翀 ，韓慶安*

(1.中共遷安市委農(nóng)工委河北遷安064400；2.秦皇島市動物疫病預防控制中心河北秦皇島066001；3.秦皇島市畜牧站河北秦皇島066001；4.鹽山縣動物疫病預防控制中心河北滄州061300；5.河北省動物疫病預防控制中心河北保定071000)

兩種方法檢測奶牛結(jié)核病的比較分析

王麗霞1，李愛華2，王會杰3，劉翠梅4，劉天駒5，李翀5，韓慶安5*

(1.中共遷安市委農(nóng)工委河北遷安064400；2.秦皇島市動物疫病預防控制中心河北秦皇島066001；3.秦皇島市畜牧站河北秦皇島066001；4.鹽山縣動物疫病預防控制中心河北滄州061300；5.河北省動物疫病預防控制中心河北保定071000)

采用常規(guī)皮內(nèi)變態(tài)反應(TST方法)對唐山、秦皇島、滄州和石家莊四個市共計2 204頭奶牛進行牛結(jié)核病檢測，采用IFN-γ試驗方法對PPD檢測結(jié)果為陽性、可疑的牛以及部分陰性牛進行復檢。將IFN-γ試驗與TST檢測結(jié)果相比較，其敏感性為78.26%，特異性為89.09%，符合率為84.33%。研究表明單獨使用PPD皮內(nèi)變態(tài)反應方法在牛結(jié)核病的診斷方面存在特異性差的缺點，用IFN-γ試驗對TST試驗陽性和可疑牛進行復檢可以提高特異性，避免造成假陽性牛的誤殺；該方法在臨床上適合推廣應用。

奶牛結(jié)核病;皮內(nèi)變態(tài)反應;IFN-γ試驗

牛結(jié)核病(Bovine Tuberculosis)是由分支桿菌屬牛分枝桿菌所引起的一種慢性消耗性傳染病，由于該病也感染人，所以是人畜共患病。該病雖然能夠感染豬、鹿、猴等動物，但牛最易感；而在牛中，黃牛和牦牛感染級別較大，水牛易感性較高，但奶牛最易感染[1]。我國將該病列為二類動物疫病，而OIE將其列為需通報的B類動物疫病[2]。當前，人民對牛奶和牛肉的需求量較大，我國奶牛業(yè)發(fā)展較快，但通過對人結(jié)核病患者病原統(tǒng)計分析，有10%結(jié)核病病原為牛分枝桿菌[3,4]，故該病控制的好壞，直接關(guān)系到奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展和居民的身體健康，因此及時檢測、淘汰結(jié)核感染的奶牛具有重要的現(xiàn)實意義。

牛全血干擾素試驗方法（牛IFN-γ試驗方法）是牛結(jié)核診斷的一種新型的牛結(jié)核診斷方法，由Wood等首先將該方法用于牛結(jié)核病的檢測[5]，而澳大利亞利采用該方法作為牛結(jié)核病根除計劃的首選試驗方法運用于臨床，效果顯著，并于1997年底宣布消滅了牛結(jié)核病[6]。當前，該方法在歐盟和美國等發(fā)達國家也得到了承認，成為繼TET方法之外的唯一的法定活畜牛結(jié)核病診斷試驗。當前我國主要采用頸部皮試變態(tài)反應（TST法）來進行牛結(jié)核病的檢疫，對陽性牛進行撲殺，對可疑牛隔離后再次進行檢疫，而國外采用的用于牛結(jié)核病檢疫的牛IFN-γ試驗方法目前在我國尚未正式推薦使用。由于TST法存在非特異性強、假陽性率高的特點，加之我國對撲殺奶牛經(jīng)濟補償價偏低，這給基層動物疫控系統(tǒng)嚴格執(zhí)行牛結(jié)核病的檢疫、撲殺政策帶來了了巨大的阻力。即要做到不提高檢測成本，又要做到降低其檢測結(jié)果的非特異性，是當前在牛結(jié)核的檢疫中亟需解決的問題。本研究引入IFN-γ試驗法，并同TST法的試驗結(jié)果進行比較分析，來探討分析其在實際工作中的應用價值。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

奶牛來自唐山市、秦皇島市、滄州市和石家莊市的奶牛場，總共2 204頭（四個市分別為937頭、356頭、398頭和513頭）。

1.2 主要試劑

BOVIGAM?牛結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素檢測試劑盒，購自Prionics AG公司（批號：6339900101）；牛型PPD（牛型提純結(jié)核菌素)，購自哈藥集團生物疫苗有限公司（批號：201304）。

