度顯著升高（P<0.05），而茶黃素3，10和30 mg·kg-1劑量組均可分別顯著降低血漿尿酸水平37.4%（P<0.05），55.3%（P<0.05）和48.1%（P<0.05）。茶黃素10 mg·kg-1比模型組血漿肌酐降低了10.5%（P< 0.05）。茶黃素各劑量組血漿尿素水平相比模型組分別升高了45.6%（P<0.05），53.1%（P<0.05）和58.9%（P<0.05）。茶黃素3，10和30 mg·kg-1劑量組較模型組黃嘌呤氧化酶活性分別升高33.3%，56%（P<0.05），37.0%（P<0.05）。結論茶黃素對高尿酸血癥小鼠腎濾過能力影響不大，可能是通過影響尿酸重吸收過程而非黃嘌呤氧化酶抑制作用而起到降低小鼠血漿尿酸的效果。

關鍵詞：高尿酸血癥；茶黃素；黃嘌呤氧化酶

T5-10

七斛血糖制劑對KK-Ay小鼠降糖作用

張 璇1，李小麗1，王 寧2，姚欣彤1，周維英1

（第三軍醫(yī)大學1.藥學院藥理學教研室，2.第一附屬醫(yī)院中心實驗室，重慶 400038）

摘要：目的觀察七斛血糖制劑對自發(fā)性2型糖尿病KK-Ay小鼠降糖作用及機制的初步研究。方法C57BL/6小鼠作為正常對照組，KK-Ay小鼠隨機分成6組，分別為模型對照組，七斛低、中、高劑量組（0.75，1.5和3.0 g生藥·kg-1），陽性對照組（二甲雙胍組和伏格列波糖組），灌胃給藥28 d。于給藥第8、15、22和29天測量小鼠隨機血糖、體重及攝食量，并于第29天取血檢測血脂四項，取肝和腎觀察病理改變。結果與正常對照組比較，模型對照組小鼠攝食量、體重、血糖、總膽固醇（CHOL）和甘油三酯（TG）水平顯著升高（P<0.01），小鼠肝細胞變性，脂肪沉積明顯，中央靜脈擴張、充血，腎小球萎縮嚴重并伴有充血；與模型對照組比較，給藥第8、15、22和29天，七斛中、高劑量組小鼠的隨機血糖均顯著降低（P<0.05），其中七斛高劑量組降糖率可達35%以上；七斛中、高劑量組小鼠攝食量、體重、CHOL和TG均顯著降低（P<0.05）；七斛中、高劑量組小鼠肝細胞變性減輕，脂肪沉積減少，腎小球輕度萎縮，充血顯著減輕。結論七斛血糖制劑能顯著降低KK-Ay小鼠的血糖、總膽固醇和甘油三酯水平，且能顯著改善KK-Ay小鼠肝和腎的病變。

關鍵詞：糖尿?。黄啧侵苿?；高血糖；高血脂

T5-11

基于藥理學和代謝組學技術闡明慢性腎衰竭的作用機制及麥角甾酮抗腎纖維化

趙英永

（西北大學西部資源生物與現代生物技術教育部重點實驗室，陜西西安 710069）

摘要：目的慢性腎功能衰竭是嚴重危害人類健康的重大疾病之一，且隨著慢性腎功能衰竭原發(fā)病如糖尿病、高血壓、心血管疾病發(fā)生率的升高，慢性腎功能衰竭的發(fā)生率也在逐漸上升。本研究采用藥理學和基于超高液相色譜-高清質譜聯用的代謝組學技術鑒定腺嘌呤誘導的慢性腎功能衰竭（CRF）大鼠腎組織的生物標示物及探討麥角甾酮抗腎纖維化的作用機制。方法模型組灌胃腺嘌呤200 mg·kg-1·d-1連續(xù)3周制作慢性腎功能衰竭模型，正常對照組給予同等量自來水。治療組除按灌胃腺嘌呤制作慢性腎功能衰竭模型外，3 h后按灌胃麥角甾酮進行治療，實驗結束后頸動脈采血和腎組織用于生化測定、病理分析和代謝組學研究。結果結合血液生化和腎組織病理學及模式識別分析，發(fā)現CRF組和對照組間代謝輪廓差異顯著。鑒定的13個生物標示物6個是多不飽和脂肪酸，多不飽和脂肪酸二十二碳五烯酸、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、花生四烯酸和亞油酸等的表達被上調或下調；其次是增加的尿毒癥毒素硫酸吲哚酚和硫酸對甲酚。此外，腺嘌呤導致腎纖維化相關蛋白TGF-β1，CTGF，bFGF和ColⅠ的顯著上調，因此多不飽和脂肪酸與腎纖維化蛋白的過表達存在密切的聯系。慢性腎功能衰竭大鼠經麥角甾酮治療后，麥角甾酮對異常的多不飽和脂肪酸代謝和腎纖維化蛋白有較好的改善作用。結論多不飽和脂肪酸是CRF的腎組織的生物標示物，多不飽和脂肪酸的紊亂與腎纖維化蛋白的上調有關，麥角甾酮對CRF顯示較好的治療作用。代謝組學方法是研究慢性腎疾病的機制及中藥治療的一個有力的工具。

