帥放文，王向峰，雷玉萍，肖江，曹榮，彭麗娟

(湖南省藥用輔料工程技術研究中心有限公司，長沙 410331)

沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)的研究

帥放文，王向峰，雷玉萍，肖江，曹榮，彭麗娟

(湖南省藥用輔料工程技術研究中心有限公司，長沙 410331)

研制了沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)。依據(jù)國家《一級標準物質(zhì)研制技術規(guī)范》，采用高效液相色譜(HPLC)法和差示掃描量熱(DSC)法對沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)進行聯(lián)合定值，進行了相應的不確定度評定。研制的沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)定值結果為(99.8±0.5)%(k=2，P=0.95)。該標準物質(zhì)可用于相關藥品生產(chǎn)及使用單位的質(zhì)量控制和分析方法確認評價。

沒食子酸丙酯；純度標準物質(zhì)；高效液相色譜法；差示掃描量熱法

沒食子酸丙酯因其具有較強的抗氧化能力，在食品、醫(yī)藥化學等領域有著廣泛的應用。目前市售的沒食子酸丙酯工作對照品雖然有多個，但尚無國家有證標準物質(zhì)，不利于該品種的質(zhì)量控制和分析方法確認研究。隨著沒食子酸丙酯生產(chǎn)廠家的增加和使用范圍的擴大，該品種的標準物質(zhì)需求逐步增加。為滿足市場需求，研制沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)具有廣泛的市場價值。根據(jù)我國一級標準物質(zhì)研制技術規(guī)范和國家計量相關法規(guī)［1-3］，采用高效液相色譜法［4-5］(HPLC)和差示掃描量熱法［6-7］(DSC)完成了對沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)聯(lián)合定值，根據(jù)統(tǒng)計學原理，建立標準物質(zhì)標準值的不確定度評估的數(shù)學模型，克服一種定值方法的技術缺陷，保證了標準物質(zhì)定值結果的科學性和準確性。筆者研制的沒食子酸丙酯標準物質(zhì)，屬計量范疇，具備溯源性與量值傳遞功能，可在國際交流中使用。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：U3000型，美國戴安公司；

紫外可見分光光度計：UV-2450型，日本島津公司；

紅外光譜儀：Spectrum-65型，美國PerkinElmer公司；

核磁共振儀：Varian INOVA-300型，美國瓦里安公司；

質(zhì)譜儀：Bruker Amazon X型，美國布魯克·道爾頓公司

高分辨質(zhì)譜儀：Agilent 6520 Q-TOF型，美國安捷倫公司；

沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)：自制；

甲醇：色譜級，德國Merck公司；

實驗所用其它試劑均為分析純；

實驗用水為超純水。

1.2 標準物質(zhì)候選物的制備

采用高純沒食子酸丙酯為原料，以水為溶劑，水浴加熱80℃使其溶解后，保溫30 min，濾過，在0℃的條件下重結晶5 h，過濾后，在45℃，-0.085 MPa下減壓干燥8 h，經(jīng)研磨過篩，混勻后即得候選標準物質(zhì)。

1.3 定性分析

采用紅外光譜、紫外光譜、質(zhì)譜、核磁氫譜、核磁碳譜和高分辨質(zhì)譜對沒食子酸丙酯標準物質(zhì)主成分進行定性分析。

1.4 定值分析

采用高效液相色譜法和差示掃描量熱法兩種不同原理的方法對沒食子酸丙酯標準物質(zhì)進行定值分析。

1.4.1 高效液相色譜條件

色譜柱：WondasilTMC柱色譜柱(250 mm×4.618mm，5 μm)；流動相：0.1%乙酸-甲醇(體積比為40∶60)；流量：1.0 mL／min；檢測波長：220 nm；柱溫：25℃；進樣體積：10 μL。

1.4.2 DSC條件

精密稱取沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)樣品2～4 mg，置于40 μL標準鋁坩堝中。壓蓋，置于DSC儀中，以空的40 μL標準鋁坩堝作為參比，控制升溫速率為1.0℃／min，升溫區(qū)間為135～155℃，記錄DSC熱流值峰面積，采用分析軟件計算其化學純度。

1.5 雜質(zhì)分析

1.5.1 水分測定

采用卡爾-費休法［8］進行水分的測定。

1.5.2 熾灼殘渣的測定

采用《中國藥典》2010版附錄ⅧN的熾灼殘渣檢查法進行測定。

1.6 均勻性檢驗

根據(jù)JJF1006-1994［9］進行標準物質(zhì)的均勻性檢驗，采用高效液相色譜法測定樣品，以面積歸一化法計算沒食子酸丙酯的含量，并以含量測定結果作為樣品均勻性的考察指標。隨機抽取沒食子酸丙酯標準物質(zhì)樣品15瓶，每瓶取樣3次，取樣量為10 mg，共45份樣品，進行瓶間和瓶內(nèi)均勻性檢驗，對瓶內(nèi)和瓶間兩組測定值的方差進行F檢驗。

