直接法和浸提液法兩種不同方法對藥包材溶血率影響的研究

趙增琳，侯麗，喬春霞，林振華

(國家食品藥品監(jiān)督管理局濟南藥品包裝材料檢驗中心，山東省醫(yī)療器械生物學(xué)評價重點實驗室，山東 濟南 250101)

摘要：目的采用直接法和浸提液法兩種檢查方法對藥品包裝材料進行評價，比較兩種方法對藥包材檢測靈敏性的差異。方法選擇11種具有代表性的藥包材，分別采用直接法和浸提液法進行溶血性能檢測，并對兩種方法測得的溶血結(jié)果進行比對。結(jié)果浸提液法溶血率大于直接法，均符合規(guī)定但不存在顯著性差異(P>0.05)。結(jié)論直接法和浸提液法均可用于藥包材的溶血性能檢測，浸提液法作為藥包材溶血性能的一個探索，更符合臨床使用特點，建議全面考察藥包材溶血性能，增加浸提液評價方法。

關(guān)鍵詞：藥包材；溶血試驗；直接法；浸提液法

作者簡介：趙增琳，女，工程師，研究方向：醫(yī)療器械生物學(xué)評價，E-mail:578216471@qq.com

通訊作者：侯麗，女，工程師，研究方向：醫(yī)療器械生物學(xué)評價，Tel:15805317508,E-mail:521keren@sina.com

中圖分類號：R927.11文獻標(biāo)識碼：A

Influence of direct contact method and extract method on the hemolytic effect

of drug packaging materials biomaterials

ZHAOZeng-lin,HOULi,QIAOChun-xia,LINZhen-hua

(StateFoodandDrugAdministrationJinanQualitySupervisionandInspectionCenterforPharmaceutical

PackagingMaterials，KeyLabofBiologicalEvaluationofMedicalDevicesof

ShandongProvince，Jinan250101，China)

Abstract：ObjectiveTo evaluate drug packaging materials by using two hemolysis methods,direct contact method and extract method.The two methods were compared in the sensitivity to detect drug packaging materials.Methods11 kinds of typical drug packaging materials were selected and their hemolytic properties were detected by direct contact method and extract method.The results of hemolysis in the two methods were compared.ResultsThe hemolysis rate of extract method was higher than the hemolysis rate of direct contact method.The hemolysis rate of two methods were both conformed to the regulations.Moreover,there was no significant difference of the direct contact method and extract method (P>0.05).ConclusionBoth of direct contact method and extract method can be used to the detection of drug packaging materials.It was an exploration that the extract method which was used to detect the hemolysis of drug packaging materials.This method was more consistent with the clinical characteristics.So the extract method should be added in the hemolytic test of drug packaging materials.

Key words:Drug Packaging materials;Hemolysis test;Direct contact method;Extract method

GB/T 16886.4 中指出溶血試驗是一項很有意義的篩選試驗[1]。溶血是指紅細(xì)胞破裂釋放出血紅蛋白的現(xiàn)象。引起溶血的原因有機械力如壓力和流變以及生物化學(xué)等方面的因素，溶血的發(fā)生在臨床上可能帶來一些不利影響，如可能導(dǎo)致肝臟和腎臟的嚴(yán)重?fù)p傷及血栓的形成，導(dǎo)致貧血并削弱載氧功能，對腦或其他器官產(chǎn)生繼發(fā)損害。一般用于評價紅細(xì)胞損傷的體外試驗方法有直接法和浸提液法。直接法可測定由于物理和化學(xué)因素對紅細(xì)胞影響導(dǎo)致的溶血，浸提液法測定試驗樣品浸提物導(dǎo)致的溶血[2]。

藥包材是指藥品生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的藥品和醫(yī)療機構(gòu)配制的制劑所使用的直接接觸藥品的包裝材料和容器[3]。它在藥物的貯存過程中，直接或間接與藥物接觸，起著保護藥品的安全和有效，方便運輸、貯存、銷售和使用等重要作用。但其可能會通過吸附、吸收、滲透和抽提等方式與藥物發(fā)生相互反應(yīng)。為保障公眾用藥安全，應(yīng)加強藥品包裝材料的質(zhì)量控制，要求其具備良好的生物安全性[4,5]。

