祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)偏頭痛大鼠鎮(zhèn)痛效應(yīng)及內(nèi)皮素1及5-羥色胺含量的影響※

李瑞杰冀緒白杏強(qiáng)1張曉雙2司寧寧3

(河北省新樂市中醫(yī)院中風(fēng)病科，河北新樂050700)

【摘要】目的觀察祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)偏頭痛大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及可能機(jī)制。方法將72只SD大鼠隨機(jī)分為6組，即空白組、模型組、正天丸組和祛風(fēng)清熱定痛方大、中、小劑量組，每組各12只，分別予相應(yīng)藥液灌胃給藥，連續(xù)7 d。除空白組外，其余5組大鼠通過熱板法測(cè)定痛閾值，然后以硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型，放免法檢測(cè)各組大鼠血漿中內(nèi)皮素1(ET-1)、5-羥色胺(5-HT)含量。結(jié)果與模型組同期比較，祛風(fēng)清熱定痛方大、中劑量組60、120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)，祛風(fēng)清熱定痛方小劑量組、正天丸組120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)。與模型組比較，祛風(fēng)清熱定痛方大、中、小劑量組及正天丸組ET-1含量均明顯降低，5-HT含量均明顯增加，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與正天丸組比較，祛風(fēng)清熱定痛方大、中劑量組ET-1含量明顯降低，5-HT含量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，小劑量組ET-1和5-HT含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組相比，祛風(fēng)清熱定痛方中劑量組ET-1和5-HT含量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，小劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論祛風(fēng)清熱定痛方具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其調(diào)節(jié)偏頭痛模型大鼠血漿5-HT、ET-1含量可能是治療偏頭痛的機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】偏頭痛；祛風(fēng)；清熱；鎮(zhèn)痛；中醫(yī)藥療法；止痛劑(中藥)；放射免疫測(cè)定； 內(nèi)皮縮血管肽類 ；血清素；疾病模型, 動(dòng)物

doi:10.3969/j.issn.1002-2619.2015.08.022

【中圖分類號(hào)】R-332; R287;R747.205.31 ；R349.21

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1002-2619(2015)08-1183-04

作者簡(jiǎn)介：李瑞杰(1979—)，男，主治中醫(yī)師，碩士。研究方向：腦血管病的臨床及實(shí)驗(yàn)研究、重癥醫(yī)學(xué)工作。

Abstract【】ObjectiveTo observe the therapeutic effects of Qufeng-qingre-dingtong decoction in migraine rats and its possible mechanism.Methods72 SD rats were randomly divided into six groups, that the blank group, model group, Zhengtian pill group, and high, middle, low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group.Twelve SD rats in each groups, and all rats received corresponding drug for 7 d by gavage.Besides blank group, rats in other five groups were constructed in migraine model by nitroglycerin after the pain-threshold measured by hot plate test.The contents of serum endothelin-1 (ET-1) and 5-hydroxytryptamine (5-HT) were detected by radioimmunoassay.ResultsCompared with model group over the same period, the pain-threshold in high, middle dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group were obviously increased at 60, 120, 180 min (P<0.05), the pain-threshold in low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group and Zhengtian pill group were obviously increased at 120, 180 min (P<0.05).Compared with model group, the content of ET-1 was obviously decreased in high, middle, low dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group and Zhengtian pill group, the differences were statistical significance (P<0.05).Compared with Zhengtian pill group, the content of ET-1 were obviously decreased in high, middle dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group, and the content of 5-HT was obviously increased, the differences were statistical significance (P<0.05).There was no statistical significance on ET-1 and 5-HT between Zhengtian pill group and low dose group (P>0.05).Compared with high dose of Qufeng-qingre-dingtong decoction group, there was statistical significance on ET-1 and 5-HT in middle dose group (P<0.05), and there was no statistical significance in low dose group (P>0.05).ConclusionQufeng-qingre-dingtong decoction has significant analgesic effect, can regulate the contents of serum 5-HT, ET-1 in migraine rats, it could be the one of the analgesia mechanism.

