林耀民，宋萬(wàn)杰，秦 云，趙永旭，李 慧，牛中偉，申世川，鞠吉楠，郭 銳（.天津農(nóng)墾渤海農(nóng)業(yè)集團(tuán)有限公司，天津 300000；.浙江諾倍威生物技術(shù)有限公司，浙江杭州 3008）

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豬流行性腹瀉的流行現(xiàn)狀及防控策略

林耀民1，宋萬(wàn)杰2，秦 云2，趙永旭2，李 慧2，牛中偉2，申世川2，鞠吉楠2，郭 銳2
（1.天津農(nóng)墾渤海農(nóng)業(yè)集團(tuán)有限公司，天津 300000；
2.浙江諾倍威生物技術(shù)有限公司，浙江杭州 310018）

摘 要：豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的一種豬急性腸道傳染病，兩周齡以?xún)?nèi)的仔豬受其危害最為嚴(yán)重。本文介紹了豬流行性腹瀉的流行現(xiàn)狀、致病機(jī)理、疫苗研究進(jìn)展以及防控策略，以期為本病防控提供參考。

關(guān)鍵詞：豬流行性腹瀉病毒；分子流行病學(xué)調(diào)查；致病機(jī)理；疫苗研究進(jìn)展；防控策略

豬流行性腹瀉是由流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的一種以腹瀉、嘔吐、脫水為典型癥狀的豬急性腸道傳染病，各年齡段的豬均易感，但兩周齡以?xún)?nèi)的仔豬受損最嚴(yán)重[1]。1971年，英國(guó)部分豬場(chǎng)暴發(fā)了以肥豬為主的腹瀉疫情，其臨床表現(xiàn)與傳染性胃腸炎極為相似，但病料中檢測(cè)不到傳染性胃腸炎病毒和其它致病微生物。1976年，英國(guó)及比利時(shí)部分豬場(chǎng)再次暴發(fā)類(lèi)似疫病，同樣排除了傳染性胃腸炎病毒和其它病原微生物的存在。1978年，比利時(shí)首次分離鑒定了形態(tài)類(lèi)似于傳染性胃腸炎病毒（TGEV）的病原，并將其命名為CV777[2]。隨后流行性腹瀉在匈牙利、德國(guó)、中國(guó)、韓國(guó)、日本等國(guó)家相繼出現(xiàn)。從1973年開(kāi)始，我國(guó)逐漸有流行性腹瀉病例的相關(guān)報(bào)道，但直到1984年才通過(guò)熒光抗體實(shí)驗(yàn)和中和抗體確定了病原是流行性腹瀉病毒。20世紀(jì)80年代后期，流行性腹瀉在我國(guó)大面積流行，后來(lái)隨著流行性腹瀉和傳染性胃腸炎二聯(lián)滅活苗的應(yīng)用，疫情逐漸得到控制，各地僅呈偶爾散發(fā)態(tài)勢(shì)。2010年初，我國(guó)華南地區(qū)多個(gè)省份再次暴發(fā)了嚴(yán)重的流行性腹瀉疫情，豬場(chǎng)感染率接近100%，哺乳仔豬的病死率超過(guò)80%。隨后疫情快速蔓延至華北及華中地區(qū)，截止到2011年底，我國(guó)有超過(guò)100萬(wàn)頭仔豬死于流行性腹瀉，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了沉重打擊[3]。2013年，流行性腹瀉首次在美國(guó)暴發(fā)，僅一年時(shí)間就使美國(guó)損失了700萬(wàn)頭仔豬[4]。

