■王佳藝 耿春銀 于夢影 張 敏 片永泰

（1.延邊大學(xué)，吉林延吉 133000；2.延吉永大天然礦物質(zhì)開發(fā)有限公司，吉林延吉 133000）

在現(xiàn)代規(guī)?；⒓s化的飼養(yǎng)方式下，動物受到的各種應(yīng)激因素明顯增多，這將導(dǎo)致動物免疫力降低，生產(chǎn)性能下降。近兩年的研究發(fā)現(xiàn)，以納米加工技術(shù)處理的負(fù)離子礦物質(zhì)制劑不僅具有改善動物生產(chǎn)性能及產(chǎn)品質(zhì)量的作用[1-4]，還對動物的機(jī)體免疫能力、抗氧化性和抗應(yīng)激能力有顯著的提高效果[5-7]。因此，負(fù)離子礦物質(zhì)制劑是兼具保健作用的一種新型飼料添加劑，其具有較大的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。目前，負(fù)離子礦物質(zhì)制劑對肉雞[5-6]、豬[7]、牛[8]等血液生化指標(biāo)的已有報(bào)道，但對蛋雞血清生化及免疫指標(biāo)的影響報(bào)道尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)研究旨在前人的工作基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究負(fù)離子礦物質(zhì)制劑對蛋雞血液生化及免疫指標(biāo)的影響，為其在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用及深入的相關(guān)作用機(jī)制的認(rèn)識奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所使用的負(fù)離子礦物質(zhì)制劑的組成：硫磺粉46%、鍺礦粉4%、復(fù)合微量元素粉5%、電氣石粉38%、石粉7%。

1.2 試驗(yàn)動物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選用960只健康無病，日齡、體況比較一致的蛋雞，采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，將960只蛋雞隨機(jī)分成A、B、C三組，每組五個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)64只雞（試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1）。試驗(yàn)期共49 d，預(yù)飼期7 d，正式試驗(yàn)期42 d。試驗(yàn)用基礎(chǔ)日糧的組成及營養(yǎng)水平見表2。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

表2 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 供試雞的飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)開始前，對雞舍進(jìn)行全面的消毒。各處理組的各個(gè)重復(fù)在雞舍內(nèi)均勻分布，每日光照時(shí)間滿16 h，自由采食和飲水，每天在5：30、12：00、17：30飼喂。預(yù)飼期為7 d，各試驗(yàn)組雞只所飼喂日糧逐步過渡為試驗(yàn)日糧。

1.4 樣品的采集及測定

1.4.1 樣品的采集及處理

試驗(yàn)結(jié)束前一天早飼前，從每個(gè)處理的每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取2只蛋雞，采集蛋雞翼下血液，3 000 r/min離心10 min制備血清，用于相關(guān)指標(biāo)的測定。

1.4.2 血液生化指標(biāo)和免疫指標(biāo)的測定

相關(guān)指標(biāo)的測定方法如下：血糖（GLU），葡萄糖氧化酶法；血清尿素氮（BUN），酶兩點(diǎn)動力法；甘油三酯（TG），酶比色法；總膽固醇（TC）,CHOD-PAP雙試劑法；谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的活性，比色法；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）的活性，賴氏法；高密度脂蛋白的測定（HDL），清除法；低密度脂蛋白的測定（LDL），計(jì)算法；血清鈣，采用血清鈣測定試劑盒(鄰甲酚酞絡(luò)合酮比色法)測定；血清磷，采用血清磷測定試劑盒(采用紫外法)測定；免疫球蛋白IgA、IgM、IgG的測定，散射速率比濁法，用試劑盒測定。測試試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel 2013進(jìn)行整理，應(yīng)用SPSS17.0對整理數(shù)據(jù)做方差分析，并采用Duncan′s檢驗(yàn)法比較各組間差異顯著性，試驗(yàn)數(shù)據(jù)用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 添加不同劑量的負(fù)離子制劑對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響（見表3）