關鍵詞：慢性腎衰竭；代謝組學；超高壓液相色譜；豬苓；麥角甾酮；腎纖維化；脂肪酸代謝

T5-12

黃芪甲苷對鏈脲佐菌素誘導糖尿病大鼠腎保護機制探討

范愈燕1，呂翠巖3，朱 斌2，李 平4，劉慶山5，劉延青1

（首都醫(yī)科大學附屬天壇醫(yī)院1.康復疼痛科，2.藥劑科，北京 100050；3.首都醫(yī)科大學附屬北京中醫(yī)院腎內科，北京 100730；4.中日友好醫(yī)院臨床醫(yī)學研究所，北京100029；5.中國少數民族傳統醫(yī)學研究院，北京 100030）

摘要：目的觀察黃芪甲苷對鏈脲佐菌素（STZ）-誘導糖尿病大鼠腎保護機制。方法4周齡Wistar大鼠除了正常組（n= 6），給予2周高脂肪飲食及STZ誘導2型糖尿病成模后隨機分組：模型組（n=10）、黃芪甲苷組（10 mg·kg-1，n=8）、奧美沙坦酯組（100 mg·kg-1·d-1，n=8）及四甲基哌啶組（3 mol·L-1，n=10），6周治療觀察血壓及腎臟組織改變。結果STZ誘導糖尿病12周齡的大鼠血壓、血糖、尿蛋白、尿肌酐清除率及腎皮質纖維化基因均顯著升高，升高的數值顯著被奧美沙坦酯所抑制，而黃芪甲苷和四甲基哌啶均抑制除了血壓以外的異常指標。糖尿病組的腎皮質AGT及renin基因異常升高，除了被奧美沙坦酯組明顯改善外，其他組均無影響。結論黃芪甲苷對STZ誘導糖尿病腎臟保護作用機制并未參與腎內血管緊張素系統，可能是通過抗氧化作用實現的。

