大孫艷　伊麗孜拉·伊克拉木　高劍　陳永杰　賴星星　劉云飛

(新疆醫(yī)科大學(xué)　1.臨床醫(yī)學(xué)院2011-2班，2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體寄生蟲(chóng)學(xué)教研室，新疆 烏魯木齊 830011)

鼠卡氏肺孢子菌肺炎模型建立及其病理生理學(xué)相關(guān)細(xì)胞因子的變化*

大孫艷1伊麗孜拉·伊克拉木1高劍2陳永杰1賴星星1劉云飛1

(新疆醫(yī)科大學(xué)1.臨床醫(yī)學(xué)院2011-2班，2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體寄生蟲(chóng)學(xué)教研室，新疆 烏魯木齊 830011)

【摘要】目的觀察大鼠卡氏肺孢子菌肺炎(PCP)模型建立過(guò)程中鼠肺組織學(xué)、病原學(xué)、外周血腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、可溶性粘附分子-1(sICAM-1)和白介素-8(IL-8)含量的動(dòng)態(tài)變化。方法建立大鼠PCP模型，觀察建模2、4、6、8和10周時(shí)大鼠的發(fā)病狀況、體重、肺重改變、鼠肺組織學(xué)變化、鼠肺印片中卡氏肺孢子菌(PC)包囊形態(tài)和增殖數(shù)量，并檢測(cè)大鼠外周血血清中TNF-α、sICAM-1和IL-8的含量。結(jié)果建模2周時(shí)就可在大鼠肺臟印片中發(fā)現(xiàn)PC包囊，但建模6周和8周時(shí)PC包囊增殖無(wú)顯著差異(P>0.05)。建模4周時(shí)大鼠出現(xiàn)明顯的PCP病征和鼠肺組織學(xué)變化，大鼠外周血血清中TNF-α、sICAM-1和IL-8的含量也在建模4周時(shí)出現(xiàn)升高，其中TNF-α和sICAM-1升高迅猛，IL-8升高緩慢。結(jié)論大鼠建模4周后可出現(xiàn)較為明顯的PCP相關(guān)病征，而建模6周和8周之間可能存在肺孢子菌與宿主相互作用的相持時(shí)期。

【關(guān)鍵詞】卡氏肺孢子菌肺炎； 肺孢子菌包囊； 組織學(xué)變化； 腫瘤壞死因子-α； 可溶性粘附分子-1； 白介素-8

肺孢子菌原名肺孢子蟲(chóng)/肺囊蟲(chóng)，是免疫低下人群常見(jiàn)并發(fā)感染的機(jī)會(huì)致病性真菌，及其所致的肺孢子菌肺炎( Pneumocystis carinii pneumonia, PCP)已成為艾滋病 AIDS的標(biāo)志病(marker disease or definiting disease)[1]。通過(guò)腹股溝皮下注射地塞米松等免疫抑制劑并結(jié)合四環(huán)素飲水建立大鼠卡氏肺孢子菌肺炎( Pneumocystis carinii pneumonia, PCP)模型是國(guó)內(nèi)外較為普遍的PCP建模方法[2]。大部分研究都在免疫抑制6～8周后通過(guò)隨機(jī)剖殺實(shí)驗(yàn)大鼠，觀察鼠肺印片卡氏肺孢子菌包囊的方法來(lái)確立模型是否建立成功，但尚無(wú)關(guān)于大鼠建模過(guò)程中PC包囊的出現(xiàn)時(shí)間、增殖速率、PCP肺炎的病理變化進(jìn)程等肺炎指標(biāo)動(dòng)態(tài)變化的相關(guān)報(bào)道，大鼠外周血中與PCP肺炎發(fā)生相關(guān)如TNF-α、sICAM和IL-8等細(xì)胞因子的含量在PCP建模過(guò)程中的動(dòng)態(tài)變化也無(wú)詳細(xì)的監(jiān)測(cè)報(bào)道，故本研究以2周為實(shí)驗(yàn)時(shí)間跨度，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)上述指標(biāo)在大鼠PCP肺炎建模過(guò)程中的變化。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雌性Sprague-Dawley( SD) 大鼠40只[新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心, 合格證號(hào): XCXK(新)2011-04],體重180～220g。購(gòu)入后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.2主要試劑地塞米松磷酸鈉注射液(鄭州卓峰制藥有限責(zé)任公司)；四環(huán)素片(四川錦華藥業(yè)有限公司)；姬-瑞氏染色試劑盒購(gòu)自珠海貝索生物技術(shù)有限公司；大鼠白介素-8(IL-8)ELISA試劑盒、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)ELISA試劑盒、可溶性粘附分子-1(sICAM-1) ELISA試劑盒均購(gòu)自上海西唐生物科技有限公司。