由表3可知，C組（0.5%）蛋雞血清中總蛋白的含量較A組（對照組）提高了15.98%（P＜0.05），白蛋白和球蛋白的含量較A組有升高趨勢但差異不顯著；隨著負(fù)離子礦物質(zhì)制劑水平的提高，蛋雞血清中的膽固醇含量有下降趨勢，且B組（0.3%組）和C組（0.5%組）比A組分別降低了4.21%（P＜0.05）、28.74%（P＜0.05）；蛋雞血清中的甘油三酯含量有下降趨勢，且B組和C組較A組相比分別降低了8.95%（P＜0.05）、37.63%（P＜0.05）；高密度脂蛋白B、C組有升高趨勢但差異不顯著；B組和C組蛋雞血清中堿性磷酸酶的活性較A組顯著升高，分別升高了20.64%（P＜0.05）和32.24%（P＜0.05），但B組與C組間差異不顯著；蛋雞血清中的血清鈣、血清磷、葡萄糖的含量各組間均無顯著性差異；C組比A組尿素氮的含量降低了15.09%（P＜0.05）。

2.2 添加不同劑量的負(fù)離子制劑對蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響（見表4）

表4 添加試驗(yàn)日糧對蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響（g/l）

由表4可知，C組IgA、IgM的含量較A組分別提高了47.61%（P＜0.05）、31.82%（P＜0.05）；B組及C組蛋雞血清IgG的含量較對照組有升高趨勢但差異不顯著（P＞0.05）。

3 討論

3.1 添加不同劑量的負(fù)離子制劑對蛋雞血清生化指標(biāo)的影響

3.1.1 添加負(fù)離子礦物質(zhì)制劑對蛋雞血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量的影響

血清總蛋白和白蛋白是肝臟功能和營養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)，其總體反映了蛋白質(zhì)的吸收、合成和代謝情況。血清球蛋白主要來自于漿細(xì)胞，與免疫有關(guān)。本研究中，添加0.5%負(fù)離子礦物質(zhì)顯著提高了血清總蛋白含量，同時(shí)白蛋白和球蛋白的含量也較對照組有升高趨勢。本試驗(yàn)中納米負(fù)離子礦物質(zhì)中含有的鍺和氧化鋅均具有促進(jìn)血清總蛋白含量提高的作用[10]，其提高的機(jī)制可能與改善了蛋雞腸道環(huán)境，提高了肝功能，增強(qiáng)了機(jī)體飼料蛋白質(zhì)的吸收和代謝有關(guān)。此外，負(fù)離子礦物質(zhì)制劑中含有鐵礦粉其對蛋雞血清中總蛋白的增加也有一定的助力作用。

3.1.2 添加負(fù)離子礦物質(zhì)制劑對蛋雞血清脂質(zhì)代謝的影響

本試驗(yàn)中，隨著負(fù)離子礦物質(zhì)制劑水平的提高，血清中TG、TC、低密度脂蛋白（LDL）含量呈下降趨勢，且C組（0.5%組）TG和TC含量顯著低于A組（對照組），高密度脂蛋白（HDL）呈升高趨勢，這可能與負(fù)離子礦物質(zhì)制劑中的電氣石、鍺、銅和氧化鋅等有關(guān)。鍺可以增加血清HDL的含量，增加TC的肝臟代謝，從而降低了血清TC的含量。另外，鍺有利于動物機(jī)體對銅的吸收，而銅在降低TC方面有很好的作用，從而使血清TC含量減少。楊利[11]試驗(yàn)結(jié)果指出，Ge-132可有效地修飾鴨的脂質(zhì)方面的代謝，減少血清中TC、TG、蛋黃TC的含量，提高血清HDL水平。于瑞敏等[12]研究了Ge-132對大鼠脂質(zhì)代謝的影響，結(jié)果得出其能提高HDL/TC的比值。另外，鍺可明顯增強(qiáng)谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性，而GSH-Px活性對合成膽固醇前體的輔酶有影響，可降低肝臟合成膽固醇，影響血清膽固醇的水平。

3.1.3 添加負(fù)離子礦物質(zhì)制劑對蛋雞血清谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶含量的影響

谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）參與畜禽體內(nèi)的轉(zhuǎn)氨基活動，在正常范圍內(nèi)提高其活性，可提高蛋白質(zhì)代謝效率。本試驗(yàn)中添加負(fù)離子礦物質(zhì)制劑的兩組的GPT和GOT活性與對照組相比呈逐漸升高趨勢，但沒有達(dá)到顯著水平，說明負(fù)離子礦物質(zhì)制劑可提高這兩種酶的活性，從而提高蛋白質(zhì)代謝效率，但對肝臟功能無不良影響。王慧明[8]將負(fù)離子制劑加入到日糧中飼喂牛，結(jié)果血液GPT和GOT的變化與本研究結(jié)果一致。

