蔣澤平，張　敏

(江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院，江蘇　南京　211153)

金焰彩欒試管微型嫁接技術(shù)研究

蔣澤平，張敏

(江蘇省林業(yè)科學(xué)研究院，江蘇南京211153)

摘要：以金焰彩欒試管苗為接穗，黃山欒樹(shù)試管苗為砧木，對(duì)影響微嫁接苗成活的因子進(jìn)行了研究。試驗(yàn)以黃山欒樹(shù)優(yōu)良單株具腋芽莖段為外植體，滅菌后接種在1/2 MS+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d的無(wú)菌芽苗為砧木，以金焰彩欒播種苗帶側(cè)芽的莖段為外植體、滅菌后接種在改良1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)30 d的無(wú)菌芽苗為接穗，使用劈接法，嫁接后在含有不同基本培養(yǎng)基和不同種類(lèi)、質(zhì)量濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。結(jié)果表明：以培養(yǎng)30 d帶2葉的金焰彩欒試管芽苗為接穗，培養(yǎng)30 d帶2葉的黃山欒樹(shù)試管芽苗為砧木，嫁接后以改良培養(yǎng)基1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖進(jìn)行培養(yǎng)，微型嫁接苗成活率最高，萌發(fā)生長(zhǎng)效果最好。

關(guān)鍵詞：金焰彩欒；組織培養(yǎng)；微繁殖；微嫁接；砧木；接穗

文章編號(hào)：1001-7380(2015)05-0017-03

收稿日期：2015-05-25；修回日期：2015-09-12

基金項(xiàng)目：江蘇省農(nóng)業(yè)科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目“彩葉欒樹(shù)新品種選育”(BE2013450)

作者簡(jiǎn)介：蔣澤平(1963-)，男，江蘇丹陽(yáng)人，研究員，主要從事林木花卉良種選育和植物組織培養(yǎng)技術(shù)研究。

中圖分類(lèi)號(hào)：Q949.755.5；Q943.1

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

doi:10.3969/j.issn.1001-7380.2015.05.005

試管嫁接又稱(chēng)微嫁接，是一種在試管內(nèi)將砧木與接穗進(jìn)行嫁接的技術(shù)，它是植物組織培養(yǎng)與嫁接技術(shù)的結(jié)合。這種嫁接技術(shù)是以組織培養(yǎng)為基礎(chǔ)，嫁接植物在人工控制的環(huán)境條件下培養(yǎng)，排除了外界環(huán)境因素對(duì)嫁接成活的影響[1-5]。

金焰彩欒(Koelreuteriabipinnatavar integrifoliola ‘Jinyan’)是在黃山欒樹(shù)實(shí)生苗中選出的優(yōu)良品種，其主要特性是樹(shù)干或枝條呈黃色，春季新芽、葉呈桔紅色，夏季葉呈黃綠色，秋葉呈金黃色，具有很高的園藝觀(guān)賞價(jià)值。該植物主要采用嫁接方法進(jìn)行繁殖，但是繁殖速度偏低；筆者對(duì)該新品種進(jìn)行了組織培養(yǎng)技術(shù)研究并取得成功[6]，但在組織培養(yǎng)技術(shù)研究中發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)一定代數(shù)(5～8代)的繼代培養(yǎng)后，試管芽苗葉片會(huì)發(fā)生離層脫落，嚴(yán)重影響繼代繁殖。為此，在前述研究的基礎(chǔ)上，筆者以金焰彩欒為接穗，黃山欒樹(shù)為砧木進(jìn)行試管嫁接技術(shù)研究，試圖突破這一技術(shù)瓶頸，為加快繁育速度，滿(mǎn)足園林綠化市場(chǎng)需求提供技術(shù)支撐。

1材料與方法

1.1　試驗(yàn)材料

接穗和砧木分別為金焰彩欒、黃山欒樹(shù)優(yōu)良單株無(wú)菌試管芽苗。

1.2　試驗(yàn)方法

試驗(yàn)以黃山欒樹(shù)優(yōu)良單株具腋芽莖段為外植體，滅菌后接種在1/2 MS+0.5 mg/L BA+0.1 mg/L NAA 培養(yǎng)基上培養(yǎng)的無(wú)菌芽苗為砧木，以金焰彩欒播種苗帶側(cè)芽的莖段為外植體，滅菌后接種在改良1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的無(wú)菌芽苗為接穗。

嫁接用砧木試驗(yàn)：分別帶1，2，3，4片葉，以不帶葉的為對(duì)照，其中帶2片葉的砧木培養(yǎng)時(shí)間分別為15，30，45 d，以培養(yǎng)30 d帶2片葉的金焰彩欒試管芽苗為接穗；

嫁接用接穗試驗(yàn)：分別帶1，2，3葉片及莖尖，以不帶葉的為對(duì)照，其中帶2片葉的接穗培養(yǎng)時(shí)間分別為15，30，45 d，以培養(yǎng)30 d帶2片葉的黃山欒樹(shù)試管芽苗為砧木。

嫁接方式采用劈接進(jìn)行。嫁接后接種到改良1/2 MS+ 0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.05 mg/L IAA +0.02 mg/L IBA +30 g/L蔗糖的培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件為：光照度為2 500 lx，溫度條件為25～27 ℃ ，光照時(shí)間12 h/d。接種10瓶，每瓶培養(yǎng)5株。20 d后統(tǒng)計(jì)成活率和嫩芽的萌發(fā)率，研究不同砧木、不同接穗對(duì)試管嫁接效果的影響。