1.3PCP大鼠模型的建立SD大鼠每周2次腹股溝皮下注射地塞米松磷酸鈉注射液3.5 mg/只·次，同時(shí)在飲用水中加入1mg/ml四環(huán)素以預(yù)防繼發(fā)性細(xì)菌感染。連續(xù)注射8周,注射停止后持續(xù)飼養(yǎng)并觀察2周。大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中以普通級(jí)飼料顆粒喂養(yǎng)，勤換墊料，并定期以紫外光燈照射和消毒液擦地等方法保證動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境的清潔。

1.4對(duì)照大鼠的實(shí)驗(yàn)處理SD大鼠以腹股溝皮下注射生理鹽水的方法設(shè)立正常對(duì)照組，飲用水中不加四環(huán)素，飼養(yǎng)條件和環(huán)境同模型組大鼠，但與模型組大鼠分室飼養(yǎng)以杜絕交叉感染。

1.5觀察指標(biāo)及方法

1.5.1大鼠一般情況觀察實(shí)驗(yàn)過(guò)程中隨時(shí)觀察大鼠的呼吸、活動(dòng)和攝食情況，記錄存活數(shù)、每2周稱量體質(zhì)量并隨機(jī)剖殺6只感染組大鼠，取全肺, 稱全肺濕重, 記錄各鼠肺重, 計(jì)算肺重/體重比。

1.5.2鼠肺組織學(xué)觀察大鼠剖殺后取完整肺組織，肉眼觀察肺臟大小、顏色、質(zhì)地及肺表面有無(wú)明顯病灶等變化；取病灶肺組織制作常規(guī)石蠟切片，蘇木素-伊紅(HE)染色并在光鏡下觀察鼠肺組織學(xué)改變。

1.5.3鼠肺病原學(xué)觀察無(wú)菌取肺組織切開(kāi)肺葉，制作肺印片，自然干燥后甲醇固定，姬-瑞氏染色,油鏡觀察PC包囊形態(tài)并計(jì)數(shù)。包囊計(jì)數(shù)方法參看文獻(xiàn)[3]: 印片置尼康系列電子顯微鏡下觀察并用NIS-Element攝像軟件拍照，每張印片油鏡下隨機(jī)觀察20個(gè)視野, 計(jì)數(shù)PC包囊總數(shù), 然后計(jì)算每只大鼠20個(gè)視野的包囊總數(shù)均數(shù), 再計(jì)算每組大鼠20個(gè)視野包囊總數(shù)均數(shù)。

1.5.4大鼠血清細(xì)胞因子含量測(cè)定建模大鼠每2周腹主動(dòng)脈無(wú)菌采血，室溫下靜置1小時(shí)， 2000r/min離心10min, 分離血清，-20℃凍存待測(cè)。對(duì)照組大鼠于實(shí)驗(yàn)10周時(shí)，同上方法采集血清待測(cè)。以ELISA雙抗夾心法分別測(cè)定各血清樣品中TNF-α、sICAM-1和IL-8的含量，包被板中分別設(shè)立各濃度梯度細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)品樣孔和TMB對(duì)照孔，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作，用BIO-RAD公司Xmark酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在450nm處測(cè)吸光值。以各濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，使用Microplate Manager6.0軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品OD值計(jì)算出血清樣品中相應(yīng)細(xì)胞因子含量，結(jié)果以pg/ml表示。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。不同建模時(shí)間大鼠組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1大鼠一般狀況大鼠建模第4周開(kāi)始出現(xiàn)反應(yīng)遲鈍、攝食減少、毛色灰暗等癥狀，隨建模時(shí)間延長(zhǎng)，體毛蓬松并發(fā)生斑塊狀脫毛；眼球逐漸由透亮的粉紅色變濁、變暗，伴炎性分泌物；呼吸急促，鼻腔中分泌物增多。至建模10周，40只大鼠累計(jì)死亡5只，死亡率為12.5%，大鼠死亡主要發(fā)生于6～8周之間；建模過(guò)程中大鼠體重持續(xù)減輕(圖1)，體質(zhì)量變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1PCP大鼠體重變化