關鍵詞：2型糖尿病大鼠；黃芪甲苷；血管緊張素系統；抗氧化作用

T5-13

低分子量褐藻多糖硫酸酯改善白蛋白超載引起的腎小管細胞損傷

賈英麗，周 虹，楊寶學

（北京大學基礎醫(yī)學院藥理學系天然藥物及仿生藥物國家重點實驗室，北京 100191）

摘要：目的隨著人口老齡化及代謝疾病的增加，慢性腎疾?。–KD）的發(fā)病率逐年升高，已經成為世界范圍內共同的健康難題。目前對于CKD的治療主要為控制血糖、血壓以及降血脂等基礎疾病的治療。而針對CKD發(fā)病過程的藥物較少，因此需要進一步研究CKD的發(fā)病機制以及尋找新的防治藥物。白蛋白尿是慢性腎疾病的最常見癥狀，不僅是腎疾病重要的臨床表現和預后指標，也是腎疾病進展至腎衰竭的獨立危險因素。白蛋白尿可造成嚴重的腎小管及腎間質損傷。褐藻多糖硫酸酯具有多種生物活性，經降解得到的低分子量褐藻多糖硫酸酯（LMWF）平均分子量為8 ku，生物利用度好。該課題主要研究白蛋白造成腎損傷的機制，以及LMWF是否可改善白蛋白超載引起的腎損傷及功能改變。方法將雄性129S2/Sv小鼠隨機分為對照組、模型組及給藥組。模型組小鼠每天ip牛血清白蛋白（BSA）10 mg·g-1，持續(xù)3周。給藥組小鼠ip預給LMWF（100 mg·kg-1）1周，之后給予3周的BSA。對照組小鼠腹腔注射等劑量的生理鹽水。觀察并記錄小鼠的一般生理狀態(tài)和腎功能等指標的變化。體外實驗采用大鼠腎小管上皮（NRK-52E）細胞的白蛋白超載模型，BSA 10或20 mg·mL-1孵育NRK-52E細胞不同時間后收集細胞。用Western蛋白印跡法檢測腎組織和細胞樣品中的信號分子表達水平。結果129S2/Sv小鼠腹腔注射BSA 3周后，出現腎功能低下，表現為血肌酐、血尿素氮水平升高，肌酐清除率下降，24 h尿白蛋白排泄量大于30 mg；腎組織形態(tài)發(fā)生明顯改變，腎小管上皮細胞萎縮、扁平，腎小管擴張，腎小球肥大；并且炎癥反應相關蛋白COX-2及MCP-1，纖維化相關蛋白CTGF及fibronectin、等表達水平升高。這些結果也表明，白蛋白超載的129S2/Sv小鼠是研究LMWF對慢性腎疾病保護作用的理想模型。同時，給予小鼠腹腔注射LMWF 100 mg·kg-1后，小鼠腎功能得到改善，其中血肌酐濃度下降34%，血尿素氮水平下降25%，肌酐清除率上升48%，24 h尿白蛋白排泄量下降41%；腎小管上皮細胞萎縮和腎小管擴張減輕；炎癥反應相關蛋白（COX-2和MCP-1）、纖維化相關蛋白（CTGF和fibronectin）表達降低。我們利用大鼠近曲小管上皮細胞（NRK-52E細胞）白蛋白超載模型研究LMWF改善腎損傷的機制。BSA 10 mg·mL-1與不同濃度的LMWF（1~20 μg·mL-1）共孵育NRK-52E細胞48 h后，LMWF劑量依賴地抑制白蛋白超載引起的NF-κB通路激活，并且抑制炎癥反應相關蛋白（COX-2和MCP-1）、纖維化相關蛋白（CTGF和fibronectin）表達；20 mg·mL-1BSA與不同濃度的LMWF（1~20 μg·mL-1）孵育NRK-52E細胞72 h后，LMWF以劑量依賴地方式抑制白蛋白誘導的凋亡指數增加，并且降低凋亡相關蛋白cleaved-caspase 3和p-p53表達水平；LMWF抑制白蛋白超載的NRK-52E細胞內ROS產生，降低MDA的濃度，并降低Nox4表達水平及PKC的磷酸化水平，提示LMWF降低NRK-52E細胞內氧化應激水平。結論LMWF能夠改善白蛋白超載引起的腎及腎近曲小管上皮細胞損傷。其保護作用主要通過抑制白蛋白超載引起的炎癥反應、纖維化、氧化應激及細胞凋亡。此外，由于其生物功能及特性，LMWF很有可能開發(fā)為防治CKD的藥物。

關鍵詞：慢性腎疾?。坏鞍啄?；炎癥反應；細胞凋亡；白蛋白超載

T5-14

果糖1,6二磷酸酶抑制劑cpd-36在四氧嘧啶小鼠中的降糖作用研究及機制初探

劉率男，穆永釗，劉 泉，李彩娜，申竹芳

（中國醫(yī)學科學院藥物研究所，北京 100050）

摘要：目的研究針對肝糖異生途徑的抗糖尿病藥物新靶點——果糖1,6-二磷酸酶（FBPase）的抑制劑，新結構化合物cpd-36對四氧嘧啶（alloxan）小鼠的降糖活性及作用機制初探。方法在酶學和原代小鼠肝細胞水平，評價cpd-36對人源FBPase活性和肝細胞糖異生的抑制作用；在Alloxan小鼠中，單次或長期口服給予cpd-36（100和200 mg·kg-1），行丙酮酸鈉耐量試驗，以評價其對糖異生的抑制作用和對糖脂代謝的影響。結果cpd-36對重組人源FBPase活性具有顯著抑制作用，IC50為6.2×10-8mol·L-1，抑制作用優(yōu)于FBPase陽性抑制劑MB05032（IC50為1.2×10-7mol·L-1）；在Alloxan小鼠中單次口服給藥，cpd-36（100 mg·kg-1）可明顯抑制給予丙酮酸鈉后的血糖上升，與二甲雙胍（150 mg·kg-1）作用相當；長期給藥后，cpd-36（100和200 mg·kg-1）可顯著降低高糖小鼠的空腹和隨機血糖（P<0.05），并劑量依賴性地抑制肝臟中FBPase的活性；對小鼠的多食多飲癥狀有明顯改善作用；給藥后，未發(fā)現血乳酸及β-羥丁酸的堆積現象，對肝臟病理形態(tài)也無顯著影響；另外，cpd-36亦可顯著抑制小鼠原代肝細胞內的糖異生作用，減少肝細胞葡萄糖生成。結論cpd-36具有較強的FBPase抑制活性，可通過口服給藥發(fā)揮良好的體內降血糖作用，對糖異生底物的水平影響較??；圍繞cpd-36進行合理的結構優(yōu)化，可繼續(xù)探尋和開發(fā)活性好、安全性高的以FBPase為靶點的抗糖尿病候選藥物。