堿性磷酸酶（ALP）是畜禽消化代謝過程中的關(guān)鍵酶，它的活性大小是畜禽機(jī)體的生長和代謝狀況的標(biāo)志。本試驗(yàn)中添加負(fù)離子礦物質(zhì)制劑的兩組的ALP活性與對照組相比顯著升高,這可能與負(fù)離子礦物質(zhì)制劑中鋅有關(guān)。鋅是合成ALP所必不可少的金屬離子，ALP的活性與日糧中鋅的多少和機(jī)體內(nèi)鋅的含量密切相關(guān)。負(fù)離子礦物質(zhì)制劑含有一定量的納米氧化鋅，從而提高了蛋雞血清中ALP的活性，這與徐奇友等[13]研究的納米氧化鋅極顯著提高了血清鋅水平和ALP水平結(jié)論一致。

3.1.4 添加負(fù)離子礦物質(zhì)制劑對蛋雞血清尿素氮、葡萄糖、血鈣和血磷水平的影響

尿素氮是體內(nèi)蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的最終生成物，血清中尿素氮的水平完全可以體現(xiàn)畜禽蛋白質(zhì)和氨基酸代謝的基本狀態(tài)。當(dāng)畜禽機(jī)體與氨基酸的代謝相關(guān)的活動出現(xiàn)異常情況時(shí)，會導(dǎo)致血清尿素氮濃度升高。當(dāng)畜禽機(jī)體蛋白質(zhì)的形成數(shù)量較多時(shí)候，血清中的含量就會減少。本試驗(yàn)表明，負(fù)離子礦物質(zhì)組血清尿素氮含量較對照組降低，說明負(fù)離子礦物質(zhì)具有促進(jìn)蛋雞體內(nèi)蛋白質(zhì)合成作用，對腎臟的組織也無損傷。這與李雅茹等[6]研究的硫磺負(fù)離子礦物質(zhì)對肉雞血清尿素氮有提高的作用結(jié)果一致。

蛋雞血液中的糖大部分是葡萄糖，其是碳水化合物的中間產(chǎn)物，是蛋雞各個(gè)組織器官細(xì)胞的活動所需的能量的重要來源。當(dāng)血糖超出正常生理常數(shù)時(shí)，說明蛋雞機(jī)體出現(xiàn)異常。本試驗(yàn)結(jié)果表明，負(fù)離子礦物質(zhì)具有降低血糖作用，且不低于正常值。本試驗(yàn)中隨著負(fù)離子礦物質(zhì)水平的升高，血鈣和血磷含量增加，說明負(fù)離子礦物質(zhì)制劑具有促進(jìn)飼料中鈣離子吸收作用。

3.2 添加不同劑量的負(fù)離子制劑對蛋雞血清免疫指標(biāo)的影響

本試驗(yàn)表明負(fù)離子礦物質(zhì)添加具有提高血清中IgG、IgA和IgM含量的作用，說明負(fù)離子礦物質(zhì)制劑對蛋雞自身免疫力提高有積極的促進(jìn)作用。這可能與負(fù)離子礦物質(zhì)制劑中含有鍺元素有關(guān)。有研究指出，鍺對于畜禽來說，可以起到免疫調(diào)節(jié)的功效，它能夠提高許多免疫細(xì)胞的活性，從而提高機(jī)體自身對于各種疾病的免疫力。李偉毅[14]用有機(jī)鍺飼喂小鼠，結(jié)果得出鍺能提高B淋巴細(xì)胞抗體產(chǎn)生的能力。唐兆新等[15]的研究表明，鍺可以顯著增加雛雞的血清中IgA和IgM含量。本研究結(jié)論與負(fù)離子礦物質(zhì)添加到肉雞飼料中，對肉雞免疫指標(biāo)影響的結(jié)論一致[6]。

4 結(jié)論

產(chǎn)蛋期的蛋雞添加0.5%負(fù)離子礦物質(zhì)制劑可以顯著提高血清中總蛋白含量及堿性磷酸酶活性，顯著降低血清中總膽固醇、甘油三酯和尿素氮的含量；同時(shí)，添加0.5%負(fù)離子礦物質(zhì)制劑顯著或極顯著提高了產(chǎn)蛋期蛋雞血清中IgA和IgM的含量，提高了產(chǎn)蛋期蛋雞的免疫力。