呂 強(qiáng)，溫欣茹，陳晶冰 （內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市包鋼集團(tuán)第三職工醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭014010）

·藥學(xué)與轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)·

國(guó)產(chǎn)尼群地平有關(guān)物質(zhì)研究

呂 強(qiáng)，溫欣茹，陳晶冰 （內(nèi)蒙古自治區(qū)包頭市包鋼集團(tuán)第三職工醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭014010）

目的：確定尼群地平原料藥及其片劑中有關(guān)物質(zhì)的雜質(zhì)歸屬.方法：采用2010年版《中國(guó)藥典》項(xiàng)下該藥物有關(guān)物質(zhì)檢查法檢查，并采用富集分離的方法收集有關(guān)物質(zhì)，通過(guò)LC-MS-MS初步確定其分子量及其結(jié)構(gòu).結(jié)果：通過(guò)對(duì)2009年及2011年的多廠家多批次的尼群地平原料藥及片劑的考察，說(shuō)明尼群地平及其片劑中有關(guān)物質(zhì)的雜質(zhì)歸屬.結(jié)論：檢測(cè)結(jié)果對(duì)于尼群地平原料藥及其片劑的雜質(zhì)分析、質(zhì)量控制和合成工藝的改進(jìn)具有重要作用，并且為國(guó)產(chǎn)尼群地平的生產(chǎn)和用藥安全提供了檢測(cè)方法及判定依據(jù).

尼群地平片；有關(guān)物質(zhì)；雜質(zhì)歸屬

0 引言

尼群地平（Nitrendipine，NTD）由德國(guó)拜爾公司于20世紀(jì)60年代首次合成并上市，國(guó)內(nèi)于20世紀(jì)70年代開(kāi)始生產(chǎn)［1］.2010年版《中國(guó)藥典》、歐洲藥典、英國(guó)藥典、日本藥局方項(xiàng)下均收載此藥，其有關(guān)物質(zhì)的檢查方法均為液相色譜法，但目前國(guó)內(nèi)尚無(wú)關(guān)于該品種未知雜質(zhì)的研究.因此，為更好地控制該品種質(zhì)量，本研究說(shuō)明尼群地平原料藥及其片劑的雜質(zhì)歸屬，為國(guó)產(chǎn)尼群地平的生產(chǎn)提供指導(dǎo)意見(jiàn).

1 儀器和試藥

1.1 儀器Alltech液相色譜儀；PDA檢測(cè)器；SarloriusBP211D電子天平；KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器；ZF-Ⅰ型三用紫外分析儀；DHG-9145A型電熱鼓風(fēng)干燥箱；LC-20AD型液相色譜儀；API3200型質(zhì)譜儀［2］.

1.2 試藥尼群地平對(duì)照品；雜質(zhì)Ⅰ對(duì)照品；2011年尼群地平片；尼群地平原料藥；2009年尼群地平片；乙腈、四氫呋喃、甲醇為色譜純其他試劑均為分析純.

2 方法和結(jié)果

2.1 溶液的制備片劑供試品溶液：避光操作.取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，精密稱(chēng)取適量（約相當(dāng)于尼群地平50 mg），置50 mL量瓶中，加四氫呋喃12 mL，振搖10 min，再加乙腈－水（20∶56）混合溶液適量，振搖使尼群地平溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 m濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為片劑供試品溶液.對(duì)照溶液：取2，6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-3，5-吡啶二甲酸甲酯乙酯（雜質(zhì)Ⅰ）對(duì)照品，精密稱(chēng)定，加四氫呋喃適量使溶解，用乙腈－水（20∶56）混合溶液定量稀釋制成每1 mL中約含0.1 mg的溶液，精密量取1 mL，置100 mL量瓶中，精密加入濃度為1 mg／mL的尼群地平對(duì)照品溶液1 mL，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照溶液.系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：取尼群地平對(duì)照品與雜質(zhì)Ⅰ對(duì)照品各適量，加四氫呋喃適量使溶解，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1 mL中各約含1 mg與10 g的混合溶液，作為系統(tǒng)適應(yīng)性溶液［3］.

2.2 色譜條件phenomenex十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱（150 mm×4.6 mm），乙腈－四氫呋喃－水（20∶24∶56）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)237 nm；進(jìn)樣量20 L；流速為1 mL／min；柱溫：25℃.