1.7 穩(wěn)定性考察

標準物質(zhì)的穩(wěn)定性是衡量標準物質(zhì)特性的另外一個重要參數(shù)。標準物質(zhì)的長期穩(wěn)定性與貯存條件有關，短期穩(wěn)定性與樣品運輸過程中的外部因素有關。根據(jù)JJF1006-1994［9］，將分裝于棕色西林瓶中的密封樣品，放置于規(guī)定的存儲環(huán)境中，進行長期穩(wěn)定性考察，在不同時間點(0，1，3，6，9，12月)隨機選取5瓶，每瓶取樣1份。采用高效液相色譜法進行測定，并以面積歸一化法計算含量。分別采用t檢驗及直線擬合法對上述實驗結果進行評價，以確定樣品的長期穩(wěn)定性。

2 結果與討論

2.1 定性分析

沒食子酸丙酯結構式如圖1所示。

圖1 沒食子酸丙酯結構式

沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)的紅外圖譜與沒食子酸丙酯標準紅外圖譜一致；UV(甲醇)λmax：206 nm；ESI-MSm／z：212［ M-H］-；高分辨質(zhì)譜：測得相對分子質(zhì)量為212.064 0，與其相對分子質(zhì)量相符；

2.2 定值分析

采用差示掃描量熱法、高效液相色譜法(HPLC-UV)對沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)進行定值。兩種不同原理定值方法對沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)的聯(lián)合定值，可避免一種方法可能帶來的技術缺陷。建立不同技術原理不確定度評估數(shù)學模型，為標準物質(zhì)的不確定度評價提供了科學依據(jù)。圖2為沒食子酸丙酯標準物質(zhì)高效液相色譜圖，圖3為沒食子酸丙酯差示掃描量熱法圖。

圖2 沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)的液相色譜圖

圖3 沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)的DSC譜圖

表1、表2為沒食子酸丙酯定值結果。

表1 沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)HPLC純度測定結果 %

表2 沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)DSC純度測定結果 %

采用科克倫準則、狄克遜準則和格布拉斯檢驗對定值數(shù)據(jù)進行了考察，結果表明測試數(shù)據(jù)無異常值。以t檢驗法，評估了兩種方法的一致性，結果表明兩種方法一致性良好。該批標準物質(zhì)的純度值為兩種定值方法的算術平均值，即99.8%。

2.3 均勻性考察

隨機抽取沒食子酸丙酯標準物質(zhì)樣品15瓶，每瓶取樣3次，取樣量為10 mg，共45份樣品，采用HPLC法進行測定，結果見表3。

表3 沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)均勻性檢驗結果 %

根據(jù)表3數(shù)據(jù)進行均勻性檢驗，計算得測定結果的總平均值為99.927%，組內(nèi)差方和，組間差方和，F(xiàn)=1.18，F(xiàn)0.05(14，30)=2.04，F(xiàn)＜F0.05(14，30)，說明樣品均勻性好。

2.4 穩(wěn)定性考察

樣品長期穩(wěn)定性檢驗結果列于表4。t檢驗結果表明，樣品在(30±2)℃下儲存12個月，沒食子酸丙酯標準物質(zhì)含量未發(fā)生顯著變化。因此樣品可以(30±2)℃下穩(wěn)定儲存12個月。

表4 沒食子酸丙酯標準物質(zhì)穩(wěn)定性檢驗結果

2.5 不確定度評定

2.5.1 水分和熾灼殘渣測定引入的不確定度

通過水分和熾灼殘渣所占含量估計，得水分測定引入的不確定度為uwater=0.13%，熾灼殘渣測定引入的的不確定度uash=0.02%。

2.5.2 不均勻性引入的相對不確定度

標準物質(zhì)的均勻性不確定度按照方差分析法進行檢驗，結果表明該批標準物質(zhì)的均勻性良好。樣品不均勻性引入的不確定度：

2.5.3 穩(wěn)定性引入的不確定度

有效期t=12個月的長期穩(wěn)定性的不確定度：

2.5.4 DSC法引入的不確定度

差示掃描量熱法定值的不確定度由5部分組成［10-11］：樣品重復性測量標準不確定度(uA1)；標準物質(zhì)銦的熔融焓測量重復性(uB1)、天平的稱量誤差(uB2)、儀器的溫度誤差(uB3)、儀器的摩爾熔融熱焓誤差(uB4)等引起。差示掃描量熱法定值的不確定度見表5。

由于上述樣品測定的4個不確定度分量產(chǎn)生的原因不同，所以彼此線性無關。根據(jù)JJF1059-1999［12］，其合成標準不確定度u2由各分量相對不確定度合成計算：

