王瑞平

陜西中醫(yī)學(xué)院(陜西 咸陽 712046)

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EGFR在乳腺癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征相關(guān)性

王瑞平

陜西中醫(yī)學(xué)院(陜西 咸陽 712046)

【摘要】目的探討乳腺癌組織中表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)的分布特點(diǎn)及其與乳腺癌的發(fā)病年齡、組織學(xué)分級、腋窩淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移、雌孕激素受體及人表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)的關(guān)系，為乳腺癌的臨床診斷、治療及預(yù)后提供重要依據(jù)。方法利用免疫組化法檢測144例乳腺癌組織中EGFR的表達(dá)情況。結(jié)果①144例乳腺癌組織中EGFR(+)表達(dá)百分率為38.2%。②EGFR的表達(dá)與患者年齡大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否和組織學(xué)分級I與Ⅱ、Ⅱ與Ⅲ之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；但在組織學(xué)分級I與Ⅲ,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移<4枚與淋巴結(jié)≥4枚的患者間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。③EGFR的表達(dá)與ER、PR之間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。HER2(-)與HER2(+)、HER2(++)與HER2(+++)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)，但HER2(-)與HER2(++)、HER2(-)與HER2(+++)、HER2(+)與HER2(+++)之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論①EGFR的表達(dá)與ER、PR表達(dá)狀況無明顯相關(guān)。但EGFR在HER2強(qiáng)陽性乳腺癌患者中的表達(dá)明顯高于HER2弱陽性患者，可能與乳腺癌侵襲、轉(zhuǎn)移和預(yù)后存在關(guān)聯(lián)性。②EGFR的表達(dá)在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移<4枚與淋巴結(jié)≥4的患者間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量的增加，其陽性表達(dá)率明顯增高。

【關(guān)鍵詞】乳腺腫瘤;表皮生長因子；免疫組織化學(xué)；臨床病理

隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，人們對表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，特別是與乳腺癌細(xì)胞生長、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號傳導(dǎo)機(jī)制有了更深入的了解，針對EGFR與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的癌基因及其相關(guān)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行治療， 抗EGFR分子靶向藥物越來越受重視[1]，但是EGFR的作用機(jī)制尚不十分明確，有待于進(jìn)一步研究[2]，EGFR與臨床病理的關(guān)系很多文獻(xiàn)報道不一[3-4]。本研究采用免疫組化檢測癌組織中EGFR的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系，探討其臨床意義。

1　資料與方法

1.1一般資料收集陜西中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤外科2010年1月至2013年12月144例乳腺癌組織標(biāo)本，均為女性，年齡28～70歲，中位年齡49歲。所有患者術(shù)前未經(jīng)放、化療，所有標(biāo)本均經(jīng)病理檢查確診。診斷、分級及分期標(biāo)準(zhǔn)參照WHO乳腺腫瘤病理學(xué)與遺傳學(xué)。

1.2試劑與方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)試劑EGFR檢測使用鼠抗人單克隆抗體(抗體稀釋濃度1∶100) 購買于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗人ER單克隆抗體(抗體稀釋濃度1∶150)、兔抗人PR單克隆抗體(抗體稀釋濃度1∶125)、兔抗人C-erbB-2單克隆抗體(抗體稀釋濃度1∶175)，均購買于上海西寶生物科技有限公司。按試劑說明書步驟進(jìn)行免疫組化染色。

1.2.2免疫組化檢測S-P法檢測:①烤片，68℃，20min；②常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水；③阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O237℃孵育10min，PBS沖洗；④抗原修復(fù):置0.01M枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)中煮沸(95℃，15~20min)，自然冷卻20min以上，再用冷水沖洗，加快冷卻至室溫，PBS沖洗；⑤正常羊血清工作液封閉，37℃10min，傾去勿洗；⑥滴加一抗鼠抗人單克隆抗體(稀釋濃度1∶100) 4℃ 冰箱孵育過夜，PBS沖洗(用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照)；滴加生物素標(biāo)記多克隆羊抗兔、鼠二抗,37℃孵育30min,PBS沖洗;⑦滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30min,PBS沖洗;⑧DAB染色，自來水沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1ER及PR判定標(biāo)準(zhǔn)[5-6]ER、PR表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核內(nèi)。陽性細(xì)胞為細(xì)胞核內(nèi)有棕黃色顆粒。以視野內(nèi)陽性細(xì)胞數(shù)小于全部腫瘤細(xì)胞的20%為表達(dá)陰性(-)；超過全部腫瘤細(xì)胞的20%為表達(dá)陽性，其中陽性細(xì)胞占20%~50%或癌細(xì)胞內(nèi)顆粒染色為淡黃色為弱陽性(+)，陽性細(xì)胞>50%或癌細(xì)胞內(nèi)顆粒染色為深棕黃色為陽性(++)。

1.3.2EGFR判定標(biāo)準(zhǔn)[7]EGFR陽性物質(zhì)定位于細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，0級：無細(xì)胞棕黃色染色；1級：5%～20%腫瘤細(xì)胞膜或胞質(zhì)呈弱棕黃染色；2級：20%～50%腫瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈弱到中棕黃染色；3級：50%～75%腫瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)呈中到強(qiáng)或強(qiáng)的陽性著色。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SPSS l7.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1EGFR在乳腺癌組織中的表達(dá)情況本組144例乳腺癌組織中EGFR(+)表達(dá)率為38.2%(55/144)，見表1。乳腺癌組織中EGFR表達(dá)情況，見圖 1，圖2。