關鍵詞：果糖-1,6-二磷酸酶抑制劑；糖尿病；空腹血糖；糖異生

T5-16

Apelin/APJ system and kidney disease

HUANG Zhen，CHEN Zhe，HU Hao-liang，LIU Jia-qi，ZHOU Hong，WU Le-le，HUANG Shi-fang，LI Lan-fang，CHEN Lin-xi

（Institute of Pharmacy and Pharmacology，Hunan Prov?ince Cooperative Innovation Center for Molecular Target New Drug Study，University of South China，Hengyang 421001，China）

Abstract：Apelin is an endogenous ligand of the apelin receptor（APJ），a seven-transmembrane G protein-cou?pled receptor.Apelin and APJ exist in a variety of tissues，with special status in the heart，lung and tumors.Further?more，many research shows that the apelin/APJ system exerts a broad range of activities that affect kidney sys?tems.This review we summarize the role of apelin/APJ system on renal fibrosis，renal ischemia/reperfusion injury and diabetic nephropathy，polycystic kidney disease，hemodialysis.It was found that the level expression of apelin mRNA in the inner stripe of kidney outer medulla was the highest，and the region is significantly correlated with water and sodium balance.In UUO mice model，intraperitoneal injection of Apelin can reduce α-SMA，the expression of TGF-1 and its receptor，and between renal stromal components also significantly decreased.These results show that Apelin can reduce the deposition of ECM and improve renal interstitial fibrosis.In renal isch?emia/reperfusion injury studies show that apelin-13 can significantly reduce the damage induced by renal tubular lesions，renal cell death and the normal renal function is not completely lead to large damage.But in diabetic nephropathy，Apelin-APJ system can promote or slow DN disease progression is controversial，still needs fur?ther research.Analysis the receiver operating characteristic curve found that in the process of identifying ADPKD dis?ease apelin and copeptin shows good receiver operating characteristic curve（ROC），cox proportional hazards regression model also showed apelin can predict on the progress of kidney disease.In hemodialysis patients the apelin levels and PTH levels were positively correlated，it could prompt apelin can protect bone dialysis patients. Apelin also can reduce Pit-1 inhibition of vascular smooth muscle cell osteoblast calcification and thus improve the aortic calcification，so Apelin may have a potential role in the treatment of vascular calcification in CKD.In kidney disease conditions，Apelin/APJ system plays a variety of biological functions，because of the Apelin protective on kidney，Apelin/APJ may be a potential material for the treatment of chronic kidney disease.

Key words：Apelin/APJ；kidney disease；fibrosis

T5-17

Ameliorative effect of berberine on high-fat diet/strep?tozotocin-induced early diabetic nephropathy in rats

XIEZhan-xiong1，WUZhu-feng2，LIUJiang-hong1，WU Qun-hua1，WANG Xiao-kang1

（1.Department of Pharmacy，Shenzhen Longhua New District Central Hospital，Shenzhen518110，China；2.Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Jinan University，Guangzhou 510630，China）