Figure 1The average weight of PCP rats

2.2大鼠肺重和肺重/體質(zhì)量比隨建模時(shí)間延長(zhǎng)，大鼠發(fā)生肺重增加，肺重/體質(zhì)量比值逐漸增大的現(xiàn)象，但建模6～8周間肺重/體質(zhì)量比值變化無(wú)顯著性差異(P>0.05，表1)。

2.3大鼠肺組織病理學(xué)變化

2.3.1肉眼觀察建模4周時(shí)有大鼠開(kāi)始出現(xiàn)肺組

Table 1The average Lung weights and Lung weight/body weight ratio of rats

建模時(shí)間(周)平均肺重(g)肺重/體重比值(×10-2)01.76±0.140.85±0.0422.34±0.141.10±0.06①42.57±0.451.35±0.01①62.93±0.351.61±0.05②82.97±0.311.64±0.14②103.47±0.192.06±0.10①

注: 與建模0周相比, ①P<0.05;建模6～8周組間比較, ②P>0.05

織小區(qū)域腫脹、質(zhì)硬、淡紅色等變化，且主要發(fā)現(xiàn)于體質(zhì)量減輕較快的大鼠；隨建模時(shí)間延長(zhǎng)，肺臟表面逐漸發(fā)現(xiàn)點(diǎn)狀或斑片狀灰白色或黃色病灶, 擠壓時(shí)病灶處有粘稠性滲出物；至建模10周時(shí)有些大鼠肺臟表面出現(xiàn)彌漫白色針尖樣或點(diǎn)狀結(jié)節(jié)，質(zhì)硬(圖2)。

2.3.2肺組織切片觀察正常大鼠肺組織肺泡壁完整，肺泡腔干凈透亮, 肺間質(zhì)細(xì)胞排列緊致無(wú)充血水腫；建模組大鼠肺臟組織隨建模時(shí)間延長(zhǎng)呈漸進(jìn)性變化，建模6周前主要表現(xiàn)為有些區(qū)域出現(xiàn)肺泡壁斷裂及肺泡腔的融合，肺泡腔內(nèi)充滿粉色泡沫樣滲出物；建模6周后則以肺纖維化改變?yōu)橹?，肺間隔逐漸增厚，肺泡腔融合閉陷，有些區(qū)域所有肺泡腔均閉陷形成嚴(yán)重肺實(shí)變(圖3)。

圖2大鼠肺臟肉眼改變

Figure 2 Changes in the lungs of PCP rats by naked eye

注:A.建模6W時(shí)大鼠肺臟表面黃色病灶(↑)；B.建模10W時(shí)大鼠肺臟彌漫性白色點(diǎn)狀結(jié)節(jié)

圖3PCP大鼠肺臟組織學(xué)變化(HE, ×200)

Figure 3Histological changes in the lungs of PCP rats (HE, ×200)

注:A. 正常SD大鼠肺臟組織；B.建模2周大鼠肺臟組織(↑：泡沫樣滲出物)；C. 建模4周大鼠肺臟組織；D. 建模6周大鼠肺臟組織(肺纖維化)；E. 建模8周大鼠肺臟組織；F. 建模10周大鼠肺臟組織(肺實(shí)變)

