林衍峰+嚴(yán)云志

摘要：針對(duì)目前光唇魚(yú)人工繁殖操作繁瑣、親魚(yú)死亡率高、繁殖率較低的問(wèn)題，研制了一種激素口服顆粒。將LHRH-A2、HCG和DOM溶解于生理鹽水中，吸附于浮性顆粒餌料內(nèi)，表面涂覆一層添加維生素E的鴨油制成催熟劑和催產(chǎn)劑。用投喂的方式對(duì)光唇魚(yú)進(jìn)行催熟和催產(chǎn)，平均每尾雌魚(yú)產(chǎn)卵677粒、出苗372尾，平均受精率71.19%、孵化率77.25%。光唇魚(yú)口服催熟劑最佳劑量為（LHRH-A2）7.5 μg/kg體重·次，口服催產(chǎn)劑最佳劑量為（LHRH-A2）45 μg+（HCG）1 500 IU+（DOM）18 mg/kg體重。

關(guān)鍵詞：光唇魚(yú);人工繁殖;催熟劑;催產(chǎn)劑;口服劑

中圖分類(lèi)號(hào)：S961.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

在魚(yú)類(lèi)人工繁殖中普遍使用注射激素法，此外還有浸泡法[1]、口服法[2]、埋植法[3]等。有研究證明，促性腺激素釋放激素（GnRH）及其類(lèi)似物口服后經(jīng)魚(yú)類(lèi)的消化道吸收進(jìn)入血液循環(huán)，從而刺激腦垂體促性腺激素（GtH）細(xì)胞的分泌活動(dòng)[4]，適用于一些難以注射操作、極易產(chǎn)生應(yīng)激死亡的小型魚(yú)類(lèi)的人工繁殖。光唇魚(yú)（Acrossocheilus fasciatus）個(gè)體小，平均懷卵量3 736粒/尾，體重相對(duì)懷卵量85粒/g[5]，種群內(nèi)個(gè)體性成熟不同步[6]，體質(zhì)嬌嫩、應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈，大規(guī)模人工繁殖較為困難。頡志剛采用注射催產(chǎn)、人工授精，催產(chǎn)率達(dá)到80%以上[7]。巫一安等用注射催產(chǎn)，自然產(chǎn)卵率超65%，產(chǎn)后親魚(yú)死亡率50%左右[8]。張玉明等在餌料中添加維生素E促進(jìn)性腺發(fā)育，用微流水刺激誘導(dǎo)親魚(yú)在6 d中分批產(chǎn)卵，每尾雌魚(yú)平均產(chǎn)卵341粒、出苗203尾[9]。針對(duì)目前人工繁殖操作繁瑣、親魚(yú)死亡率高、繁殖率較低的問(wèn)題，本試驗(yàn)采用投喂激素法進(jìn)行催產(chǎn)，以期找到一種安全高效的光唇魚(yú)人工繁殖方法。

1材料與方法

1.1親魚(yú)來(lái)源與培育

試驗(yàn)用光唇魚(yú)為2～3冬齡性成熟個(gè)體，體重45～55 g，于2015年1月采自休寧縣率水河，在黃山市恒坤自然觀光農(nóng)業(yè)有限公司流水魚(yú)池中馴養(yǎng)。混凝土制流水魚(yú)池長(zhǎng)6.5 m、寬3.9 m、深12 m，池內(nèi)水深0.4～0.6 m，流速0.01～0.2 m/s。水源從迴嶺河引入，水質(zhì)清澈，水溫3～23 ℃，溶氧量8 mg/L以上，pH值6.73～7.12，鹽度小于0.01‰，可溶解固體總量小于9.7。2015年3月水溫達(dá)到10 ℃時(shí)開(kāi)始馴食，投喂蛋白含量40%的浮性顆粒餌料，每天6：00、18：00各投喂1次，根據(jù)攝食情況調(diào)整投喂量，每次控制在20 min內(nèi)吃完。

1.2雌雄比例和養(yǎng)殖密度

雌性體側(cè)有6條黑色橫斑，雄性沿體側(cè)有1條黑色縱條、胸部有玫瑰紅色的渲染[9]。試驗(yàn)分為5組，每組2個(gè)試驗(yàn)重復(fù)，另設(shè)2個(gè)對(duì)照組，共12個(gè)魚(yú)池。每池放養(yǎng)100尾親魚(yú)，密度約4尾/m2，雌雄比例1∶1。

1.3口服劑型制備

將激素溶解于生理鹽水中，均勻噴灑在蛋白含量40%的浮性顆粒餌料上，晾干后表面涂覆一層添加維生素E的鴨油制成口服催產(chǎn)劑，置于2～4 ℃冷藏箱中避光保存。其中鴨油用量為餌料重量5%，維生素E添加量為鴨油重量0.1%。