1　PEDV的分子流行病學(xué)研究進(jìn)展

PEDV是有囊膜的單股正鏈RNA病毒，基因組大小約為28kb，可編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白和4種非結(jié)構(gòu)蛋白，結(jié)構(gòu)蛋白包括纖突蛋白（S）、囊膜蛋白（E）、膜蛋白（M）、衣殼蛋白（N），非結(jié)構(gòu)蛋白包括1a、1b、3a、3b四種蛋白[5]。S蛋白在宿主受體識(shí)別、病毒和細(xì)胞融合的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。S蛋白是PEDV重要的纖突蛋白，分析S基因序列有助于研究PEDV不同毒株的變異情況[6]。河南農(nóng)業(yè)大學(xué)王慶川等研究了其分離的CH/ZMDZY/11及其它11株P(guān)EDV全基因組序列，包括ORF1a/b、S、ORF3、E、M、N基因，系統(tǒng)進(jìn)化分析都表明，2010年之后的PEDV集中形成了一個(gè)新群，表明一個(gè)新的PEDV亞型正在中國(guó)流行[7]。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)何啟蓋等對(duì)在2011年發(fā)病的9個(gè)豬場(chǎng)中分離的PEDV S基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)9條S基因的同源性為94.9%～99.6%，表明流行于中國(guó)的PEDV S基因出現(xiàn)了變異，這些變異或許是引起2010年12月至今流行性腹瀉暴發(fā)的主要原因[8]。2012年廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院宋長(zhǎng)緒等對(duì)部分PEDV S基因（651bp）的系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，我國(guó)目前的PEDV不同于國(guó)外以及國(guó)內(nèi)其它毒株，其與泰國(guó)株親緣關(guān)系較近，而與疫苗株關(guān)系較遠(yuǎn)[9]。哈爾濱獸醫(yī)研究所通過(guò)對(duì)2011—2012年收集的33份PEDV陽(yáng)性病料的S基因測(cè)序并分析，發(fā)現(xiàn)33株S基因之間核苷酸及蛋白同源性分別為93.5%～99.8%和92.3%～99.8%；許多毒株有核苷酸的缺失和插入，與我國(guó)經(jīng)典株CH/S的同源性?xún)H為93.5%～94.2%，與近期CHGD-1的同源性高達(dá)97.1%～99.3%；系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，經(jīng)典株與變異株均存在于豬群中，變異株為主要流行毒株[10]。

2　PEDV的傳播途徑及致病機(jī)理

PEDV主要通過(guò)口鼻傳播，美國(guó)學(xué)者Scott證實(shí)污染的飼料也可以傳播PEDV，另外研究發(fā)現(xiàn)PEDV還可以通過(guò)氣溶膠的形式傳播。PEDV傳播途徑的多樣化給流行性腹瀉的防控帶來(lái)了一定困難[11]。經(jīng)口鼻感染進(jìn)入腸道的PEDV可以在腸上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，引起腸上皮細(xì)胞的腫脹、變性和崩解，導(dǎo)致腸絨毛的萎縮和脫落，腸內(nèi)酶活性降低，使吸收功能發(fā)生障礙，腸道內(nèi)出現(xiàn)滲透壓升高，從而引起滲透性腹瀉。由于仔豬抗應(yīng)激能力和耐受力差，腸絨毛更新速度慢，導(dǎo)致仔豬的死亡率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于中大豬。

3　PEDV疫苗的研究進(jìn)展

1976年，比利時(shí)最先分離出PEDV毒株（CV777），并通過(guò)多次細(xì)胞傳代，使CV777適應(yīng)了細(xì)胞生長(zhǎng)，這使PEDV疫苗的研發(fā)應(yīng)用成為了可能。后來(lái)CV777毒株的滅活苗在亞洲的多個(gè)國(guó)家得到廣泛應(yīng)用，并取得了不錯(cuò)的效果。1991年，日本生物科學(xué)研究所分離出一株P(guān)EDV（83P-5），通過(guò)在培養(yǎng)液中加入胰酶使其適應(yīng)了在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)[12]。后來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，隨著83P-5在vero細(xì)胞中的傳代，其對(duì)哺乳仔豬的致病力逐漸減弱[13]。這為PEDV活疫苗的研發(fā)提供了一個(gè)新思路。后來(lái)83P-5毒株的弱毒苗在日本流行性腹瀉的防控中也起到了重要作用。1999年，韓國(guó)國(guó)家獸醫(yī)檢疫研究所分離出一株P(guān)EDV（KPEDV-9），通過(guò)Vero細(xì)胞傳代成功使其毒力減弱，后來(lái)該毒株也被用于流行性腹瀉弱毒苗的研制。2003年，韓國(guó)國(guó)立江原大學(xué)分離出一株P(guān)EDV（DR13）。DR13通過(guò)Vero細(xì)胞持續(xù)傳代后，其ORF3序列發(fā)生了較大變化，高代次的DR13感染仔豬后不表現(xiàn)任何臨床癥狀。而低代次的病毒感染仔豬后則出現(xiàn)典型的腹瀉癥狀，此結(jié)果表明DR13通過(guò)Vero細(xì)胞持續(xù)傳代后致病力減弱[14]。雖然PEDV有較多的疫苗株可供選擇，但分子進(jìn)化的角度分析，CV777、83P-5、KPEDV-9、DR13等毒株都屬于G1亞群。