Abstract：OBJECTIVETo investigate possible protec?tive effect of berberine，an isoquinoline alkaloid，is the major active constituent of Rhizoma coptidis and Cortex phellodendri，on high-fat diet/streptozotocin-induced early diabetic nephropathy in rats and various mechanisms underlie this effect.METHODSThe diabetic rat model was generated by a single intraperitoneal injection of strepto?zotocin（STZ，50 mg·kg-1）.Diabetic rats were random?lyassigned into the following five groups：control，DN，losartan（30 mg·kg-1·d-1），berberine（100，200 mg·kg-1·d-1）. Berberine and losartan were given intragastricly for nine weeks.At the end of the experiment，urine of each group was collected in a 24 h period.Rats were weighed and then sacrificed.Plasma and kidneys were collected.The levels of blood glucose，creatinine（Cr），triglycerides（TG），total cholesterol（TCH）and malondialdehyde（MDA）in serum were determined using commercial kits according to the manufacturer′s instructions.Transforming growth factor（TGF）-β1and intracellular adhesion molecule-1（IAM-1）mRNA levels were evaluated by RT-PCR.The renal his?topathology was observed by light microscopy.Further biochemical analysis of IKKβ1 and p65（nucleus/cytoplasm）was provided using Western blotting techniques.RESULTSOur study has demonstrated that berberine has various pharmacological activities.The DN rats had significantly higher kidney/body weight ratio（17.4±1.4）mg·g-1，and berberine treatment could reduce this ratio change 13.6±0.6 and（11.6±0.8）mg·g-1，respectively；glucose control still remains the only disease-modifying therapy for diabetic complications，FBG was also recorded in the experiment. The findings reveal that the DN group showed a significantly higher glucose level（28.67±2.78）mmol·L-1.Treatment with 8 weeks of berberine improved these parameters except blood glucose〔（18.67±2.59）mmol·L-1and 16.45±1.80vs（28.67±2.78）mmol·L-1：plasma levels of urea nitrogen（15.67±2.48）mmol·L-1and 14.45±2.40vs（12.26± 2.40）mmol·L-1〕；plasma levels of 24 h urine albuminuria〔30.48±1.56 and 25.72±2.24vs（15.26±0.12）μg·d-1〕；based on these results，berberine supposed to improve renal functions in diabetic rats.Berberine also ameliorated the inflammatory changes of DN in diabetic animals；levels of TG，TCH and MDA in berberine-treatment rats were significantly lower compared with those in the DN group：TG〔2.78±0.24 and 2.45±0.36 vs（5.20±0.60）mmol·L-1〕；TCH〔4.26±0.46 and 3.74±0.68vs（6.26±0.50）mmol·L-1〕；MDA〔4.94±1.19 and 4.28±0.64vs（4.28±0.64）nu·mL-1〕.Chronic inflammation，as is observed in diabetes，is associated with increased production of TGF-β1and IAM-1.Compared with the renal tissues of DN group，TGF-β1and IAM-1 gene expressions in berberine treated groups were reduced at the dose levels（100 and 200 mg·kg-1）.And TGF-β1and IAM-1 levels in berberine treated groups were reduced in a dosedependent manner：Relative expression of TGF-β1mRNA level（3.56±0.28 and 3.12±0.14vs5.12±0.44）；Relative expression of IAM-1 mRNA level（1.78±0.56 and 1.42±0.24vs4.36±0.35）.Research finds that the NF-κB signaling pathway is activated in the renal tissue of diabetic mice and berberine inhibits activation of the NF-κB pathway：staining score for IKKβ1（4.34±0.26 and 3.82±0.24vs6.23±0.76），staining score for p65（2.34±0.26 and 1.74±0.78vs6.23± 0.24）in nucleus and staining score for p65（7.21±0.13 and 8.15±0.45vs4.23±0.54）in cytoplasm.CONCLUSIONIn this field，berberine suppresses the increased expression of p65 in the nucleus and decreases it in cytoplasm，which leads to the inhibition of the NF-κB pathway.These changes will result in decreasing the transcription and translation of many inflammatory mediators，such as TGF-β1and IAM-1. Additionally，these changes decrease the number of inflammatory cells and mononuclear macrophage infiltration into glomeruli and renal interstitium.These results indicated that berberine can protect the kidney of STZ-diabetic rats by reducing the expression of TGF-β1and IAM-1 in the re?nal tubulointerstitium.And we propose that berberine mayfunction as an effective therapeutic agent for diabetic nephropathy and attenuate the progression of renal injury.

Key words：berberine；creatinine；diabetic nephropathy；inflammation

T5-18

Activation of peripheral KCNQ channels relieves gout pain

ZHENG Yue-ming，XU Hai-yan，ZHAN Li，ZHOU Xin-di，CHEN Xue-qin，GAO Zhao-bing

（State Key Laboratory of Drug Research，Shanghai Insti?tute of Materia Medica，Chinese Academy of Sciences，Shanghai 201203，China）

Abstract：Intense inflammatory pain caused by urate crystals in joints and other tissues is a major symptom of gout.Among therapy drugs that lower urate，benzbroma?rone（BBR），an inhibitor of urate transporters，is widely used because it is well tolerated and highly effective.We demonstrate that BBR is also an activator of voltage-gated KCNQ potassium channels.In cultured recombinant cells，BBR exhibited significant potentiation effects on KCNQ channels comparable to previously reported clas?sical activators.In native dorsal root ganglion neurons，BBR effectively overcame the suppression of KCNQ cur?rents， andtheresultantneuronalhyperexcitability caused by inflammatory mediators，such as bradykinin（BK）.Benzbromarone consistently attenuates BK-，for?malin-，or monosodium urate-induced inflammatory pain in rat and mouse models.Notably，the analgesic effects of BBR are largely mediated through peripheral and not through central KCNQ channels，an observation supported both by pharmacokinetic studies andin vivo experi?ments.Moreover，multiple residues in the superficial part of the voltage sensing domain of KCNQ channels were identified critical for the potentiation activity of BBR by a molecular determinant investigation.Our data indicate that activation of peripheral KCNQ channels mediates the pain relief effects of BBR，potentially providing a new strategy for the development of more effective therapies for gout.