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)分別取溶液制備項(xiàng)下的原料藥供試品溶液、片劑供試品溶液、對(duì)照溶液、空白溶劑及系統(tǒng)適應(yīng)性溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，由色譜圖可見(jiàn)，在此試驗(yàn)條件下，主峰與雜質(zhì)峰分離效果好，峰形較好，保留時(shí)間適中，其中主峰保留時(shí)間約為10.820 min，雜質(zhì)Ⅰ峰的保留時(shí)間約為8.895 min，理論塔板數(shù)為5780，尼群地平峰與雜質(zhì)Ⅰ峰的分離度為4.35符合要求［4］.

2.4 2011年份的片劑有關(guān)物質(zhì)比較分別取溶液制備項(xiàng)下片劑供試品溶液（2011年樣品），按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，由圖得出18個(gè)廠家雜質(zhì)Ⅰ的平均百分含量為0.74%，雜質(zhì)Ⅱ的平均百分含量為4.18%，雜質(zhì)Ⅲ的平均百分含量為0.94%.結(jié)果顯示：所測(cè)定的這些廠家生產(chǎn)的尼群地平片的有關(guān)物質(zhì)，除A廠、D廠外均可檢出三種雜質(zhì)，其中雜質(zhì)Ⅰ為已知雜質(zhì)，雜質(zhì)Ⅱ、雜質(zhì)Ⅲ為未知雜質(zhì)，其中，A廠、C廠、L廠、N廠、O廠、P廠、Q廠、R廠尼群地平片的有關(guān)物質(zhì)檢查不符合規(guī)定，且雜質(zhì)Ⅱ超標(biāo)是造成我國(guó)尼群地平片有關(guān)物質(zhì)超標(biāo)的主要原因，因此有必要對(duì)雜質(zhì)Ⅱ進(jìn)行深入研究［5］.

2.5 2009年份的片劑有關(guān)物質(zhì)比較分別取溶液制備項(xiàng)下的片劑供試品溶液（2009年樣品），按上述色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，由圖得出18個(gè)廠家2009年樣品雜質(zhì)Ⅰ的平均百分含量為1.12%，雜質(zhì)Ⅱ的平均百分含量為6.13%，雜質(zhì)Ⅲ的平均百分含量為1.64%.結(jié)果顯示：同一廠家的樣品，2009年份的樣品經(jīng)放置后，雖在避光條件下，雜質(zhì)Ⅰ、雜質(zhì)Ⅱ及雜質(zhì)Ⅲ的含量較2011年份的同一廠家樣品均有所增加，多數(shù)廠家的片劑有關(guān)物質(zhì)不合格原因?yàn)殡s質(zhì)Ⅱ超標(biāo)，但均未產(chǎn)生新的雜質(zhì)，且雜質(zhì)Ⅱ的超標(biāo)是造成尼群地平片不合格樣品出現(xiàn)的主要原因，所以有必要對(duì)未知雜質(zhì)進(jìn)行研究［6］.

2.6 LC-MS法解析未知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)

2.6.1 LC-MS條件 LC條件：phenomenex十八烷基硅烷健合硅膠色譜柱（250×4.6 mm），流動(dòng)相乙腈－水（70∶30）.MS條件：電噴霧離子化負(fù)離子檢測(cè)方式（ESI－）；質(zhì)核比范圍：100～500；去簇電壓（EP）：－50 V；解簇電壓（DP）：－41 V；碰撞能量（CE）：－25 eV［7］.尼群地平負(fù)離子掃描結(jié)果分析在負(fù)離子模式下，尼群地平的ESI一級(jí)掃描主要生成準(zhǔn)分離離子峰［M＋H］－，準(zhǔn)分子離子峰［M＋H］－值為m／z 359.2，選擇性對(duì)m／z 359.2準(zhǔn)分子離子峰［M＋H］－進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，產(chǎn)生的主要碎片為m／z 121.9.

