■ 陳 娟 侯義江 宋 丹 王薇薇 王永偉 李愛科

（1.國家糧食局科學(xué)研究院，北京 100037；2.武漢輕工大學(xué)動物科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，湖北武漢 430023）

益生菌活菌制劑作為一種抗生素替代物已廣泛應(yīng)用于畜牧行業(yè)。其中，糞腸球菌和酵母菌在腸道內(nèi)起著多方面的作用，可以調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，提高機(jī)體免疫力，促進(jìn)動物生長等[1-2]。但是，益生菌在實際生產(chǎn)應(yīng)用中會遇到很多問題，例如貨架期短、耐受胃液和膽鹽能力差等。因此，增強(qiáng)益生菌的抗逆性和貨架期的保護(hù)技術(shù)顯得格外重要。

微囊化技術(shù)是將性能不穩(wěn)定的固體、液體、氣體包裹在由天然或者合成的高分子材料形成的半透性或全密封的微型膠囊的技術(shù)，將益生菌采用微膠囊技術(shù)包被后，可增強(qiáng)益生菌的抗逆性[3-4]。目前，應(yīng)用于微囊化益生菌的主要是擠壓法和乳化法[5]。

目前，國內(nèi)外微囊化益生菌針對家禽的試驗主要集中于肉雞，而對地方種雞的報道相對較少，尤其是對育成期河北柴雞的研究更加缺乏。本試驗旨在研究微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對9周齡河北柴雞的生長性能和血清生化指標(biāo)、免疫指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)的影響，以期為抗生素替代物的研發(fā)提供更多的數(shù)據(jù)支持與技術(shù)保障。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

微囊化糞腸球菌（Enterococcus faecalis）和微囊化釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）產(chǎn)品，采用乳化凝膠化方法生產(chǎn)，均來自于國家糧食局科學(xué)研究院。

1.2 試驗動物與分組

本試驗選取120只體重相近[（130.5±0.17）g]、健康的9周齡河北柴雞，采用單因素完全隨機(jī)試驗設(shè)計，試驗雞隨機(jī)分為3個處理，每個處理8個重復(fù)，每個重復(fù)5只雞，分別飼喂3種不同的日糧，具體如下：Ⅰ為對照組：基礎(chǔ)日糧；Ⅱ為微囊化糞腸球菌組（108CFU/g日糧）；Ⅲ為微囊化釀酒酵母組（108CFU/g日糧）。參照NRC（1994）和雞的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（NY/T33—2004），結(jié)合河北柴雞的飼養(yǎng)手冊配制日糧（見表1）。

1.3 飼養(yǎng)管理

采用密閉式雞舍、機(jī)械通風(fēng)，人工光照，三層立式籠養(yǎng)，每小籠5只雞，雞舍溫度18～26℃，自由采食，乳頭飲水。每天7:00、13:00和17:00各投料一次，粉料飼喂。每天監(jiān)測雞群健康狀況，記錄死淘雞數(shù)并剖檢究其原因。光照制度：8 h光照。70日齡新城疫免疫，75日齡禽流感（H5N1）免疫，90日齡禽流感（H9）免疫。試驗開始前雞逐只稱重，使各重復(fù)試驗雞體重基本一致，試驗期9周。

1.4 指標(biāo)測定

1.4.1 生產(chǎn)性能

以重復(fù)為單位，于試驗第1、7、14、21、28、35、42、49、56、63 d 20:00統(tǒng)計當(dāng)周耗料量。試驗結(jié)束稱重，計算平均日增重、平均日采食量以及料重比。料重比=平均日采食量/平均日增重。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平

1.4.2 血清生化指標(biāo)的測定

試驗結(jié)束后，隨機(jī)從每個重復(fù)選1只雞進(jìn)行翅靜脈采血，3 500 r/min離心10 min，制備血清，-20℃保存待測。

在北京洛奇臨床檢驗所股份有限公司，使用Cobas C501全自動生化分析儀測定血清中的總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素氮（BUN）水平?？偟鞍撞捎秒p縮脲法測定，白蛋白采用溴甲酚綠法測定，尿素氮采用紫外-谷氨酸脫氫酶法測定。