Key words：KCNQ；channel；gout；pain

T5-19

Protective effects of total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja on STZ-stimu?lated INS-1 cells through regulating of autophagy and apoptosis

ZHOU Qin1*，SHI Meng-qiong2*，Wu Xue-zhi3，HE Hai-bo4，LIU Ying3，QIN Hui-lin4，ZHANG Yong-feng4

（1.Department of Pharmacy，Renhe Hospital，China Three Gorges University，2.College of Medical Sciences，China Three Gorges University，3.Yichang Green Qian Liu Biological Technology Co.，Ltd，4.College of Biologi?cal and Pharmaceutical Sciences，China Three Gorges University，Yichang 443002，China）

Abstract：OBJECTIVETo explore the protective effects of total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja on STZ-stimulated INS-1 cells through regulating of autophagy and apoptosis.METHODSINS-1 cells were cultured in media containing 3nM STZ and different doses of total triterpenoids extracts fromCyclo?carya paliurus（Batal.）Iljinskaja.The proliferation of cells was examined by MTT assay，ROS content were detected by fluorescence enzyme label.The levels of superoxide dismutase（SOD），glutathione peroxidase（GSH-Px），hydrogen peroxidase（CAT），malondialdehyde（MDA）were also measured by colorimetry.The activities of cas?pase-3，9 were also observed by Caspase colorimetric assay kit in each group.The expressions of Bcl-2 mRNA and Bax mRNA were detected by Real time PCR，pro?tein expression of LC3-Ⅱ and PARP were detected by Western blotting.RESULTSCompared with the control group，total triterpenoids extracts fromCyclocarya pali?urus（Batal.）Iljinskaja could promote the proliferation of INS-1 cells no matter with STZ or not when its concentra?tion lower than 25 μg·mL-1；but when its concentration higher than 100 μg·mL-1（use individually）or 50 μg·mL-1（combined use），total triterpenoids extracts fromCyclo?carya paliurus（Batal.）Iljinskaja might significantly inhibite the growth of the cells whether STZ existed or not.Total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja（6.25，12.5，25 μg·mL-1）might inhibit INS-1 cell apoptosis，decrease intra-cellular ROS contents，improve the s upernatant liquid SOD，GSH-PX，CAT activities，decrease MDA level，promote INS-1 cell secreting insulin，decrease the protein expressions of autophagy protein LC3Ⅱ and apoptosis regulating pro?tein cleaved PARP protein，up-regulate the anti-apoptot?ic protein Bcl-2 mRNA expression，down-regulate the pro-apoptotic protein Bax mRNA expression and Bcl-2 and Bax，reduce the activity of caspase-9 and caspase-3（P<0.05 orP<0.01）.CONCLUSIONTotal triterpe?noids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinska?ja has good protective effect on STZ-stimulated INS-1 cells.It can inhibit STZ injured INS-1 cells to overpro?duce ROS production，enhance endogenous antioxidant enzymes（GSH-Px，SOD，CAT activities），reduce the expression of autophagy protein LC3Ⅱ and apoptosis regulating protein cleaved PARP，up-reglute the antiapoptosis protein Bcl-2 expression，down-regulate the pro-apoptotic protein Bax expression，decrease the cas?pase-9 and caspase-3 activities，and improve the INS-1 cell survival rate，and then play a protective effect on damaged INS-1 cells.

Key words：total triterpenoids extracts fromCyclocarya paliurus（Batal.）Iljinskaja；INS-1 cells；streptozocin；autophagy；apoptosis

*Co-first author.

T5-20

Berberine enhanced antidiabetic effects and attenuated untoward effects of canagliflozin in streptozotocininduced diabetic mice

JIANG Xin1，2，TIAN Cai-ming2，3，XIE Wei-dong2

（1.School of Life Sciences，Tsinghua University，Beijing 100084，China；2.Shenzhen Key Lab of Health Science and Technology，Division of Life Science&Health，Graduate School at Shenzhen，Tsinghua University，Shenzhen 518055，China；3.Department of Chemistry，Tsinghua University，Beijing 100084，China）