1.4激素組合及用量設(shè)計(jì)

激素采用寧波激素二廠生產(chǎn)的促黃體素釋放激素A2（LHRH-A2）、絨促激素（HCG）和多潘立酮（DOM）。根據(jù)預(yù)先用注射法所做敏感性試驗(yàn)得知催熟劑劑量為（LHRH-A2）2.5 μg/kg體重、催產(chǎn)劑劑量為（LHRH-A2）15 μg+（HCG）500 IU+（DOM）6 mg/kg體重，根據(jù)注射法激素濃度擴(kuò)大設(shè)置5個(gè)倍數(shù)濃度梯度和1個(gè)空白對(duì)照組，各組激素含量見(jiàn)表1。表1各組激素含量表

劑型分組每100g餌料中催產(chǎn)藥物含量ⅠⅡⅢⅣⅤ對(duì)照組催熟劑催產(chǎn)劑LHRH-A2/μg255075100125/LHRH-A2/μg150300450600750/HCG/IU5 00010 00015 00020 00025 000/DOM/mg60120180240300/1.5投喂激素催熟

水溫穩(wěn)定達(dá)到18 ℃以上1周后，從2015年5月10日開(kāi)始投喂催熟劑，每隔7 d于18點(diǎn)投喂1次，投喂量為魚(yú)群體重1%。在長(zhǎng)0.6 m、寬0.5 m、深0.15 m的塑料框內(nèi)，內(nèi)襯40目紗絹制成的網(wǎng)箱，底部鋪設(shè)一層直徑10～15 mm礫石作為光唇魚(yú)的產(chǎn)卵巢，水溫達(dá)到20 ℃以上時(shí)在池中進(jìn)水口處放置4個(gè)產(chǎn)卵巢。

1.6投喂激素催產(chǎn)

經(jīng)4～6周的催熟培育，雌魚(yú)腹部膨大柔軟，雄魚(yú)體側(cè)的縱行黑紋異常醒目、黑紋上下現(xiàn)耀眼金黃色過(guò)渡帶、胸部呈鮮艷紅色、口角布滿(mǎn)凸起的白色珠星，當(dāng)雄魚(yú)在產(chǎn)卵巢附近追逐雌魚(yú)，表明親魚(yú)性腺已發(fā)育成熟。先停食1 d，次日6點(diǎn)投喂催產(chǎn)劑，投喂量為魚(yú)群體重1%。

1.7受精卵收集孵化

水溫20～23 ℃時(shí)，投喂催產(chǎn)劑后14～20 h開(kāi)始產(chǎn)卵，至次日凌晨產(chǎn)卵結(jié)束。產(chǎn)卵時(shí)需經(jīng)常收集受精卵，防止雄魚(yú)吞食。用孔徑5 mm塑料篩將受精卵和礫石分離，受精卵放在孵化箱中置于孵化池中孵化。孵化箱邊長(zhǎng)0.5 m、深0.1 m，用60目紗絹制成，固定在木制框架內(nèi)，每箱裝受精卵1萬(wàn)粒。孵化池用混凝土制成，長(zhǎng)5 m、寬3 m、深1 m，水深0.3～0.4 m，上方架設(shè)遮陽(yáng)棚避免陽(yáng)光直射。孵化用水經(jīng)沉淀后用80目篩絹過(guò)濾，防止泥漿和生物敵害進(jìn)入。孵化池內(nèi)流速002～0.05 m/s，溶氧保持在6 mg/L以上。水溫20～23 ℃條件下，經(jīng)70～95 h孵化出苗，孵化7～8日后進(jìn)入平游期、開(kāi)始攝食餌料。

2試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，5個(gè)試驗(yàn)組均成功產(chǎn)卵，對(duì)照組僅有零星產(chǎn)卵未做統(tǒng)計(jì)。試驗(yàn)組產(chǎn)卵總量33.84萬(wàn)粒，獲得受精卵24.09萬(wàn)粒，孵化出苗18.61萬(wàn)尾，平均受精率71.19%，平均孵化率為77.25%，平均每尾雌魚(yú)產(chǎn)卵677粒，平均每尾雌魚(yú)繁殖幼魚(yú)372尾。表2產(chǎn)卵孵化情況表

