奧美拉唑?qū)Υ笫蠓戳餍允彻莛つp傷后IL-6及TNF-α的影響

張萌,黃剛,周志剛,楊金良

(河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院胸外科,河北石家莊050051)

摘要：目的：觀察奧美拉唑?qū)Ψ戳餍允彻莛つp傷后大鼠血漿和食管組織中細(xì)胞因子IL-6及TNF-α的影響，探討奧美拉唑治療反流性食管炎的作用機(jī)制。方法:選用健康雄性SD大鼠，體重220～250g，隨機(jī)將動物分為5組，假手術(shù)組、單純胃食管反流動物模型組(模型組)、模型組+奧美拉唑低劑量組、中劑量組、高劑量組。分別取食管標(biāo)本肉眼觀察黏膜狀況。應(yīng)用ELISA方法檢測大鼠血漿和食管組織中細(xì)胞因子IL-6及TNF-α的變化。結(jié)果:假手術(shù)組大鼠食管顏色淡紅，有光澤，黏膜光滑。模型組大鼠食管顏色變淡白，黏膜粗糙、增厚、皺襞灰白色斑塊狀增生。與模型組比較，奧美拉唑低、中、高劑量治療組大鼠食管病變明顯減輕。ELISA檢測結(jié)果顯示，假手術(shù)組大鼠血漿和食管組織有一定IL-6及TNF-α的基礎(chǔ)含量。模型組大鼠血漿和食管組織IL-6及TNF-α含量明顯升高，奧美拉唑治療組大鼠血漿和食管組織IL-6及TNF-α含量明顯降低。結(jié)論:奧美拉唑明顯降低反流性食管黏膜損傷后大鼠血漿和食管組織炎癥因子IL-6及TNF-α的含量，可能是其改善食管局部及外周炎癥反應(yīng)、治療反流性食管炎的重要作用機(jī)制。

關(guān)鍵詞：胃酸反流;反流性食管損傷;奧美拉唑;IL-6;TNF-α

文章編號：1006-6233(2015)11-1768-03

基金項目：*河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題，(編號：ZD20140515)

通訊作者：*E-mail:jinliangyang1963@sina.com

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

Effects of Omeprazole on the Level of IL-6 and TNF-α in the Rats Model

of Esophageal Mucosal Injury Induced by Reflux of Acid

ZHANGMeng,HUANGGang,ZHOUZhigang,etal

(The Third Hospital of Hebei Medical University,

Hebei Shijiazhuang 050051, China)

Abstract：Objective: To observe the effect of omeprazole on the level of IL-6 and TNF-α in the rats model of esophageal mucosal injury induced by reflux of acid. Method: Healthy male SD rats weighing 220 to 250g were randomly divided into 5 groups: sham-operated group(sham), gastroesophageal reflux group (model), omeprazole low dose, middle dose and high dose groups. Rat models of reflux esophagitis were induced by single acid reflux. The contents of IL-6 and TNF-α were detected by ELISA staining. Result: The esophagus of rat was erythroid and lustrous, with glossy mucosal membranes in sham group. Compared with that of the sham group, the esophagus presented light white and the esophageal mucosal membrane became rough, thicken, grey plaque-like proliferation in rats of model group. Compared with that of model group, above the changes were significantly decreased in omeprazole treatment groups. Compared with that of the sham group, the contents of IL-6 and TNF-α were significantly increased in model group. Compared with thats of the model group, the contents of IL-6 and TNF-α were significantly decreased in treatment of omeprazole group. Conclusion: It could be concluded that omeprazole could decrease the esophgeal mucosal injury induced by reflux of acid by decrease the contents of IL-6 and TNF-α.