Abstract：OBJECTIVETo determine whether berberine can enhance the antidiabetic effects and alleviate the adverse effects of canagliflozin in diabetes mellitus.METHODSStreptozotocin-induced diabetic mice were introduced，and the combined effects of berberine and canagliflozin on glucose metabolism and kidney func?tions were investigated.RESULTSBerberine combined with canagliflozin（BC）increased reduction of fasting and postprandial blood glucose，diet，and water intake com?pared with berberine or canagliflozin alone.Interestingly，BC showed greater decrease in blood urea nitrogen and creatinine levels and lower total urine glucose excretion than canagliflozin alone.In addition，BC showed increased phosphorylated 5′AMP-activated protein kinase（pAMPK）expression and decreased tumor necrosis factor alpha（TNFα）levels in kidneys compared with berberine or canagliflozin alone.CONCLUSIONThese results indicated that BC is as tronger antidiabetic than berberine or cana?gliflozin alone with less negative side effectson the kidneys of diabetic mice.The antidiabetic effect is likely mediated by synergically promoting the expression of pAMPK and reducing the expression of TNFα in kidneys.This study first proved that canagliflozin combined withberberine is apromising treatment for diabetes mellitus.However，the exact mechanisms should be further investigated in future studies.

Key words：canagliflozin；berberine；diabetes mellitus；AMP-activated protein kinase；sodium-glucose cotrans?porter-2

T5-21

Disruption of hepatic lipid homeostasis is involved in valproate-induced hepatotoxicity

BAI Xu-peng，HONG Wei-peng，YU Wei-bang，HUANG Min，JIN Jing

（School of Pharmaceutical Sciences，Sun Yat-sen University，Guangzhou 510006，China）

Abstract：OBJECTIVETo investigate the mechanism underlying valproate（VPA）-induced hepatic hepatotox?icity.METHODSC57B/6J mice were given VPA at 500 mg·kg-1·d-1by intragastric administration for 14 con?secutive days，while the control group received the same volume of physiologic saline by intragastric admin?istration for same days.Mice were sacrificed 24 h after the last administration.Blood samples were collected for plasma biochemical assays.Liver was fixed in 10%neu?tral buffered formalin for histopathological analysis，and RNA extraction.mRNA for selected genes expression en?coding proteins key to fatty acid synthesis，triglyceride syn?thesis，fatty acid oxidation，phosphatidylcholine synthe?sis，and lipid uptake were measured using quantitative real-time PCR.RESULTSWe found that VPA treatment induced hepatic injury in mice as evidenced by increased ALP，ATP，ASP，GGT，and LDH.Histopathological analysis of the liver in mice treated with VPA showed in?creased microvesicular steatosis in cytoplasm.More im?portantly，VPA treatment increased the mRNA expres?sionsofsterolregulatoryelementbindingprotein（SREBP）-1c，peroxisome proliferator-activated recep?tor（PPAR）γ，diacylgycerol acyltransferase（DGAT）2，and cluster of differentiation（CD）36，while the mRNA lev?els of stearoyl-CoA desaturase（SCD）1，DGAT1，liver X receptors α（LXRα），carnitine palmitoyltransferase（CPT）1，malonyl coenzyme A decarboxylase（MCD），uncou?pling protein（UCP）2，phosphatidylethanolamine N-meth?yltransferase（PEMT），andpregnenoloneXreceptor（PXR）displayed significant decrease.CONCLUSIONOur data showed that VPA induced disruption of hepatic lipid homeostasis，which could be helpful for a better under? standing of the mechanism underlying VPA-induced hep?atotoxicity and for a better use of VPA.

Key words：VPA；hepatic steatosis；lipid homeostasis；hepatotoxicity

通訊作者：申竹芳，E-mail：shenzhf@imm.ac.cn，Tel：（010）83172669 陽學風，Tel：18973405898，E-mail：yxf9988@ 126.com 杜冠華，Tel/Fax：（010）63165184，E-mail：dugh@imm.ac.cn；張 莉，Tel：（010）63035606，E-mail：zhangli@imm.ac.cn 杜冠華，E-mail:dugh@imm.ac.cn，Tel：（010）63165184 吳曉光，E-mail:52753548@qq.com，Tel:13633246767 劉 雅，E-mail：liuya1979@hotmail.com；李曉輝，E-mail：lpsh008@aliyun.com，Tel：（023）68753368 劉可春，E-mail：hliukch@sdas.org，Tel：（0531）82605352 楊潤梅，E-mail：rmyang@implad.ac.cn，Tel：18911565916 杜冠華，E-mail:dugh@imm.ac.cn，Tel:（010）63165184 周圍英，E-mail：wyzhou0118@163.com，Tel：13110216025 趙英永，E-mail：zyy@nwu.edu.cn，Tel：（029） 88305273 劉延青，E-mail：lyqttyy@126.com 周 虹，E-mail：rainbow_zhou@126.com，Tel：（010）82802798；楊寶學，Tel：（010）82805622，E-mail：baoxue@bjmu.edu.cn 申竹芳，E-mail：shenzhf@imm.ac.cn，Tel：（010）83172669