收稿日期：(2014-03-09)

※ 項(xiàng)目來源：河北省中醫(yī)藥管理局2011年度中醫(yī)藥類科研計(jì)劃課題(編號(hào)：2011141)

1河北省新樂市長(zhǎng)壽街道辦事處社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，河北新樂050700

2陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥教研室，陜西咸陽712046

3河北省灤平縣中醫(yī)院內(nèi)甘肅天水市中醫(yī)醫(yī)院成甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附院科，河北灤平068250

Observation of Qufeng-qingre-dingtong decoction on Analgesia effects and the content of ET-1, 5-HT in migraine ratsLIRuijie*,JIXu,BAIXingqiang,etal.*DepartmentofStroke,XinleCityHospitalofTraditionalChineseMedicineinHebeiProvince,Hebei,Xinle050700

【Key words】Migraine; Expelling wind; Clearing heat; Analgesia; Traditional Chinese Medicine; Paregoric (Chinese herbs); Radioimmunoassay; Endothelin; Serotonin; Disease models；Animal

偏頭痛是一種具有遺傳性及復(fù)發(fā)性的頭痛綜合征，其發(fā)病機(jī)制至今無統(tǒng)一理論解釋，目前多認(rèn)為其發(fā)作與神經(jīng)血管痛覺傳導(dǎo)通路的活化及神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)密切相關(guān)。偏頭痛發(fā)作過程中始終存在單胺類神經(jīng)遞質(zhì)如5-羥色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)及血管活性物質(zhì)如內(nèi)皮素(ET)、降鈣素相關(guān)基因肽(CRRP)等含量異常[1]。祛風(fēng)清熱定痛方是我院臨床治療偏頭痛的經(jīng)驗(yàn)方，臨床療效確切[2-3]。為進(jìn)一步明確其作用機(jī)制，我們通過實(shí)驗(yàn)研究觀察祛風(fēng)清熱定痛方對(duì)大鼠的鎮(zhèn)痛效應(yīng)及對(duì)硝酸甘油致偏頭痛大鼠血漿中ET-1、5-HT含量的影響，探討其治療偏頭痛作用機(jī)制。

1材料與方法

1.1材料

1.1．1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠72只，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量(280±20)g，由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)SCXK(軍)2009-005。

1.1.2藥材及試劑祛風(fēng)清熱定痛方(藥物組成：川芎20 g，白芍藥10 g，柴胡10 g，香附10 g，白芷12 g，地龍10 g，藁本9 g，薄荷 6 g, 黃芩10 g,羌活8 g，甘草6 g)水煎液，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)中藥藥理研究室制備。正天丸(華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字Z44020711，6 g/袋)，硝酸甘油注射液(四環(huán)藥業(yè)股份有限公司，國藥準(zhǔn)字H20057880，5 mg/mL)。ET- 1(HY-10047)、5-HT(HY-10164)放免試劑盒 (北京科美東雅生物技術(shù)有限公司)。

1.1.3主要儀器冷熱板痛覺測(cè)痛儀(上海玉研科學(xué)儀器有限公司)，放免儀(XH6080型，西安核儀器廠)、電子天平(EX-200013，上海第一儀器廠)，溫度計(jì)、秒表、手術(shù)器械、低溫離心機(jī)、移液槍等實(shí)驗(yàn)器械，由陜西中醫(yī)藥大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動(dòng)物分組將72只SD大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為6組，即空白組、模型組、正天丸組和祛風(fēng)清熱定痛方大、中、小劑量組，每組各12只。各組互相隔離飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)溫度維持在 17～24 ℃，12 h為1個(gè)光照周期，喂養(yǎng)顆粒型普通大鼠飼料，自來水為大鼠飲用水。