2.4大鼠肺臟印片PC包囊形態(tài)及增殖變化每2周隨機(jī)剖殺6只建模大鼠取新鮮肺組織印片，姬-瑞氏染色后油鏡下觀察(圖4)：建模2周時(shí)即在大鼠肺臟印片中發(fā)現(xiàn)PC包囊，包囊直徑6～8μm，經(jīng)姬-瑞氏染色后囊壁不著色，囊內(nèi)子孢子呈紫藍(lán)色，新月形或圓形，排列不規(guī)則；PC包囊在鼠肺中有聚集增殖的特點(diǎn)，肺門處菌體較集中，有些區(qū)域則完全無(wú)感染；隨建模時(shí)間延長(zhǎng)，肺印片中PC包囊逐漸增多且分布彌散，建模6周和8周時(shí)增殖變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，但形態(tài)變化有差異：建模6周時(shí)PC菌體較小，囊內(nèi)子孢子湊縮在一起；建模8周時(shí)菌體增大，囊內(nèi)子孢子形態(tài)大而清晰，排列不規(guī)則；不同建模時(shí)間大鼠肺臟印片中PC包囊計(jì)數(shù)結(jié)果(圖5)。

2.5大鼠建模過(guò)程中外周血清TNF-α、sICAM-1和IL-8含量變化 建模4周前大鼠外周血中TNF-α和sICAM-1出現(xiàn)輕微升高，4周后則迅猛升高，至建模

圖4PCP大鼠肺臟印片中PC包囊形態(tài)(姬-瑞氏染色, ×1000)

Figure 4Morphology of PC cysts in lung printing of PCP rats (Giemsa - Wright’s stain, ×1000)

注：A. 建模2周大鼠肺臟印片(↑：PC包囊)；B. 建模4周大鼠肺臟印片；C. 建模6周大鼠肺臟印片；D. 建模8周大鼠肺臟印片

圖5PCP大鼠肺臟印片中PC包囊增殖變化(個(gè))

Figure 5Proliferation changes of PC cysts in lung printing of PCP rats

圖6PCP大鼠外周血清TNF-α、sICAM-1和IL-8水平變化(pg/ml)

Figure 6The level changes of TNF-α, sICAM-1 and IL-8 in sera of PCP rats

10周時(shí)大鼠血清中TNF-α已達(dá)到建模前的6倍，sICAM-1已達(dá)建模前的20倍；建模4周時(shí)大鼠外周血清中IL-8較建模前略有降低，建模4周后緩慢升高(圖6)。

3討論

鑒于伊氏(耶氏)肺孢子菌(Pneumocystis jiroveci Frenkel，1999)和鼠源性卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii, PC)在病原學(xué)形態(tài)、核酸和抗原等方面存在的共性[3]，SD大鼠卡氏肺孢子菌肺炎模型已成為人肺孢子菌肺炎的經(jīng)典動(dòng)物模型，常用于病理機(jī)制的探索和藥物的研發(fā)。本研究以2周為時(shí)間跨度，分5個(gè)時(shí)間點(diǎn)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)了PCP大鼠建模過(guò)程中PCP肺炎的病情發(fā)展和鼠肺內(nèi)PC包囊的增殖狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)大鼠PCP肺炎發(fā)生的各項(xiàng)觀察指標(biāo)，既有漸進(jìn)性變化，又有特殊的發(fā)生特點(diǎn)。

PC包囊存在于日?？諝猸h(huán)境中，對(duì)免疫正常的人體或動(dòng)物通常呈隱性感染，即以常規(guī)病原學(xué)檢查方法查不到肺臟組織中的病原體。以免疫抑制方法建模2周后鼠肺印片中個(gè)別區(qū)域就可發(fā)現(xiàn)PC包囊，而大鼠攝食、呼吸、活動(dòng)的異常，肺臟肉眼和組織學(xué)變化均發(fā)生于建模4周后，提示大鼠免疫功能的下降是PCP發(fā)生的先決條件，鼠肺中PC包囊的增殖必須伴隨大鼠免疫功能的進(jìn)一步下降，才能發(fā)生PCP相關(guān)的各種病理變化。