1.4.3 血清抗氧化性能的測定

采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）水平、總抗氧化能力（T-AOC）。MDA采用TBA法測定，SOD采用WST-1法測定，T-AOC采用比色法測定。

1.4.4 血清免疫性能的測定

使用ELISA kits試劑盒（購自深圳達(dá)科為生物技術(shù)有限公司）測定血清IgA、IgG、IgM，均采用酶聯(lián)免疫吸附法。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)采用SAS 9.2軟件單因素方差分析進(jìn)行，處理組間平均值采用Duncan's多重比較法進(jìn)行差異性顯著性檢驗，P＜0.05為差異顯著，P＜0.01為差異極顯著。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞生長性能的影響（見表2）

表2 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞生長性能的影響

從表2可以看出，和對照組（Ⅰ組）相比，Ⅱ組的平均日增重有增加的趨勢（P=0.0873），但各組之間差異不顯著（P＞0.05）；Ⅲ組的平均日采食量極顯著降低（P＜0.01），Ⅱ組差異不顯著（P＞0.05）；Ⅱ組的料重比顯著降低（P＜0.05）。從以上結(jié)果可以看出，Ⅱ組可有效降低料重比，提高飼料轉(zhuǎn)化率。

2.2 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞血清生化指標(biāo)的影響（見表3）

表3 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞血清總蛋白、白蛋白、尿素氮含量的影響

從表3可以看出，和對照組相比，Ⅱ、Ⅲ組的總蛋白、白蛋白、尿素氮含量均沒有明顯變化，差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞血清抗氧化性能的影響（見表4）

表4 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞血清MDA、SOD、T-AOC的影響

從表4可以看出，和對照組相比，Ⅱ、Ⅲ組的MDA水平和SOD值均沒有顯著性差異（P＞0.05）；Ⅱ組的TAOC值比對照組升高了45.73%（P＜0.01），Ⅲ組與對照組差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞血清免疫球蛋白水平的影響（見表5）

表5 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞血清IgA、IgG、IgM水平的影響（μg/ml）

從表5可以看出，和對照組相比，Ⅱ、Ⅲ組的血清IgA含量均沒有顯著性變化（P＞0.05）；Ⅱ組的血清IgG含量比對照組增加了16.04%（P＜0.01），Ⅲ組與對照組相比較沒有顯著變化（P＞0.05）；Ⅱ組的血清IgM比對照組含量增加了23.86%（P＜0.01），Ⅲ組增加了60.48%（P＜0.01）。

3 討論

3.1 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞生長性能的影響

國內(nèi)外很多研究表明，飼糧中添加益生菌可有效提高家禽的生產(chǎn)性能[6-8]。石峰等[9]試驗結(jié)果表明，在肉雞日糧中添加乳酸菌微生態(tài)制劑可顯著提高日增重，有效降低料重比，提高飼料轉(zhuǎn)化率。張可毅等[10]試驗結(jié)果表明，添加酵母菌組肉雞的日增重增加7.7%，料肉比降低7.0%，提高飼料在動物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化率。本試驗研究結(jié)果表明，在柴雞的日糧中添加微囊化糞腸球菌雞只的料重比降低4.79%，添加微囊化酵母菌差異不顯著。其原因可能是因為：微囊化糞腸球菌能夠耐受低pH值的胃液，到達(dá)腸道時保持較高的活性，并在腸道釋放[11]，黏附在柴雞腸道內(nèi)，進(jìn)行大量繁殖，消耗了腸道內(nèi)的氧氣，有利于雙歧桿菌等有益菌的生長；同時產(chǎn)生一些有機(jī)酸，殺死腸道內(nèi)的致病菌，維持腸道菌群平衡，促進(jìn)動物的生長。因此，在提高柴雞的生長性能方面，微囊化糞腸球菌能夠起到良好的效果。