1.2.2給藥方法正天丸按臨床用藥劑量用蒸餾水配制成1.24 g/kg懸濁液，祛風(fēng)清熱定痛方按人體等效量用蒸餾水配制成大劑量(0.6 g/kg)、中劑量(0.3 g/kg)、小劑量(0.15 g/kg)懸濁液置冰箱冷藏備用。空白組及模型組大鼠予1 mL/100 g 0.9%氯化鈉注射液灌胃，正天丸組和祛風(fēng)清熱定痛方大、中、小劑量組予等容積相應(yīng)藥液灌胃給藥，均每日1次，連續(xù)7 d。

1.2.3觀察指標(biāo)及方法

1.2.3.1痛閾值測(cè)定除空白組外，其余5組大鼠首先進(jìn)行基礎(chǔ)痛閾值(0 min)測(cè)定，末次給藥后30、 60、120及180 min分別檢測(cè)大鼠痛閾值。方法：分別將各組大鼠放在(55±5) ℃冷熱板痛覺測(cè)痛儀上，即開始計(jì)時(shí)，待大鼠出現(xiàn)添后足則停止計(jì)時(shí)，這段時(shí)間為大鼠痛閾值。如出現(xiàn)跳躍、快速走動(dòng)等逃避反應(yīng)則淘汰此大鼠。60 s規(guī)定為痛閾最高值,如果超過60 s，痛閾值則記為60 s。

1.2.3.2ET- 1、5-HT測(cè)定痛閾值測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，除空白對(duì)照組外，其余5組大鼠分別予硝酸甘油注射液10 mg/kg腹部皮下注射，復(fù)制偏頭痛模型，以大鼠出現(xiàn)煩躁、撓頭、臉紅、拍臉、爬籠次數(shù)增多為造模成功?？瞻捉M予等容量0.9%氯化鈉注射液腹部皮下注射。模型制備成功4 h后，6組大鼠以10%烏拉坦1 mL/100 g腹腔麻醉，頸總動(dòng)脈插管取血2 mL，迅速注入抗凝管中，混勻，4 ℃，3 000 r/min離心10 min，分離血漿，置-20 ℃冰箱備用。放射免疫分析法測(cè)定ET-1、5-HT含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，組間比較差采用單因素方差分析，采用t檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.15組大鼠不同時(shí)段痛閾值比較見表1。

表1　5組大鼠不同時(shí)段痛閾值比較　s， ± s

表1　5組大鼠不同時(shí)段痛閾值比較　s， ± s

組 別n0min30min60min120min180min模型組1219.31±5.3819.41±5.4819.51±5.1119.61±6.2919.21±5.44正天丸組1219.31±5.4122.3±5.0125.01±7.1227.01±5.95*24.75±6.52*祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組1221.44±4.5423.01±4.6125.11±5.73*28.31±6.91*25.32±5.05*祛風(fēng)清熱定痛方中劑量組1219.51±6.1523.21±5.5126.61±7.51*31.12±6.52*26.21±7.64*祛風(fēng)清熱定痛方小劑量組1219.51土6.6021.42±7.0623.62±7.5627.01±5.31*24.32±8.24*

與模型組同期比較，*P<0.05

由表1可見，5組大鼠基礎(chǔ)痛閾值無明顯差異(P>0.05)。與模型組同期比較，祛風(fēng)清熱定痛方大、中劑量組60、120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)，祛風(fēng)清熱定痛方小劑量組、正天丸組120、180 min痛閾值均顯著提高(P<0.05)。

2.26組大鼠血漿ET-1及5-HT含量比較見表2。

表2　6組大鼠血漿ET-1及5-HT含量比較　pg/mL， ± s

表2　6組大鼠血漿ET-1及5-HT含量比較　pg/mL， ± s

組 別n劑量(g/kg)ET-15-HT空白組12—107.54±5.065008.84±948.89模型組12—143.46±5.52*2513.45±450.65*正天丸組121.24117.25±12.09△3036.66±655.63△祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組120.6117.20±13.63△#3266.98±805.40△#祛風(fēng)清熱定痛方中劑量組120.3121.56±14.01△#○3101.13±361.92△#○祛風(fēng)清熱定痛方小劑量組120.15119.53±13.29△2927.94±715.70△