2.6 2 雜質(zhì)Ⅱ的結(jié)構(gòu)解析 雜質(zhì)Ⅱ的［M＋H］－準(zhǔn)分子離子峰為m／z 345.0，說(shuō)明雜質(zhì)Ⅱ的相對(duì)分子質(zhì)量為346.雜質(zhì)Ⅱ主要的碎片離子為m／z 122.3和m／z 219.0.初步分析，其裂解途徑與尼群地平及雜質(zhì)Ⅰ相同.由以上分析，并結(jié)合合成工藝，可以得出最有可能的結(jié)構(gòu)是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3－nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.這個(gè)雜質(zhì)為尼群地平雜質(zhì)B［8］.

2.6 3 雜質(zhì)Ⅲ的結(jié)構(gòu)解析 雜質(zhì)Ⅲ的［M＋H］－準(zhǔn)分子離子峰為m／z 373，說(shuō)明雜質(zhì)Ⅲ的相對(duì)分子質(zhì)量為374.0.雜質(zhì)Ⅱ主要的碎片離子為m／z 121.2.初步分析，其裂解途徑與尼群地平及雜質(zhì)Ⅰ相同.由以上分析，并結(jié)合合成工藝，可以得出最有可能的結(jié)構(gòu)是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3－nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.這個(gè)雜質(zhì)為尼群地平雜質(zhì)C.

3 討論

經(jīng)過(guò)初篩，得出結(jié)論，不同廠家的尼群地平原料藥、尼群地平片劑有關(guān)物質(zhì)不合格的原因均為單個(gè)雜質(zhì)超標(biāo)，即雜質(zhì)Ⅱ，所以建議藥典更科學(xué)的修訂對(duì)雜質(zhì)Ⅱ的限量規(guī)定，以達(dá)到安全有效用藥的要求［9－10］.

本研究采用富集分離的方法收集有關(guān)物質(zhì)，通過(guò)LC-MS－MS初步確定未知有關(guān)物質(zhì)的分子量及其結(jié)構(gòu).得到雜質(zhì)Ⅱ可能的結(jié)構(gòu)是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3-nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.雜質(zhì)Ⅲ最有可能的結(jié)構(gòu)是dimethyl2，6-dimethyl-4-（3-nitrophenyl）-1，4-dihydropyridine-3，5-dicarboxylate.本研究為尼群地平有關(guān)物質(zhì)的進(jìn)一步研究提供依據(jù).

由于尼群地平對(duì)光不穩(wěn)定，故本試驗(yàn)應(yīng)在所有操作均應(yīng)在避光條件下進(jìn)行.

［1］馬玉榮，孫 婷，郭盈杉.HPLC法測(cè)定尼群地平片的含量［J］.藥物分析雜志，2011，31（3）：574－575.

［2］楊敏智，蔣敏陽(yáng)，陳國(guó)清.HPLC法測(cè)定尼群地平片的含量及有關(guān)物質(zhì)［J］.中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn)，2004，5（2）：53－55.

［3］李彥博，陳 林，劉 軍.鈣拮抗劑的分類(lèi)及在治療高血壓中的應(yīng)用［J］.遼寧醫(yī)學(xué)雜志，2001，15（2）：101－102.

［4］周 剛，李婭萍，王 偉，等.HPLC測(cè)定頭孢西酮鈉有關(guān)物質(zhì)［J］.藥物分析雜志，2011，31（11）：2135－2138.

［5］王佳苗.尼群地平胃漂浮緩釋微球的研究［D］.沈陽(yáng)：沈陽(yáng)藥科大學(xué)，2008.

［6］候海玲.鈣通道阻滯劑尼群地平的研究概述［J］.北方藥學(xué)，2014，11（11）：100.

［7］游本剛.尼群地平速釋、緩釋微丸的研制［D］.沈陽(yáng)：沈陽(yáng)藥科大學(xué)，2004.

［8］楊春艷.尼群地平合成工藝改進(jìn)［J］.內(nèi)蒙古石油化工，2006（2）：40－42.

［9］張玉龍.尼群地平口腔崩解片的研究［D］.沈陽(yáng)：沈陽(yáng)藥科大學(xué)，2006.

［10］孫 莉.尼群地平片有關(guān)物質(zhì)檢查方法的比較與討論［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2012，6（16）：134－135.

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A

2095-6894（2016）11-66-02

2016－09－14；接受日期：2016－09－30

呂 強(qiáng).本科，主管藥師.研究方向：藥學(xué).Tel：0472-2166149 E-mail：994215426＠qq.com