表5 DSC檢測分析方法的合成標準不確定度評定結果

則DSC測量引入的不確定度uDSC：

式中：P——DSC測定的沒食子酸丙酯標準物質(zhì)的純度，%；

2.5.5 高效液相色譜法引入的不確定度

高效液相色譜定值的不確定度由3部分組成：

(1)A類標準不確定度：采用高效液相色譜法定值測量計算得到單次測量標準偏差u3＝0.017%。

(2)B類不確定度：雜質(zhì)響應引入的不確定度u4＝0.15%。

(3)檢測線性引入的不確定度：儀器在檢測過程中未超出沒食子酸樣品的線性范圍，因此檢測線性引入的不確定度可忽略。

液相色譜分析引入的不確定度：

2.6 合成不確定度

綜上，合成得沒食子酸丙酯標準物質(zhì)的測量不確定度：

置信概率95%下，取包含因子k=2，擴展不確定度：

該批沒食子酸丙酯標準物質(zhì)的定值結果：

3 結論

采用HPLC法和DSC法對沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)進行定值，避免了一種原理方法可能帶來的技術缺陷?？疾炝藰藴饰镔|(zhì)均勻性和穩(wěn)定性，該標準物質(zhì)符合均一性和穩(wěn)定性的要求。該標準物質(zhì)已通過評審，獲準成為國家二級標準物質(zhì)。研制的沒食子酸丙酯純度標準物質(zhì)是國內(nèi)首創(chuàng)，能適應多種測量方法，可以促進和規(guī)范國內(nèi)沒食子酸丙酯的使用和產(chǎn)品的檢驗，也可以擴大國際互認范圍，同時對保證有證標準物質(zhì)供應、量值傳遞以及質(zhì)量控制具有現(xiàn)實意義。

［1］ JJG 1006-1994 中華人民共和國一級標準物質(zhì)研制技術規(guī)范［S］.

［2］ ISO Guide 35 認證一般原則與統(tǒng)計原則［S］.

［3］ 全浩，韓永志，賴喜平，等.標準物質(zhì)及應用技術［M］.北京：中國標準出版社，2003.

［4］ SN/T 1785-2006 進出口化妝品中沒食子酸丙酯的測定［S］.

［5］ 龔雪云，張磊，李華岑.高效液相色譜法測定飼料中的沒食子酸丙酯［J］.光譜實驗室. 2011(4): 1 969-1 971.

［6］ 王蕾，倪捷兒，張新波，等.差示掃描量熱法測定7種藥物純度［J］.江蘇藥學與臨床研究，2005，13(5): 30-32.

［7］ 周政政，郭永輝，楊德智，等.苦杏仁苷純度標準物質(zhì)研制和純度標準值及不確定度分析方法研究［J］.醫(yī)學導報. 2013，23(3): 1-4.

［8］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［9］ JJF 1006-1994 一級標準物質(zhì)技術規(guī)范［S］.

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［12］ JJF 1059-1999 測量不確定度平定與表示［S］.

獨立第三方食品安全檢測站在京成立

全國健康產(chǎn)業(yè)工作委員會食品安全宣教中心不久前在京宣布成立獨立的第三方食品安全檢測站。該委員會秘書長李志海表示，公眾對任何食品存疑，可直接和該檢測站聯(lián)系，委托檢測，并公示結果。

李志海表示，該檢測站目前設立在北京，主要檢測農(nóng)產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留、重金屬、微生物、添加劑是否超標等項目。日常食用的牛奶、蔬菜、水果、糧食、肉類產(chǎn)品等都在檢測范圍之內(nèi)。除了接受社會公眾的委托檢測之外，檢測站還會不定期組織一些隨機檢測活動，并發(fā)布獨立檢測報告。據(jù)悉，檢測站使用國產(chǎn)頂級設備，有國內(nèi)知名食品安全專家組成的專家團。

據(jù)介紹，第三方檢測機構作為中介服務類機構為社會提供各項檢測服務并出具檢測報告，報告有利于幫助公眾了解真相，有的檢測報告可作為公眾維權的相關證據(jù)，但不具有法律效力，不可用于社會公正和法律訴訟。

（儀器信息網(wǎng)）

Development of Propylgallate Certified Reference Material

Shuai Fangwen， Wang Xiangfeng， Lei Yuping， Xiao Jiang， Cao Rong， Peng Lijuan
(Hunan Engineering Research Center for Pharmaceutical Excipients Co.，Ltd.， Changsha 410331， China)

Propylgallate certified reference material was developed. According to national Technical Norm of Primary Reference Material，the purity of propylgallate was determined by combined value assignment of high performance liquid chromatography (HPLC) and differential scanning calorimetry (DSC). The standard value and uncertainty of propylgallate CRM was (99.8±0.5)% (k=2，P=0.95). The purity of propylgallate could be used for pharmaceutical production，quality control and confirm evaluation of analysis method.

propylgallate; reference material; high performance liquid chromatography; differential scanning calorimetry

O657

：A

：1008-6145(2015)03-0005-04

10.3969／j.issn.1008-6145.2015.03.002

聯(lián)系人：曹榮；E-mail: 510776817@qq.com

2015-02-02