與空白組比較，*P<0.05；與模型組比較，△P<0.05；與正天丸組比較，#P<0.05 ；與祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組比較，○P<0.05

由表2可見，與空白組比較，模型組血漿ET-1含量增高，5-HT含量降低(P<0.05)，提示造模成功。與模型組比較，祛風(fēng)清熱定痛方大、中、小劑量組及正天丸組ET-1含量均明顯降低，5-HT含量均明顯增加，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與正天丸組比較，祛風(fēng)清熱定痛方大、中劑量組ET-1含量明顯降低，5-HT含量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，小劑量組ET-1和5-HT含量無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與祛風(fēng)清熱定痛方大劑量組相比，祛風(fēng)清熱定痛方中劑量組ET-1和5-HT含量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，小劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

3討論

疼痛可由多種原因?qū)е?，?duì)于藥物鎮(zhèn)痛研究分物理刺激法和化學(xué)刺激法。熱板反應(yīng)為高級(jí)中樞參與的物理刺激反應(yīng)，可反應(yīng)中樞鎮(zhèn)痛作用，故本研究選用熱板法研究祛風(fēng)清熱定痛方的鎮(zhèn)痛作用。由于硝酸甘油誘發(fā)偏頭痛動(dòng)物模型造模簡(jiǎn)單、易成功、動(dòng)物易于獲得，且硝酸甘油能導(dǎo)致明顯的中樞和周圍血管擴(kuò)張，從而產(chǎn)生搏動(dòng)性頭痛的相似性，因此實(shí)驗(yàn)選擇皮下注射硝酸甘油制備偏頭痛大鼠模型。

ET是由21個(gè)氨基酸組成的生物活性多肽，是至今發(fā)現(xiàn)體內(nèi)最強(qiáng)的血管收縮因子。腦血管是ET-1較敏感的效應(yīng)器官之一，ET-1可導(dǎo)致腦血管強(qiáng)烈而持久的收縮[4]，導(dǎo)致偏頭痛發(fā)作[5]。既往研究發(fā)現(xiàn)，偏頭痛患者血漿、腦脊液中ET含量較正常明顯增高，說明血漿ET水平的升高和持續(xù)異常共同構(gòu)成了偏頭痛的病理生理學(xué)基礎(chǔ)[6]。5-HT是偏頭痛發(fā)作中重要的神經(jīng)遞質(zhì)，在偏頭痛發(fā)生過程中通過誘導(dǎo)或激活血管內(nèi)皮細(xì)胞及各種酶類，加速一氧化氮(NO)、ET合成或釋放的同時(shí)，自身亦降解，而致血管擴(kuò)張產(chǎn)生頭痛癥狀[7]，5-HT代謝紊亂是偏頭痛發(fā)病的核心[8]。因此，ET-1和5-HT是觀察藥物治療偏頭痛的重要治療靶目標(biāo)。

偏頭痛屬中醫(yī)學(xué)中頭痛范疇，其病位在頭，與肝、腎、脾密切相關(guān)，風(fēng)、火、痰、瘀、虛為主要致病因素。其中風(fēng)邪為首要致病因素，諸邪皆可化熱，熱極又可生風(fēng)，風(fēng)熱上擾清竅，致氣血逆亂，腦脈痹阻，不通則痛。據(jù)此，我們認(rèn)為偏頭痛的病機(jī)特點(diǎn)多為風(fēng)熱上擾，腦脈痹阻。治宜清熱祛風(fēng)，活血止痛，擬祛風(fēng)清熱定痛方治療?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)，方中川芎嗪通過抑制組胺、5-HT的合成及釋放起到抗炎、止痛作用[9]；白芍藥具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎等作用[10]；香附具有解熱、鎮(zhèn)痛等作用[11]；白芷鎮(zhèn)痛效果顯著，尤其在血管神經(jīng)性頭痛中被廣泛應(yīng)用[12]；地龍有解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、降壓等作用[13]。對(duì)照藥物正天丸具有疏風(fēng)活血、養(yǎng)血平肝、通絡(luò)止痛的功效，在臨床上廣泛用于外感風(fēng)邪、瘀血阻絡(luò)、血虛失養(yǎng)、肝陽上亢引起的偏頭痛、緊張性頭痛、神經(jīng)性頭痛、頸椎病型頭痛、經(jīng)前頭痛，故選為對(duì)照藥物。