組別ⅠⅡⅢⅣⅤ對(duì)照組池號(hào)123456789101112產(chǎn)卵日期6月26-30日6月24-25日6月23日6月16日6月9日7月12-20日產(chǎn)卵/萬(wàn)粒1.852.012.171.964.013.534.243.696.254.13受精/萬(wàn)粒1.481.411.591.643.323.253.233.422.232.52出苗/萬(wàn)尾1.011.091.351.212.943.032.412.721.291.56受精率/%80.0070.1573.2783.6782.7992.0776.1892.6835.6861.02孵化率/%68.2477.3084.9173.7888.5593.2374.6179.5357.8561.90產(chǎn)卵/?！の?13704024343928027068487381250826出苗/尾·尾-1202218270242588606482544258312零星產(chǎn)卵

未做統(tǒng)計(jì)3討論

3.1口服催產(chǎn)劑的制備工藝

與注射法相比，投喂法需要解決激素能被光唇魚(yú)攝食并避免在水體中溶解損失的問(wèn)題。隨著餌料加工和藥物制劑工藝的發(fā)展，出現(xiàn)了不溶于水的微囊[10]和避免被胃液分解的腸溶微囊[11]，用微囊或腸溶微囊制成的激素制劑損失小、吸收率高，但制備工藝復(fù)雜、成本較高，一般養(yǎng)殖場(chǎng)不具備加工條件。光唇魚(yú)沒(méi)有胃，激素不會(huì)被胃液分解失效，只需解決激素在池水中溶解損失和如何被親魚(yú)主動(dòng)攝食的問(wèn)題。本試驗(yàn)用光唇魚(yú)習(xí)慣攝食的浮性膨化顆粒餌料作激素載體，表面涂覆油脂防止激素在水中溶解損失，添加VE防止脂肪氧化變質(zhì)，具有工藝簡(jiǎn)單、成本低廉、給藥方便、繁殖率高的優(yōu)點(diǎn)，普通養(yǎng)殖場(chǎng)均能使用，可滿(mǎn)足光唇魚(yú)規(guī)模化人工繁殖的需求。

3.2光唇魚(yú)口服激素的劑量

本試驗(yàn)用投喂激素法進(jìn)行光唇魚(yú)人工繁殖，獲得了比注射激素法更好的繁殖效果，證明催產(chǎn)激素可以經(jīng)光唇魚(yú)消化道吸收進(jìn)入血液而保持生物活性。因?yàn)榇弋a(chǎn)激素通過(guò)魚(yú)類(lèi)消化道吸收會(huì)有部分損失，所以口服法需要較高的劑量才能達(dá)到較好的催熟催產(chǎn)效果[4]。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著劑量增加，光唇魚(yú)性成熟日期提前、產(chǎn)卵量增加、產(chǎn)卵耗時(shí)減少，當(dāng)劑量超過(guò)注射法3倍以上時(shí)，受精率、孵化率和出苗量開(kāi)始下降。如圖1所示，第Ⅲ組出苗量最高，此時(shí)劑量為注射法3倍，即催熟劑量為（LHRH-A2）7.5 μg/kg體重·次，催產(chǎn)劑量為（LHRH-A2）45 μg+（HCG）1 500 IU+（DOM）18 mg/kg體重。

魚(yú)類(lèi)注射催產(chǎn)激素時(shí)，一般雄魚(yú)劑量減半，但口服法則難以做到。本試驗(yàn)在雌雄親魚(yú)劑量基本一致的情況下取得較好繁殖效果，其機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

圖1各組繁殖情況

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Test on feeding hormones to induce spawning of Acrossocheilus fasciatus

LIN Yanfeng1，YAN Yunzhi2

（1.Fishery office of Xiuning county， Xiuning Anhui 245400;

2. College of Life Sciences， Anhui Normal University， Wuhu Anhui 241000）

Abstract：An oral tablets contained hormone was designed for inducing the egg release of Acrossocheilus fasciatus to overcome some shortages in the current methods used in the culturing of this species， such as complex operation， high mortality of parent fish and low reproductive rate. After LHRH-A2， HCG and DOM were dissolved in saline and absorbed by floating pellets， a layer of vitamin E made from duck oil was coated beyond them. This oral tablet was used to accelerate the ripening and induce the spawning of Acrossocheilus fasciatus by feeding it on these agents. Per female fish averagely spawned 677 eggs and the hatched ones reached 372 of larvae， with the fertilization rate averagely reaching 71.19% and the hatching rate 77.25%. The optimal oral dose of ripening dose for Acrossocheilus fasciatus is 7.5 μg/kg （LHRH-A2） per time and the optimal oral dose of oxytocic agent is 45 μg/kg （LHRH-A2）+1 500 IU/kg （HCG）+18 mg/kg （DOM）.

Key words：Acrossocheilus fasciatus; Artificial Propagation; Ripening agent; Oxytocin; Oral agents

（收稿日期：2015-09-25）