Key words: Gastric acid reflux;Reflux esophagitis;Omeprazole;IL-6;TNF-α

反流性食管炎(reflux esophagitis, RE)是由于食管廓清能力下降、食管下括約肌功能異常、胃酸以及膽汁等多因素引發(fā)的一種疾病。其中胃酸對食管黏膜的直接或/和間接損害是導(dǎo)致RE的病理基礎(chǔ)[1～3]。我們前期研究表明，奧美拉唑可通過下調(diào)細(xì)胞增殖相關(guān)基因PCNA、CyclinD1和CDK4蛋白表達(dá)，上調(diào)p21蛋白表達(dá)，發(fā)揮治療反流性食管損傷的作用[4]。本研究應(yīng)用反流性食管黏膜損傷大鼠模型，觀察奧美拉唑?qū)Ψ戳魇彻莛つp傷的作用，同時觀察其對反流性管黏膜損傷后大鼠血漿和食管組織中細(xì)胞因子IL-6及TNF-α的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物及分組:健康雄性SD大鼠75只，體重220～250g，由河北省實驗動物中心提供，動物合格證號：1306088。大鼠購入后適應(yīng)環(huán)境1周，分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)食標(biāo)準(zhǔn)飼料及飲水。隨機(jī)將大鼠分為5組：假手術(shù)組、胃食管反流動物模型組(模型組)、奧美拉唑低、中、高劑量組，每組15只。飼養(yǎng)前將飼養(yǎng)室用紫外線照射消毒，飼養(yǎng)籠用過氧乙酸消毒，室溫保持恒溫(23±2)℃。

1．2藥品與試劑:奧美拉唑膠囊(浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠)。IL-6 ELISA試劑盒(北京義翹神州生物技術(shù)有限公司)，TNF-α ELISA試劑盒(上海西唐生物科技有限公司)。

1．3模型制備及給藥:術(shù)前大鼠禁食24h，禁水2h。大鼠腹腔注射10%水合氯醛(30mL/kg)麻醉，固定于手術(shù)臺上，備皮消毒后取上腹部正中切口進(jìn)腹，分離食管下段神經(jīng)和血管，采用食管下段與胃底吻合術(shù)，于胃大彎側(cè)食管下段(距胃食管交接部0.5～1.5cm處)和胃底近食管下段處分別做1.0cm切口行側(cè)側(cè)吻合。注意觀察吻合口是否暢通或有無滲液。假手術(shù)組大鼠上腹部正中切口，暴露胃食管于腹腔外約10min后關(guān)閉腹腔。術(shù)后禁食48h，飲水，48h后常規(guī)喂養(yǎng)。于術(shù)后第6天分別將奧美拉唑低劑量(10mg)、中劑量(20mg)、高劑量(40mg)給大鼠灌胃，假手術(shù)組和模型組大鼠給予等容量的生理鹽水，連續(xù)給藥8周。水合氯醛麻醉下，抽取大鼠腹主動脈血，立即灌入EDTA-2鈉抗凝耦合劑中，靜置30min后，放入2℃離心機(jī)中，以1000r/min離心15min，取上層血漿，放入-20℃冰箱中備用。取食管下段(包括吻合口)進(jìn)行縱行剖開，用冰生理鹽水清洗食管，肉眼觀察黏膜狀況，然后迅速放入液氮罐內(nèi)冰凍保存?zhèn)溆谩L-6和TNF-α的測定按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2結(jié)果

2．1食管大體形態(tài)變化:假手術(shù)組大鼠食管顏色淡紅，有光澤，黏膜光滑。模型組大鼠食管顏色變淡白，黏膜粗糙、增厚、皺襞灰白色斑塊狀增生。與模型組比較，奧美拉唑低、中、高劑量治療組大鼠食管病變明顯減輕。

2．2食管組織及血漿IL-6的變化:與假手術(shù)組比較，模型組大鼠食管組織及血漿IL-6的含量明顯升高，與模型組比較，奧美拉唑治療組大鼠食管組織及血漿IL-6的含量明顯降低，見表1。

2．3食管組織及血漿TNF-α的變化:與假手術(shù)組比較，模型組大鼠食管組織及血漿TNF-α的含量明顯升高，與模型組比較，奧美拉唑治療組大鼠食管組織及血漿的含量TNF-α明顯降低，見表2。