本研究結(jié)果顯示，祛風(fēng)清熱定痛方大、中、小劑量組和正天丸組均有鎮(zhèn)痛作用，以祛風(fēng)清熱定痛方大、中劑量組鎮(zhèn)痛作用最強(qiáng)，優(yōu)于正天丸組，提示祛風(fēng)清熱定痛方具有一定的中樞鎮(zhèn)痛作用。模型組大鼠應(yīng)用硝酸甘油誘導(dǎo)使5-HT明顯下降，ET-1增高，提示血漿中神經(jīng)遞質(zhì)和血管收縮因子含量紊亂，產(chǎn)生偏頭痛癥狀。給藥后，該方各劑量組均能降低血漿中ET-1含量，增加5-HT含量，以大、中劑量組作用最強(qiáng)，且優(yōu)于正天丸組，提示祛風(fēng)清熱定痛方具有調(diào)節(jié)血漿ET-1、5-HT含量的作用，這可能是該方治療偏頭痛的作用機(jī)制，值得進(jìn)一步研究。

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(本文編輯：曹志娟)

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首屆“互聯(lián)網(wǎng)+”中醫(yī)藥創(chuàng)新論壇舉辦

首屆“互聯(lián)網(wǎng)+”中醫(yī)藥創(chuàng)新論壇7月5日在京召開。來自互聯(lián)網(wǎng)界、中醫(yī)藥界與投資界的權(quán)威人士共同探究互聯(lián)網(wǎng)給中醫(yī)藥帶來的機(jī)遇與挑戰(zhàn)。國家中醫(yī)藥管理局副局長(zhǎng)、中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)副會(huì)長(zhǎng)馬建中表示，要充分發(fā)揮“互聯(lián)網(wǎng)+”的優(yōu)勢(shì)，進(jìn)一步加強(qiáng)國家層面和相關(guān)領(lǐng)域中醫(yī)藥二級(jí)信息平臺(tái)的建設(shè)，通過云計(jì)算、物聯(lián)網(wǎng)、大數(shù)據(jù)等信息化技術(shù)，使中醫(yī)藥信息化建設(shè)發(fā)展覆蓋全國中醫(yī)醫(yī)療、教學(xué)、科研機(jī)構(gòu)及中醫(yī)藥企業(yè)要充分發(fā)揮“互聯(lián)網(wǎng)+”的優(yōu)勢(shì)，推動(dòng)中醫(yī)藥文化傳播，努力構(gòu)造新的中醫(yī)藥文化現(xiàn)代傳播體系，豐富傳播手段，創(chuàng)新傳播方式，建立多樣化的中醫(yī)藥文化傳播平臺(tái)，推動(dòng)中醫(yī)藥文化建設(shè)形成新載體，加速中醫(yī)藥文化的國內(nèi)、國際傳播。通過互聯(lián)網(wǎng)醫(yī)療，可提高中醫(yī)藥健康服務(wù)水平，做到“未病先防”，方便患者及時(shí)治療，進(jìn)而在醫(yī)生指導(dǎo)下，制定有中醫(yī)特色的、量身定做的調(diào)護(hù)方案，真正做到“病后防復(fù)”，也對(duì)提升基層中醫(yī)藥服務(wù)能力和水平有重要意義。

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