3.2 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞血清生化指標(biāo)的影響

血清中的總蛋白水平反映了機(jī)體的營養(yǎng)狀況，總蛋白濃度越高，表明蛋白質(zhì)在體內(nèi)的代謝旺盛，氨基酸利用率高，促進(jìn)動物的生長[12]。關(guān)于益生菌對血清中總蛋白、白蛋白、尿素氮含量的影響，目前的報道不盡一致。陳家祥等[13]試驗結(jié)果表明，和基礎(chǔ)日糧組相比，在基礎(chǔ)飼糧中添加2×109CFU/kg地衣芽孢桿菌組的肉雞血清中總蛋白和白蛋白含量顯著增加，尿素氮含量顯著降低。陳焱等[14]試驗結(jié)果表明，日糧中添加1.0×108CFU/g的約氏乳桿菌對0～17周齡的蛋雞血清中的總蛋白、白蛋白、尿素氮含量影響不顯著。本試驗結(jié)果表明，與對照組相比，日糧中添加微囊化益生菌，柴雞血清中的總蛋白、白蛋白和尿素氮的含量均無明顯變化，差異不顯著。這可能是因為血清中總蛋白含量的高低與日糧中添加的益生菌劑量、種類以及飼喂的動物種類相關(guān)。

3.3 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞抗氧化性能的影響

機(jī)體的抗氧化能力與健康密切相關(guān)，血清中的MDA、SOD和T-AOC是反映機(jī)體抗氧化水平的三個重要指標(biāo)[15-17]。閆東方等[18]試驗結(jié)果表明，日糧中添加微囊化唾液乳桿菌對肉雞的MDA和T-SOD水平影響不顯著。梁新曉[19]試驗結(jié)果表明，基礎(chǔ)日糧中添加108CFU/kg的釀酒酵母未能顯著提高肉雞的抗氧化能力。本試驗結(jié)果表明，和基礎(chǔ)日糧組相比，Ⅱ、Ⅲ組血清中MDA和SOD水平?jīng)]有明顯變化，但Ⅱ組血清的T-AOC值升高了45.73%，這可能是因為，微囊化糞腸球菌在腸道釋放并定植后，產(chǎn)生有機(jī)酸，有機(jī)酸與起催化氧化作用的金屬離子結(jié)合后，提高機(jī)體的總抗氧化能力，為微生態(tài)制劑的發(fā)展提供了借鑒作用。

3.4 微囊化糞腸球菌和釀酒酵母對育成期河北柴雞免疫球蛋白的影響

機(jī)體的免疫系統(tǒng)包括細(xì)胞免疫和體液免疫[20]，體液免疫是通過B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的免疫機(jī)制，抗體即為免疫球蛋白，機(jī)體的免疫球蛋白含量的高低反映了機(jī)體的免疫力的強(qiáng)弱[21]，IgA、IgG、IgM即為免疫球蛋白，所以作為檢測機(jī)體免疫力的重要指標(biāo)。徐基利等[22]試驗結(jié)果表明，和對照組相比，肉雞日糧中添加1%的乳酸菌可顯著提高血清中的IgG水平，但I(xiàn)gA的變化不明顯。張琳等[23]試驗結(jié)果表明，和基礎(chǔ)日糧組相比，肉雞日糧中添加微囊化釀酒酵母可顯著提高血清中的IgM含量。本試驗結(jié)果表明，和對照組相比，微囊化糞腸球菌組的柴雞血清中IgG、IgM含量均極顯著增加，微囊化釀酒酵母組的IgM含量極顯著增加（P＜0.01），這表明微囊化技術(shù)可以提高益生菌的抗逆性，定植于腸道，作為一種抗原，可以刺激機(jī)體的免疫機(jī)制，產(chǎn)生抗體，提高機(jī)體的免疫力，保障機(jī)體健康。

4 結(jié)論

本試驗研究結(jié)果表明，日糧中添加微囊化糞腸球菌可以提高育成期河北柴雞的生長性能、抗氧化能力和免疫能力；添加微囊化釀酒酵母可以提高育成期河北柴雞的免疫能力。由此可見，微囊化益生菌可以提高柴雞的生長性能和改善柴雞的健康狀況。但是，柴雞使用益生菌的最佳添加劑量和添加的生產(chǎn)階段仍有待進(jìn)一步研究。