表1　奧美拉唑?qū)Ψ戳餍允彻軗p傷后食管及

與模型：*P<0.05，**P<0.01

表2　奧美拉唑?qū)Ψ戳餍允彻軗p傷后食管及

與模型：*P<0.05，**P<0.01

3討論

反流性食管炎(RE)是由于食管胃連接部預(yù)防反流機(jī)制障礙導(dǎo)致胃內(nèi)容物反流入食管引起的食管黏膜損傷，該病屬于胃食管反流病(GERD),以食管下段出現(xiàn)黏膜糜爛、潰瘍?yōu)樘卣鱗5]。本實驗采用胃食管反流手術(shù)方式復(fù)制反流性食管黏膜損傷的大鼠模型，結(jié)果顯示，模型動物均出現(xiàn)食管黏膜損傷，黏膜粗糙、增厚、皺襞灰白色斑塊狀增生，表明模型復(fù)制成功。

在胃食管反流病發(fā)生發(fā)展過程中，炎癥因子的影響起重要的作用，同時也存在著免疫系統(tǒng)促進(jìn)炎癥和抑制炎癥機(jī)制的調(diào)控失衡[6]，因此，胃食管反流病發(fā)生發(fā)展過程中的免疫調(diào)控機(jī)制，逐漸受到關(guān)注和重視，如其中的白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)。IL-6主要由單核-吞噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等多種細(xì)胞受白細(xì)胞介素-1(IL-1)和少量TNF刺激時合成的細(xì)胞因子，基礎(chǔ)和臨床研究均表明，機(jī)體許多炎癥反應(yīng)均與IL-6的參與有關(guān)，但是關(guān)于IL-6在反流性食管損傷過程中變化情況的研究還比較少。本實驗應(yīng)用反流性食管黏膜損傷大鼠模型研究結(jié)果表明，模型組大鼠食管組織及血漿IL-6的含量明顯升高，提示IL-6可能是通過誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞活化、產(chǎn)生活性氧等作用，進(jìn)一步影響食管平滑肌的張力，促使反流性食管炎的發(fā)生及惡化。同時表明奧美拉唑通過降低大鼠食管組織及血漿中IL-6的含量，而發(fā)揮其治療反流性食管損傷的作用。

TNF-α主要由活化的單核/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，能抑制和殺傷腫瘤細(xì)胞，促進(jìn)中性粒細(xì)胞吞噬，抗感染，引起發(fā)熱，誘導(dǎo)肝細(xì)胞急性期蛋白合成，在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞免疫、腫瘤免疫等多種生理、病理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，同時還參與某些自身免疫性疾病的病生理損傷。Yamaguchi等[7]應(yīng)用大鼠急性反流性食管炎模型實驗研究也證明，由于胃反流物的刺激，食管黏膜中TNF-α的含量升高，并誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞活化，進(jìn)而產(chǎn)生活性氧及脂質(zhì)過氧化作用，導(dǎo)致食管炎癥反應(yīng)的發(fā)生。本實驗結(jié)果顯示，模型組大鼠食管組織及血漿TNF-α的含量明顯升高，經(jīng)奧美拉唑治療后，大鼠食管組織及血漿TNF-α的含量明顯降低，食管黏膜組織損傷程度明顯減輕。

總之，通過上述實驗研究表明，奧美拉唑可明顯降低反流性食管黏膜損傷后大鼠血漿和食管組織炎癥因子IL-6及TNF-α的含量，這可能是其改善食管局部及外周炎癥反應(yīng)、治療反流性食管炎的重要作用機(jī)制。其詳細(xì)的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。

參考文獻(xiàn):

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[4]張萌, 黃剛,周志剛,等.奧美拉唑?qū)Υ笫蠓戳餍允彻莛つp傷后細(xì)胞增殖相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].河北醫(yī)藥,2014.

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[7]Yamaguchi T, Yoshida N, Tomatsuri N, et al. Cytokine-induced neutrophil accumulation in the pathogenesis of acute reflux esophagitis in rats[J].Int Mol Med, 2005,16(1):71～77.

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