李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

二甲基亞砜與羥乙基淀粉聯(lián)合冷凍保護外周造血干細胞的效果

李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

目的研究并總結(jié)二甲基亞砜與羥乙基淀粉聯(lián)合冷凍保護外周造血干細胞的效果。方法使用二甲基亞砜和羥乙基淀粉作為外周造血干細胞冷凍保護劑，將外周造血干細胞直接降溫至-80 ℃存放。存放兩周后，將外周造血干細胞解凍，植入患者體內(nèi)。統(tǒng)計單個核細胞回收率以及臺盼藍拒染率。結(jié)果回收到細胞（4.00±0.69）×109/kg，解凍后細胞回收率89.23%，解凍后臺盼藍拒染細胞比例為89.45%。解凍后外周造血干細胞輸入患者體內(nèi)后（10.83±1.55）d，所有研究對象體內(nèi)中性粒細胞絕對值升至0.5×109/L及以上。結(jié)論外周造血干細胞直接冷凍應(yīng)用二甲基亞砜和羥乙基淀粉聯(lián)合作為冷凍保護劑，細胞回收率高、細胞存活率高，體內(nèi)能夠短時間內(nèi)恢復(fù)活性。

二甲基亞砜；羥乙基淀粉；外周造血干細胞；保存效果

外周造血干細胞需要經(jīng)過存放然后移植到缺乏造血干細胞的患者體內(nèi)。正常人體的外周血中不存在造血干細胞，供體需注射造血干細胞生長刺激因子將存在于骨髓中的造血干細胞釋放進入外周血，然后進行細胞單采技術(shù)將外周血中的造血干細胞獲取[1]。獲取到得外周造血干細胞需使用冷凍保護劑進行冷凍存放，本文探討使用二甲基亞砜聯(lián)合羥乙基淀粉進行冷凍保護的效果，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料和方法

1.1 基本資料：本次研究患者共22例，包括：男性13例，女性9例，年齡8～67歲，平均年齡（34.5±5.7）歲，疾病類型：5例急性淋巴細胞白血病、10例淋巴瘤、7例急性非淋巴細胞白血病，病程6個月～3年，平均病程（1.9±0.7）年。所有患者均為白血病完全緩解階段，可以接受外周造血干細胞移植。

1.2 方法[2]：供體預(yù)處理：使用馬法蘭，180 mg/m2，環(huán)磷酰胺60 mg/（kg·d），連續(xù)靜脈滴注2 d；供體肌內(nèi)注射人粒細胞集落刺激因子（國藥準字S20010062，協(xié)和發(fā)酵麒麟(中國)制藥有限公司）5 μg/kg，連續(xù)6 d，每天1次，供體外周血單個核細胞檢測結(jié)果提示4.0×109/L時進行外周血造血干細胞的采集工作，采集2次，連續(xù)2 d采集。采集后的血液使用血細胞分離儀器Baxter CS3000處理，造血干細胞分離循環(huán)血量為10 mL，每個循環(huán)留取造血干細胞懸液50 mL。

把羥乙基淀粉試劑加入生理鹽水，使用高壓滅菌30 min，冷卻至室溫。二甲基亞砜使用醋酸纖維導(dǎo)膜濾過，取0.25 μg二甲基亞砜加入制備好的羥乙基淀粉中，混合均勻，至于-4 ℃冰浴環(huán)境中，加入清蛋白20%。

將提取到得外周造血干細胞放入二甲基亞砜混合羥乙基淀粉冷凍保護劑中，放置于-80 ℃保存兩周。所有待骨髓移植患者進行預(yù)處理，將冷凍的外周造血干細胞拿出，至于38 ℃溫水浴中1 min內(nèi)解凍。計數(shù)單個核細胞數(shù)量與冷凍存貯前細胞數(shù)量比較得出細胞回收率，和臺盼藍拒染率。解凍后20 min之內(nèi)，將外周血造血干細胞輸入待骨髓移植患者體內(nèi)。觀察患者身體狀況、是否出現(xiàn)排斥反應(yīng)、監(jiān)測中性粒細胞絕對計數(shù)達到0.5×109/L所用時間。

2 結(jié) 果

本次實驗研究中采集單個核細胞（4.45±0.78）×109/kg，經(jīng)直接冷凍存儲后解凍，回收到細胞（4.00±0.69）×109/kg，解凍后細胞回收率89.23%，解凍后臺盼藍拒染細胞比例為89.45%。解凍后外周造血干細胞輸入患者體內(nèi)后（10.83±1.55）d，所有研究對象體內(nèi)中性粒細胞絕對值升至0.5×109/L及以上。

3 討 論

二甲基亞砜既可以溶于水，又能夠溶于有機溶劑的非極性溶劑，廣泛作為溶劑和反應(yīng)試劑應(yīng)用。二甲基亞砜是細胞滲透性保護劑，有效降低細胞冰點、減少細胞內(nèi)外冰晶的產(chǎn)生、有效降低自由基損傷細胞，從而改變細胞膜對電解質(zhì)、有毒物質(zhì)、代謝活動產(chǎn)物等通透性。但是，二甲基亞砜存在一定的不良反應(yīng)，損傷肝臟和腎臟[3]。羥乙基淀具有保護細胞防止細胞脫水，和二甲基亞砜混合增強彼此減少細胞內(nèi)外冰晶產(chǎn)生的能力，有效保護細胞膜，是一種非滲透性細胞保護液。羥乙基淀粉作為一種血容量擴增試劑廣泛應(yīng)用，有效擴增血容量、稀釋血液，進行血液輸注時設(shè)定給藥劑量和滴注速度。羥乙基淀粉具有血液置換作用，動物實驗未發(fā)生不良反應(yīng)。機體本身肝腎功代謝能力正常時，不影響機體健康，所以，對造血干細胞也沒有損害作用[4]。本次研究中，聯(lián)合使用二甲基亞砜、羥乙基淀粉，能夠增強細胞保護作用、減少細胞內(nèi)外冰晶的產(chǎn)生，細胞回收率達到89.23%，臺盼藍拒染細胞比例為89.45%。解凍后外周造血干細胞輸入患者體內(nèi)后（10.83±1.55）d，所有研究對象體內(nèi)中性粒細胞絕對值升至0.5× 109/L及以上。

綜上所述，外周血造血干細胞冷凍存儲時使用二甲基亞砜聯(lián)合羥乙基淀粉作為冷凍保護劑，細胞回收率和存活率高，可以在臨床中應(yīng)用。

[1] 趙仁彬,張愛玲,陸潔,等. 超低溫冰箱轉(zhuǎn)液氮階梯降溫法與傳統(tǒng)程序降溫法保存造血干細胞的比較[J].中國組織工程研究與臨床康復(fù),2011,15(19):3525-3527.

[2] 孫淼,項軍,周明先,等. -80 ℃條件下不同時間外周血干細胞凍存效果的觀察[J].醫(yī)藥前沿,2011,1(24):121-123.

[3] 徐小紅,張一心,劉繼斌,等.改良DICE 方案聯(lián)合自體造血干細胞移植治療侵襲性非霍奇金淋巴瘤的效果觀察[J].南通大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2013,33(3):211-213.

[4] 黃友章,沈建良,楊平地,等.外周血造血干細胞不同保存方法的比較[J].中國應(yīng)用生理學(xué)雜志,2008,24(1):125-128.

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