1.3 方法

1.3.1 TST試驗和IFN-γ試驗按照說明書規(guī)定的方法進行。

1.3.2 2種方法的符合率、敏感性和特異性比較按照如下公式計算：

符合率=（真陽性數(shù)+真陰性數(shù)）/被檢總數(shù)、敏感性=真陽性數(shù)/（真陽性數(shù)+假陰性數(shù)）、特異性=真陰性數(shù)/（真陰性數(shù)+假陽性數(shù))。

2 結(jié)果

2.1 TST試驗

TST試驗結(jié)果見表1。

表1 TST試驗結(jié)果

2.2 IFN-γ試驗

IFN-γ試驗結(jié)果見表2。

表2 IFN-γ試驗結(jié)果

2.3 符合率、敏感性和特異性比較

符合率、敏感性和特異性比較結(jié)果見表3。

表3 IFN-γ試驗和TST試驗檢測符合率情況比較

3 分析與討論

本研究中對TST試驗方法檢出的60頭結(jié)核病陽性牛進行IFN-γ試驗方法檢測，檢出牛型結(jié)核36頭、禽型結(jié)核牛6頭；對TST試驗方法檢出的121頭可疑牛進行IFN-γ試驗方法檢測，檢出牛型結(jié)核10頭、禽型結(jié)核牛13頭。從檢測數(shù)據(jù)可以看出，部分皮內(nèi)變態(tài)反應陽性牛呈現(xiàn)出假陽性結(jié)果，若單獨用該方法檢出的PPD陽性牛實行撲殺策略，勢必誤殺部分假陽性牛。而對于皮內(nèi)變態(tài)反應可疑的牛，需要在60 d后進行復檢，仍為可疑的，需要再過60 d再次進行復檢，這無疑造成了病原的擴散和疫情處置的延誤。我們對TST發(fā)檢出的36頭陰性牛進行IFN-γ檢測，結(jié)果全部陰性；而徐賢坤（2010）等對 PPD檢出的25頭陰性牛進行IFN-γ檢測，結(jié)果檢出了5頭假陰性牛，與我們的結(jié)果不相符，這可能與檢測的數(shù)量多少和選擇針對性樣品不同有關(guān)[7]。

對217份奶牛樣本進行牛結(jié)核病IFN-γ試驗和TST試驗比較，結(jié)果其敏感性、特異性和符合率分別為78.26%、89.09%和84.33%，而徐賢坤（2010）等檢測的結(jié)果分別為53.33%、70.49%和67.11%[7]；朱冬冬（2010）等[6]檢測結(jié)果分別為30.30%、82.05%和39.56%，我們的結(jié)果均比他們的高。

資料顯示，對TST試驗后2～28 d內(nèi)的奶牛采樣進行IFN-γ試驗檢測，其敏感性和特異性不受影響。但我們對牛群進行TST檢測后40 d、28 d、14 d和3 d的樣品進行IFN-γ試驗結(jié)果表明，兩種方法檢測間隔越短，其陽性符合率越高，出現(xiàn)的假陽性或假陰性越少。雖然在牛結(jié)核檢疫中可以不進行TST試驗方法檢測，直接進行IFN-γ試驗檢測，但其高昂的價格（160元/份）和繁瑣的試驗過程，不適合在我國基層進行大面積推廣。我們認為，在對奶牛進行TST試驗后3～5 d，對檢測出的陽性及可疑牛采樣進行IFN-γ試驗檢測是比較理想的。這樣不僅降低檢疫成本，還可以避免誤殺部分假陽性牛。

由于存在遲發(fā)型變態(tài)反應現(xiàn)象，試驗TST檢測中，對72 h呈現(xiàn)可疑的奶牛一定要觀察到96 h或120 h，否則會出現(xiàn)陽性牛漏檢現(xiàn)象。我們在對滄州市的奶牛進行TST檢測時，有一頭奶牛在72 h時皮厚差為1.18 mm，到96 h時皮厚差為2.56 mm。對該奶牛采樣進行IFN-γ試驗檢測，結(jié)果牛結(jié)核陽性。