基金項目：衡陽市科技局課題（2014KJ57） 國家自然科學基金（81102492；81102444）；基本科研業(yè)務費（2013ZD02） 重大新藥創(chuàng)制專項（2009ZX09102-123, 2013ZX09508104） 國家級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目（201606） 山東省自主創(chuàng)新重大專項（2014ZZCX0215）；國家自然科學基金項目（81202584，31400979） 協和青年基金資助（3332015142） 教育部新世紀優(yōu)秀人才計劃（NCET-13-0954）；國家自然科學基金（81202909，81274025） 國家自然科學基金（81141040） 國家自然科學基金（30870921，81170632，81261160507）；科技部國際科技合作與交流專項（2012DFA11070） 中國醫(yī)學科學院中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費（2016ZX350009）

Foundation item：The project supported by National NaturalScienceFoundationofChina（81373414，81130061，81473208，81422049）；National 863 Plan Young Scientist Program of China（2015AA020943）；and Shanghai Qimingxing Project（14QA1404700） s：MIAO Chao-yu，E-mail：cymiao@ smmu.edu.cn；WANG Pei，E-mail：pwang@smmu.edu.cn CHEN Lin-xi，E-mail：lxchen6@ 126.com，Tel：（0734）8683928 The project supported by Fundamental Research Funds for the Central Universities（21615463） WANG Xiao-kang，E-mail：kangtae. wang@yahoo.com GAO Zhao-bing，Tel：（021）20239067，E-mail：zbgao@simm.ac.cn The project supported by National Natural and Science Foundation of China（81341141）；Yichang Qingqianliu Biotechnology Co.，Ltd.（SDHZ201602）；and Science and Technology Bureau of Yichang city（A15301-25）Corresponding author：HE Hai-bo，E-mail：hjy219@ 126.com The project supported by National Natural Science Foundation of China（81373460）；and by the Natural Science Foundation of Guangdong Province（2014A030313744） XIE Wei-dong，Tel/Fax：（0755）26036086；E-mail：xiewd@sz.tsinghua.edu.cn The project supported by National Natural Science Foundations of China（81573658，81102886） JIN Jing，E-mail：jinjing@mail. sysu.edu.cn

T5-15
Hepatic NAD+deficiency as a therapeutic target for NAFLD in aging

WANG Pei，MIAO Chao-yu

（Department of Pharmacology，Second Military Medical University，Shanghai，China）

Abstract：OBJECTIVEAging is an important risk factor of nonalcoholic fatty liver disease（NAFLD）.Here，we investigatedwhetherthedeficiencyofnicotinamide adenine dinucleotide（NAD+），a ubiquitous coenzyme，links aging with NAFLD.METHODSHepatic NAD+con?centration，together with the protein levels of nicotin?amide phosphoribosyltransferase（NAMPT）and several other critical enzymes regulating NAD+biosynthesis，were compared between middle-aged and aged mice or patients.The influences of NAD+decline on the steatosis and steatohepatitis was evaluated in wild-type（WT）and H247A dominant-negative enzymatic-dead NAMPT trans?genic mice（DN-NAMPT）under normal and high-fat diet（HFD）.RESULTSHepatic NAD+level decreased in aged mice and people.NAMPT-controlled NAD+salvage，but not de novo biosynthesis pathway，was compromised in liver of elderly mice and human.Under normal chow，middle-age DN-NAMPT mice displayed systemic NAD+reduction，and had moderate NAFLD phenotypes，including lipid accumulation，enhanced oxidative stress，triggered inflammation and impaired insulin sensitivity in liver.Allthese NAFLD phenotypes，especially the pro-inflammatory factors release，Kupffer cell accumulation，monocytes infiltration，NLRP3 inflammasome pathway，and hepatic fibrosis（Masson’s staining and a-SMA staining），were further deteriorated under HFD challenge.Orally adminis?tration of nicotinamide riboside，a natural NAD+precursor，completely corrected these NAFLD phenotypes induced by NAD+deficiency alone or HFD，whereas adenovirusmediated SIRT1 overexpression only partially rescued these phenotypes.CONCLUSIONThese results provide the first evidence that aging-associated NAD+deficiency is a critical risk factor for NAFLD，and suggest that sup?plement of NAD+substrates may be a promising thera?peutic strategy to prevent and treat NAFLD.

Key words：NAD；liver；NAFLD；NLRP3