肺泡內(nèi)滲出和肺實(shí)變是PCP肺炎最典型的組織學(xué)改變，肺泡腔內(nèi)的泡沫樣滲出物主要為壞死蟲(chóng)體和免疫球蛋白的混合物，伴隨肺泡腔內(nèi)滲出現(xiàn)象的增多，同步發(fā)生肺泡上皮增生增厚和肺間隔的增寬，從而出現(xiàn)肺纖維化，最終肺泡間隔可增厚至正常肺間隔的5～20倍，占據(jù)整個(gè)肺容積的3/4，肺臟發(fā)生大面積實(shí)變，使大鼠發(fā)生嚴(yán)重的呼吸窘迫和機(jī)械通氣障礙。研究表明，PCP大鼠肺臟病理變化并不是肺孢子菌的單獨(dú)作用，而是由眾多種類的呼吸道病毒(rat respiratory virus，RRV)累加感染所致[4]，提示PCP是一種基于肺孢子菌增殖改變肺臟環(huán)境而由多種病原引起的免疫病理?yè)p傷。本研究所觀察到的PCP大鼠肺組織學(xué)變化與2006年周永華等[5]報(bào)道中所觀察到的基本一致，但也發(fā)現(xiàn)不同部位肺組織的變化速率并不相同，即使建模10周時(shí)，在鼠肺中依然可見(jiàn)正常肺組織形態(tài)，有些區(qū)域的組織學(xué)變化也以肺泡腔內(nèi)泡沫樣滲出現(xiàn)象為主，肺組織變化并不均一，推測(cè)與PC包囊在肺臟不同區(qū)域中的分布有關(guān)。

大鼠肺重、肺重/體重比值、鼠肺印片PC包囊增殖變化等指標(biāo)在建模6和8周之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，推測(cè)建模6和8周之間可能存在肺孢子菌與宿主相互作用的相持時(shí)期。PC包囊在鼠肺中僅限寄生于肺泡腔中，而建模6和8周之間鼠肺印片中包囊數(shù)量無(wú)顯著增加，結(jié)合大鼠肺組織學(xué)的動(dòng)態(tài)變化，推測(cè)鼠肺間隔不斷增厚使肺泡腔閉陷可能局限了PC包囊的增殖空間，使PC包囊的發(fā)育主要表現(xiàn)為囊內(nèi)子孢子的成熟。 但也不排除部分PC成熟包囊破裂子孢子逸出后發(fā)育為滋養(yǎng)體，使包囊數(shù)量表現(xiàn)為無(wú)增加的可能。國(guó)外研究表明，肺孢子菌的生命周期狀態(tài)依據(jù)機(jī)體寄生環(huán)境中的營(yíng)養(yǎng)支持而不同，存在經(jīng)染色體融合而形成的二倍體狀態(tài)，或者無(wú)性有絲分裂形式，或者二者共存[6]。提示由于目前尚無(wú)成熟的PC包囊體外培養(yǎng)方法，即使采用完全相同的動(dòng)物模型建立方法，也無(wú)法判斷鼠肺中PC包囊和滋養(yǎng)體的增殖狀態(tài)。