國內(nèi)部分學者對牛結(jié)核的其他檢測方法也進行比較分析。張喜悅（2010）等認為γ-干擾素試驗和國外比較變態(tài)反應之間具有較好的陽性符合率，國內(nèi)牛PPD與國外牛PPD試驗結(jié)果相似，但國內(nèi)常規(guī)皮試的特異性很低，而將國內(nèi)皮試改進為國內(nèi)比較皮試，則與國外常規(guī)的比較皮試具有較好的陽性符合率[8]；金璐娟（2004）等采用變態(tài)反應與ELISA同時對奶牛結(jié)核病進行檢測，并以剖檢進行驗證，結(jié)果表明變態(tài)反應陽性并不能全包括ELISA陽性。變態(tài)反應與剖檢的符合率為3.14%；而ELISA與剖檢的符合率為75%，ELISA檢測具有較好的特異性[9]。謝志勤（2010）等應用牛結(jié)核菌素對廣西奶水牛進行牛結(jié)核病皮內(nèi)變態(tài)反應的檢測，然后對皮內(nèi)變態(tài)反應陽性牛采樣進行分離培養(yǎng)、γ-干擾素ELISA和PCR方法檢測，比較這四種檢測方法的符合率，結(jié)果表明γ-干擾素ELISA和PCR方法檢測具有較好的特異性，可以作為變態(tài)反應檢測的補充[10]。有關(guān)該方面的比較分析，有待于我們今后進一步研究。

總之，將PPD的TST試驗方法同IFN-γ檢測方法聯(lián)合用于牛結(jié)核病的檢疫，將有效提高檢測方法的特異性和準確度，適合在我國推廣應用。█ （編輯：李雨慈）

[1] 蔡寶祥.家畜傳染病學[M].4版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2000: 110-114.

[2] World Organization for Animal Health [OIE].Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals〔M〕.Paris,Bovine tuberculosis.2009,16-22.

[3] 張高迪,邢新華,楊醉宇,等.內(nèi)蒙古哲里木盟人與牛結(jié)核相互傳播關(guān)系的研究[J].內(nèi)蒙古畜牧獸醫(yī),1996,2:47-49.

[4] 陳祥,徐正中,時振華,等.γ-干擾素試驗和皮試變態(tài)反應對檢測奶牛結(jié)核病的比較 [J].中國人獸共患病學報,2011,27(2): 97-100.

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[6] 朱冬冬,孫泉云,曹傳閨,等.牛γ－干擾素EIA與TST檢測牛結(jié)核病的比較等.上海畜牧獸醫(yī)通訊,2010,(2):14-15.

[7] 徐賢坤,黃小武,藍紀,等.兩種奶牛結(jié)核病檢測方法的比較[J].畜牧與獸醫(yī),2010,42(2):29-33.

[8] 張喜悅,呼西旦,楊經(jīng)緯,等.γ-干擾素試驗及比較皮試在結(jié)核污染牛群的應用研究 [J].中國人獸共患病學報,2010,26(1): 53-56.

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[10] 謝志勤,謝芝勛,劉加波,等.四種方法檢測廣西奶水牛結(jié)核病的比較[J].中國動物檢疫,2010,27(11):52-55.

Comparison of Two Methods for Detection of Bovine Tuberculosis

Wang Lixia1,Li Aihua2,Wang Huijie3,Liu Cuimei4,Liu Tianju5,Li Chong5,Han Qingan5*
(1.Rural Work Community of Qian`an City,Qian`an,Hebei,064400; 2.Animal Disease Prevention and Control Center of Qin Huangdao City,Qin Huangdao,Hebei,066001; 3.Animal Husbandry and Veterinary Station of Qin Huangdao City,Qin Huangdao,Hebei,066001; 4.Animal Disease Prevention and Control Center of Yanshan County,Yanshan,Hebei,061300; 5.Animal Disease Prevention and Control Center of Hebei Province,Baoding,Hebei,071000)

A total of 2 204 cows from Tangshan,Qin Huangdao,Cangzhou and Shi Jiazhuang were checked for bovine tuberculosis with the method of tuberculin skin test(TST),of which the positive,doubtful and some negative results were rechecked by γ-interferon assay.The results of γ-interferon assay which has a sensitivity of 78.26%and a specificity of 84.33%were compared to those of TST.According to that,the consistency rate of the two methods reached 84.33%.The study showed that γ-interferon assay,which could improve the specificity and therefore avoid false culling,was suited for widespread clinical use.

bovine tuberculosis;tuberculin skin test;γ-interferon assay

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.01.033

*通訊作者：韓慶安，男，博士，主要從事動物疫病防控研究。E-mail：hanqingan2004@sina.com