以改良1/2 MS，MS，WPM外加0.02 mg/L BA為基本培養(yǎng)基，附加一定質(zhì)量濃度的NAA，IBA，IAA等，以培養(yǎng)30 d帶2葉的金焰彩欒試管芽苗為接穗，培養(yǎng)30 d帶2葉的黃山欒樹(shù)試管芽苗為砧木，培養(yǎng)條件同上。嫁接20 d后，觀(guān)察嫁接苗接穗的萌發(fā)率和長(zhǎng)勢(shì)以及嫁接部位的愈合程度，研究不同培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)對(duì)試管嫁接效果的影響。

成活率(%)=(成活數(shù)/嫁接數(shù))×100；

萌發(fā)率(%)=(萌芽數(shù)/嫁接數(shù))×100。

2結(jié)果與分析

2.1　不同砧木對(duì)試管嫁接效果的影響

結(jié)果表明，7種不同類(lèi)型砧木在嫁接后其成活率有差異，不帶葉的成活率只有40%，其余類(lèi)型的嫁接成活率均在60%以上，其中成活率最高的是培養(yǎng)30 d帶2葉的砧木達(dá)88%；不同類(lèi)型砧木萌發(fā)率差異也很明顯，不帶葉的成活率只有32%，帶1葉的54%，帶4葉的56%，其余類(lèi)型的嫁接成活率均在60%以上，其中成活率最高的是培養(yǎng)30 d帶2葉的砧木達(dá)88%；從生長(zhǎng)狀況來(lái)看，同樣也以培養(yǎng)30 d帶2葉的砧木作砧木嫁接的生長(zhǎng)最好，嫁接10 d后砧木開(kāi)始產(chǎn)生不定根，20 d后芽開(kāi)始萌發(fā)并長(zhǎng)勢(shì)旺盛，其他砧木生根較慢，砧木和接穗愈合慢且生長(zhǎng)緩慢，接穗后期逐漸褐化(見(jiàn)表1)。因此，選擇培養(yǎng)30 d帶2葉的黃山欒樹(shù)無(wú)菌芽苗是試管嫁接最合適的砧木。

表1　不同砧木對(duì)試管嫁接效果的影響

2.2　不同接穗對(duì)試管嫁接效果的影響

由結(jié)果(見(jiàn)表2)可以看出，7種接穗在嫁接后20 d進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其成活率差異大。以不帶葉接穗的成活率最低，只有40% ，接穗萌發(fā)率也低，只有32%；培養(yǎng)30 d帶2葉的接穗成活率最高達(dá)88%，萌發(fā)率也最高達(dá)88%；嫁接成活率由高到低的接穗分別為培養(yǎng)30 d帶2葉>培養(yǎng)15 d帶2葉>莖尖>培養(yǎng)45 d帶2葉>帶1葉>帶3葉>不帶葉CK，相應(yīng)的萌發(fā)率的高低排序與成活率一樣。

因此，選擇帶2葉培養(yǎng)30 d的金焰彩欒無(wú)菌芽苗做接穗是試管嫁接最合適的接穗。

表2　不同接穗對(duì)試管嫁接效果的影響

2.3　不同培養(yǎng)基和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)試管嫁接效果的影響

從結(jié)果(見(jiàn)表3)可見(jiàn)，在培養(yǎng)30 d帶2葉的黃山欒樹(shù)試管芽苗做砧木，培養(yǎng)30 d帶2葉的金焰彩欒試管芽苗做接穗嫁接后在不同的培養(yǎng)基上培養(yǎng)試驗(yàn)，不同的基本培養(yǎng)基中添加不同質(zhì)量濃度的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和蔗糖的9種組合，對(duì)試管嫁接效果影響不同。處理6,5,4效果最好，萌發(fā)率分別達(dá)到88%，85%，82% ，嫁接14 d后砧木開(kāi)始生根，接穗萌發(fā)，生長(zhǎng)較好。認(rèn)為改良1/2 MS+0.02 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA +0.02 mg/L IBA +0.05 mg/L IAA +30 g/L蔗糖為最合適的嫁接培養(yǎng)基。

表3不同基本培養(yǎng)基、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑、蔗糖對(duì)試管嫁接效果的影響

處理基本培養(yǎng)基NAA/(mg/L)IBA/(mg/L)IAA/(mg/L)蔗糖/(g/L)萌發(fā)率/%1MS0.010.020.0320722MS0.030.040.0530783MS0.050.060.0840754改良1/2MS0.010.040.0840825改良1/2MS0.030.060.0320856改良1/2MS0.050.020.0530887WPM0.010.060.0530808WPM0.030.020.0840789WPM0.050.040.032070

3結(jié)論與討論

在金焰彩欒試管嫁接過(guò)程中，接穗的選擇是影響嫁接成功與否的關(guān)鍵因素之一。以培養(yǎng)30 d帶2葉的試管芽苗為接穗效果最好，其原因可能是，外植體經(jīng)組織培養(yǎng)后萌發(fā)的新芽，具有一定的木質(zhì)化，容易成活；接穗大小與砧木大小一致，嫁接后砧木和接穗更加容易愈合；培養(yǎng)30 d帶2葉的金焰彩欒試管芽苗接穗帶葉，嫁接后能進(jìn)行光合作用制造營(yíng)養(yǎng)，提高了成活率[7-8]。砧木的選擇，同樣也是影響試管嫁接成活率的關(guān)鍵因素之一[9-10]，砧木宜選擇培養(yǎng)30 d帶2葉的黃山欒樹(shù)試管芽苗做砧木，嫁接后置于生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)，這樣有利于接穗與砧木的愈合以及營(yíng)養(yǎng)的供應(yīng)，提高成活率和萌發(fā)效果。

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