目前，藥包材標(biāo)準(zhǔn)YBB00032003溶血檢查法中僅制定了直接接觸一種方法對其溶血性進行評價，本文對搜集的11批藥包材進行直接接觸和浸提液兩種溶血方法的比較，其目的是研究直接法和浸提液法兩種溶血檢查方法對藥品包裝材料進行的評價，比較兩種方法對藥包材檢測靈敏性的差異。

1儀器、試劑及材料

1.1儀器SIGMA 3-15離心機；DZKW-C型電熱恒溫水浴鍋；U-3900H紫外分光光度計。

1.2試劑及材料0.9%氯化鈉注射液(山東辰欣藥業(yè)股份有限公司)；蒸餾水；注射用冷凍干燥用溴化丁基橡膠塞(湖北華強科技有限責(zé)任公司，規(guī)格型號：26-Bb)；氯化丁基橡膠塞(湖北華強科技有限責(zé)任公司，規(guī)格型號：20-A)；注射用無菌粉末用溴化丁基橡膠活塞(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：20-A)；注射液用溴化丁基橡膠活塞(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：28-B-1)；筆式注射器用氯化丁基橡膠活塞(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：1 mL長/72 G 硬)；預(yù)灌封玻璃針管(帶護帽)(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：YZINCH-2)；預(yù)灌封注射器用聚異戊二烯橡膠針頭護帽(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：Y1mL細(xì)長)；預(yù)灌封注射器氯化丁基橡膠活塞[山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：0.4*18.7 RWLR(正常壁)]；筆式注射器用溴化丁基橡膠墊片(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：3MLA-4)；筆式注射器用溴化丁基橡膠活塞(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：B3mL-GL)；藥用合成聚異戊二烯墊片(山東省藥用玻璃股份有限公司，規(guī)格型號：20B2)。

2方法和結(jié)果

2.1方法

2.1.1新鮮稀釋兔血制備取新鮮抗凝兔血8 mL，加0.9%氯化鈉注射液10 mL稀釋。

2.1.2直接法試驗組一：取完整供試樣品每管加入5 g，再加入0.9%氯化鈉注射液10 mL[6]。

試驗組二：參照GB/T16886.12標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)生物學(xué)試驗浸提液制備的方法，將選取1.25 cm2·mL-1的浸提比例將試樣品投入浸提介質(zhì)(0.9%氯化鈉注射液)中(膠塞類完整投入)，另取陰性對照組每管加入0.9%氯化鈉注射液10 mL；陽性對照組每管加入蒸餾水10 mL。以上每組平行操作3 管。

將全部試管置37 ℃恒溫水浴中保溫30 min，每支試管加入0.2 mL 稀釋兔血，輕輕混勻，置37 ℃恒溫水浴中繼續(xù)保溫60 min。倒出管內(nèi)液體離心5 min。吸取上清液移入比色皿內(nèi)，用U-3900H紫外分光光度計在545 nm 波長處測定吸光度，3個平行樣吸光度值的平均值為其吸光度值。陰性對照的吸光度值不應(yīng)大于0.03，陽性對照的吸光度值應(yīng)為(0.80±0.3)，并計算溶血率[7]。

2.1.3浸提液法參照GB/T16886.12標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)生物學(xué)試驗浸提液制備的方法[8]，將試樣品投入浸提介質(zhì)(0.9%氯化鈉注射液)中(膠塞類完整投入)，選取1.25 cm2·mL-1的浸提比例，在(121±1)℃條件下浸提(1±0.1)h制備供試液。陰性對照和陽性對照同條件下進行試驗。取浸提液和對照液各10 mL，以下步驟同直接接觸法。

溶血率的計算公式如下:

若溶血率<5%，則說明材料符合醫(yī)用材料的溶血試驗要求。

2.2結(jié)果直接法和浸提液法兩種方法對供試品的溶血試驗吸光度平均值見表1，溶血率結(jié)果見表2。

表1　溶血試驗的吸光度平均值

表2　溶血試驗結(jié)果

表1、表2顯示，直接接觸法中試驗組一的結(jié)果和試驗組二的結(jié)果之間不存在差異(P>0.05)，浸提液法溶血率結(jié)果大于直接法溶血率結(jié)果，兩種不同接觸方法對藥包材溶血試驗溶血率檢查結(jié)果均符合規(guī)定，而且兩種方法之間不存在差異(P>0.05)。直接接觸法的溶血率和浸提液法溶血率比較，數(shù)值相對較小，偶爾出現(xiàn)相反結(jié)果(9號產(chǎn)品)，也在規(guī)定范圍內(nèi)，而且絕對值比較小，沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