TNF-α、IL-8和黏附分子sICAM-1均是 PCP 特異性細(xì)胞免疫中重要的炎癥介質(zhì)，在參與介導(dǎo)炎癥反應(yīng)、免疫調(diào)節(jié)等方面有著重要的作用[7]。三種細(xì)胞因子參與PCP感染的發(fā)生主要通過(guò)PC激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α，參與 PCP 的免疫病理反應(yīng)。而TNF-α可進(jìn)一步增加巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞IL-8 和sICAM-1的表達(dá)， IL-8和sICAM-1又可促進(jìn)白細(xì)胞黏附聚集在肺部組織，破壞局部免疫系統(tǒng)，使蟲(chóng)體大量附著，進(jìn)而導(dǎo)致肺泡氣體交換障礙[8]。 也有研究表明， PC包囊可活化氣道上皮細(xì)胞中的肺細(xì)胞壁β葡聚糖(Pneumocystis cell wall β-glucans, PCBG)，進(jìn)一步誘導(dǎo)MAPK、ERK和p38的磷酸化，從而激活經(jīng)NF-κB和鈣依賴性途徑對(duì)IL-8的分泌[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，建模4周前大鼠血清中這三種因子水平的變化比較輕微，其中血清中IL-8甚至有降低的現(xiàn)象，推測(cè)大鼠血清中上述三種細(xì)胞因子的含量變化在建模4周前系皮下注射地塞米松破壞大鼠免疫系統(tǒng)功能所致，而建模4周后的含量變化才反應(yīng)大鼠體內(nèi)PCP的嚴(yán)重程度，其中TNF-α和sICAM-1迅猛上升，提示感染隨建模時(shí)間延長(zhǎng)而加重，而IL-8緩慢升高，與萬(wàn)啟惠等[10]發(fā)現(xiàn)卡氏肺孢子蟲(chóng)肺炎大鼠血清中IL-8含量在建模第7、8、9周有輕微升高的觀察結(jié)果一致，推測(cè)IL-8在PC包囊激起的免疫應(yīng)答過(guò)程中可能屬于后效應(yīng)因子。綜合觀察上述三種因子的含量變化，可幫助判斷機(jī)體內(nèi)PCP的嚴(yán)重程度。

4結(jié)論

本研究結(jié)果顯示，大鼠建模4周后可出現(xiàn)鼠肺組織學(xué)改變和血清中細(xì)胞因子含量變化等較為明顯的PCP相關(guān)病征，而建模6周和8周之間可能存在肺孢子菌與宿主相互作用的相持時(shí)期。通過(guò)對(duì)免疫低下人群上述指標(biāo)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)并及時(shí)給予藥物防控，可能對(duì)降低AIDS等免疫低下人群中PCP的發(fā)生起到一定作用。

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Modeling of pneumocystispneumonia in rats and the change of pathophysiological cytokineSUN Yan1, Yilizila·Yikelamu1, GAO Jian2,etal

(1.Class2011-2,ClinicalMedicalCollege,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,China;

2.DepartmentofHumanParasitology,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi830011,Urumqi830011,China)

【Abstract】ObjectiveTo observe the dynamic changes of pulmonary histology, pathogenic, and content of TNF-α, sICAM-1 and IL-8 in serum in rats during the establishment of pnenmonia model for pnenmocystis carinii. MethodsThe pnenmonia model for pnenmocystis carinii in rats was established. The changes of rat weight, lung weight and lung histology and morphology and number of pnenmocystis carinii cysts in rats 2 weeks, 4 weeks, 6 weeks,8 weeks, and 10 weeks after establishment were observed. TNF-α, sICAM-1 and IL-8 in serum in rats were measured. ResultsThe cysts of pnenmocystis carinii were found in lung printing of rats as early as 2 weeks after PCP model established, but no significant differences of proliferation of PC cysts were found between 6 weeks and 8 weeks after PCP model established 6 weeks and 8 weeks. The symptoms and histological changes of PCP obviously appeared 4 weeks after PCP model established. The content of TNF-α, sICAM-1 and IL-8 in serum in rats also significantly increased 4 weeks after PCP model established, while the content of TNF-α and sICAM-1 increased rapidly compared that of IL-8. ConclusionAll PCP-related symptoms can be observed 4 weeks after PCP model established, and a stalemate stage of pneumocystis-host interaction may existed between 6 weeks and 8 weeks after PCP model establishment.

【Key words】Pneumocystis carinii pneumonia; Cysts of pnenmocystis carinii; Histology; TNF-α; sICAM-1; IL-8

(收稿日期：2015-02-03； 編輯： 母存培)

通訊作者：高劍，E-mail：gaojian5101@163.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201310760002)；新疆醫(yī)科大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(CX2013002)；新疆醫(yī)科大學(xué)博士(后)科研項(xiàng)目啟動(dòng)基金并新疆醫(yī)科大學(xué)科研創(chuàng)新基金(XJ201222)

【中圖分類號(hào)】R-33

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

doi：10.3969/j.issn.1672-3511.2015.09.003