目前臨床分離到的毒株多數(shù)為新流行毒株，其與經(jīng)典疫苗株在分子同源性方面存在較大差異，這是流行性腹瀉疫苗免疫效果不理想的重要原因。限制流性腹瀉疫苗研發(fā)的一個(gè)主要因素是病毒分離難度大，即使分離成功，病毒滴度也很難達(dá)到疫苗生產(chǎn)要求[15]。有學(xué)者通過(guò)反向遺傳系統(tǒng)建立了PEDV感染性克隆。PEDV感染性克隆的建立可以實(shí)現(xiàn)在DNA水平對(duì)PEDV基因組進(jìn)行改造，極大促進(jìn)了PEDV新型疫苗的研發(fā)[16]。PEDV S蛋白可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的中和抗體，是PEDV亞單位疫苗研發(fā)的一個(gè)熱點(diǎn)。韓國(guó)學(xué)者利用真核表達(dá)系統(tǒng)成功構(gòu)建表達(dá)了PEDV S1蛋白，用其免疫豬只后能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較高水平的中和抗體，并對(duì)強(qiáng)毒株具有一定的保護(hù)作用[17]。

4　PEDV的防控策略

近幾年的臨床實(shí)踐表明，立足于現(xiàn)有疫苗、合理調(diào)整免疫程序、適當(dāng)增加免疫次數(shù)和免疫劑量、加強(qiáng)綜合管理，可有效防控當(dāng)前的流行性腹瀉疫情。雖然經(jīng)典疫苗株（CV777）同流行毒株在分子同源性方面存在一定差異，但是經(jīng)典疫苗株對(duì)流行株具有一定的交叉保護(hù)力。免疫豬場(chǎng)即使出現(xiàn)流行性腹瀉疫情，其發(fā)病的嚴(yán)重程度和遭受的損失也會(huì)大大降低，而未免疫豬場(chǎng)一旦暴發(fā)流行性腹瀉疫情，其損失是難以想象的。

大家比較關(guān)注的另一個(gè)問(wèn)題就是活疫苗和滅活苗哪個(gè)效果更理想。國(guó)內(nèi)PEDV疫苗，無(wú)論是活疫苗還是滅活苗，其毒株均為CV777，均是通過(guò)免疫母豬產(chǎn)生母源抗體間接保護(hù)小豬。目前，PEDV免疫效果的實(shí)驗(yàn)室評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)主要包括血液中的IgG、IgA和中和抗體水平，以及母豬乳汁中的IgA水平。韓國(guó)S.Paudel通過(guò)免疫母豬對(duì)比了流行性腹瀉活疫苗和滅活苗的效果，母豬產(chǎn)前4周和2周分別免疫K/K、L/K、L/L病毒（k表示滅活苗，L表示活疫苗），結(jié)果發(fā)現(xiàn)無(wú)論是母豬血清還是乳汁以及哺乳仔豬血清中的IgG、IgA和中和抗體水平，K/K組明顯高于其他組，這為選擇理想的疫苗種類(lèi)和制定合理的免疫程序提供了參考[18]。大量臨床數(shù)據(jù)表明，無(wú)論是活疫苗還是滅活苗，大劑量多次免疫母豬可以有效提高母豬體內(nèi)的IgG、IgA和中和抗體水平，從而提高疫苗的保護(hù)率。

在飼養(yǎng)管理方面，應(yīng)注重圈舍的消毒和產(chǎn)房的保溫工作，一旦圈舍內(nèi)有發(fā)病豬只，應(yīng)馬上隔離或淘汰。對(duì)于正在發(fā)病的豬場(chǎng)，對(duì)妊娠母豬可以肌注干擾素降低體內(nèi)的病毒載量，同時(shí)對(duì)出生后的仔豬連續(xù)肌注治療劑量的干擾素，以建立被動(dòng)保護(hù)屏障。實(shí)踐中，多個(gè)豬場(chǎng)用此方案有效控制了流行性腹瀉疫情的暴發(fā)和蔓延。

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（責(zé)任編輯：杜憲）

The Prevalence and Prevention Strategies of PEDV

Lin Yaomin1，Song Wanjie2，Qin Yun2，Zhao Yongxu2，Li Hui2，
Niu Zhongwei2，Shen Shichuan2，Ju Jinan2，Guo Rui2
（1. Tianjin Farm Bohai Agriculture Group Co.，Tianjin 300000；
2. EBVAC Biological Technology Co.，Hangzhou，Zhejiang 310018）

Abstract：Porcine epidemic diarrhea is an acute intestinal disease caused by PEDV. Piglets within two weeks were seriously affected by this disease. The epidemic status，pathogenesis，vaccine progress and prevention strategies of PEDV were introduced，in order to provide reference for the prevention and control of PED.

Key words：PEDV；molecular epidemiological investigation；pathogenesis；vaccine progress；prevention strategies

中圖分類(lèi)號(hào)：S852.65

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1005-944X（2016）05-0062-03

DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2016.05.020