3討論

血液相容性評價是所有用于與血液直接/間接接觸的醫(yī)療器械和生物材料在臨床應(yīng)用前所必須進行的一項工作，在眾多的血液相容性試驗中，溶血試驗是國內(nèi)外各實驗室開展比較多的一項試驗。溶血試驗適用于材料的體外急性溶血性能評價。材料和血液接觸時，其溶血成分的存在可導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞，血紅蛋白釋放，從而使游離血漿血紅蛋白增加，產(chǎn)生對機體的毒副作用。通過材料或其溶出物與血液接觸可檢測材料的可溶性或釋放性成分的溶血性能及材料表面的溶血性能。

藥品包裝的材料，尤其是直接接觸藥液的包裝材料，對保證藥品穩(wěn)定性起決定性作用。由于藥包材與藥品的接觸時間可能長達整個藥品的有效期，因此應(yīng)加大對藥包材溶血性的重視[9]。以往對于藥包材生物材料的溶血性能評價基本上依據(jù)YBB系列標(biāo)準(zhǔn)中推薦的方法，這種直接接觸法主要是對由紅細(xì)胞與樣品之間物理和化學(xué)相互作用所導(dǎo)致的溶血現(xiàn)象的評價,能夠比較直觀的模擬材料的最終應(yīng)用狀態(tài)，適用于與藥品短時間接觸的被測樣品。對于長時間與藥品接觸的藥包材，其材料中存在某些低分子可溶性物質(zhì)的溶出過程可能比較緩慢，因此在直接接觸法中材料與介質(zhì)的接觸時間并不能很好的體現(xiàn)樣品的實際臨床應(yīng)用過程。而浸提液法則是能夠客觀評價樣品中可溶出成分引起的溶血現(xiàn)象，浸提法的浸提時間可根據(jù)材料的不同特性加以延長，從而有效避免了因化學(xué)因素、物理因素及樣品的形狀等表面物理形狀原因所導(dǎo)致的溶血現(xiàn)象發(fā)生。

本研究選用了11種藥包材生物材料，參照GB/T16886.12標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)生物學(xué)試驗浸提液制備的方法中浸提比例的選擇，對于厚度大于1.0 mm的材料易選取1.25 cm2·mL-1的比例，所以本研究中直接接觸法和浸提液法兩種方法下都選取了1.25 cm2·mL-1的比例做比較。從溶血試驗的結(jié)果來看，直接接觸法兩種比例下的溶血率結(jié)果無顯著性差異，均很低或等于零，說明不同濃度的材料直接接觸血液后對血細(xì)胞的損傷程度較低，而浸提液法在121 ℃條件下所得的溶血率相對高于直接接觸法結(jié)果，結(jié)果均符合藥包材生物材料溶血試驗要求，但溶血率之間無統(tǒng)計學(xué)差異。說明這11種藥包材生物材料在121 ℃條件下浸提液法作用下對紅細(xì)胞有影響的可溶性成分的溶出大于直接接觸法，但并不明顯。由于本研究只選用11種材料，而且在浸提溫度的選擇上只選取了121 ℃這一種條件，對于其他溫度條件下的溶血率結(jié)果不能全面評估。所得試驗結(jié)果是否對各種藥包材生物材料都具有代表性還有待進一步證實。

本研究比較了藥包材在直接接觸法與浸提液法對溶血率的影響，該研究工作在國內(nèi)外還未曾見有報道，所以，從某種意義上講，浸提法作為一種現(xiàn)行直接接觸法的補充試驗，是對溶血試驗作為檢測藥包材生物材料溶血性能的一個探索，更符合臨床應(yīng)用特點。對一種未知的生物材料來說，最好進行直接接觸法和浸提法兩種不同方法的比較，為評價醫(yī)療器械和生物材料臨床應(yīng)用的安全性提供一種新的科學(xué)手段。

參考文獻：

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[8] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T 16886.12-2005 醫(yī)療器械生物學(xué)評價-第12部分:樣品制備與參照樣品[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2005.

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