2.2乳腺癌組織中EGFR表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系①EGFR在乳腺癌中的表達(dá)與患者年齡、組織學(xué)分級和淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。②EGFR的表達(dá)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無關(guān)，但淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移<4枚與淋巴結(jié)≥4枚的患者間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量的增加，其陽性表達(dá)率相應(yīng)增高。③乳腺癌患者不同組織學(xué)分級的EGFR表達(dá)情況為I級(11.9%)、Ⅱ級(36.4%)、Ⅲ級(51.7%)，其中I級和II級的EGFR表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而Ⅱ與Ⅲ級的EGFR表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。

表1　乳腺癌組織中EGFR表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

注①EGFR的表達(dá)在組織學(xué)分級I與Ⅱ、II與III之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；但在組織學(xué)分級I與III,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。注②EGFR的表達(dá)與患者淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性，但是在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移<4枚與淋巴結(jié)≥4枚的患者間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。注③HER2(-)與HER2(+)、HER2(++)與HER2(+++)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但HER2(-)與HER2(++)、HER2(-)與HER2(+++)、HER2(+)與HER2(+++)之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

圖1　乳腺癌組織中EGFR強(qiáng)陽性表達(dá) (SP×200)

圖2　乳腺癌組織中EGFR弱陽性細(xì)胞表達(dá)(SP×200)

2.3EGFR表達(dá)與ER、PR和HER2的關(guān)系EGFR的表達(dá)與ER、PR結(jié)果之間比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但在ER(-)、PR(-)的患者中，EGFR的陽性表達(dá)率較低；EGFR在HER2(-)與HER2(+)、HER2(++)與HER2(+++)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)，但HER2(-)與HER2(++)、HER2(-)與HER2(+++)、HER2(+)與HER2(+++)之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。EGFR在HER2強(qiáng)陽性乳腺癌患者中的表達(dá)明顯高于HER2弱陽性患者，見表1。

3　討論

EGFR也叫HER1，位于7q11．13，包含26個外顯子，其表達(dá)產(chǎn)物是一種相對分子質(zhì)量為170×103的連接糖蛋白，是與大多數(shù)上皮實(shí)體腫瘤密切相關(guān)的一種跨膜糖蛋白。廣泛分布于哺乳動物的上皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞等，其結(jié)構(gòu)包括細(xì)胞外區(qū)、疏水跨膜區(qū)和胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)。研究發(fā)現(xiàn)EGFR酪氨酸磷酸化過表達(dá)與33%~50%的人類表皮腫瘤相關(guān)[8]。尤其是對EGFR在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌中高表達(dá)的研究，使我們對腫瘤生物學(xué)特性和行為進(jìn)一步深入了解，靶向藥物治療已為抗腫瘤治療開辟嶄新領(lǐng)域。

本研究中EGFR在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移<4枚與淋巴結(jié)≥4枚的患者之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)量的增加，其陽性表達(dá)率相應(yīng)增高，進(jìn)一步證明EGFR過表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及病理類型密切相關(guān)。但EGFR的表達(dá)與乳腺癌腋窩淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),與鄧再興等[3]研究結(jié)果不盡相同，可能與本組病例數(shù)較少及與本調(diào)查用的方法檢測受體以及陽性物的定點(diǎn)不同有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究分析。乳腺癌患者不同組織學(xué)分級的EGFR表達(dá)情況，其中Ⅰ級和Ⅲ級的EGFR表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而Ⅱ與Ⅲ級的EGFR表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)，但是隨著組織學(xué)分級的升高，EGFR的陽性表達(dá)率逐漸升高，說明EGFR表達(dá)與腫瘤分化關(guān)系密切，即EGFR過度表達(dá)的腫瘤細(xì)胞分化差，有更強(qiáng)的分裂增殖能力，易發(fā)生轉(zhuǎn)移。鄧再興研究結(jié)果顯示浸潤性乳腺癌中有41.1%表達(dá)EGFR，且EGFR表達(dá)隨組織學(xué)分級升高而升高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，EGFR表達(dá)提示患者腫瘤惡性度高、預(yù)后不良，本研究與此基本一致。

EGFR家族在乳腺癌中存在高表達(dá)，有關(guān)文獻(xiàn)報道[9]乳腺癌細(xì)胞系(MDA-68)中有EGFR基因擴(kuò)增，其細(xì)胞膜上有高水平的EGFR表達(dá)，乳腺癌細(xì)胞常存在EGFR/HER2的高表達(dá)和(或)雌激素受體陽性，本研究發(fā)現(xiàn)EGFR在HER2陰性與HER2陽性之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，且EGFR在HER2強(qiáng)陽性乳腺癌患者中的表達(dá)明顯高于HER2弱陽性患者，進(jìn)一步證明EGFR在浸潤性和分化差的腫瘤中表達(dá)高，與本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果相一致。Spyrator F等[10]研究結(jié)果表明：乳腺癌表達(dá)EGFR陽性的病人預(yù)后差，在淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移者，預(yù)后不良。另外在淋巴結(jié)尚未出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，而EGFR測定為陽性結(jié)果者,同樣預(yù)后不良,生存期短。這一結(jié)果對臨床治療有很大啟示，即對于病理分化差，尤其EGFR高表達(dá)的乳腺癌，即使在術(shù)前或手術(shù)中未發(fā)現(xiàn)腋窩淋巴結(jié)腫大，也應(yīng)做嚴(yán)格的腋窩組織切除，而且術(shù)后應(yīng)給予局部放療，以預(yù)防轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，越來越多的研究證實(shí)乳腺癌預(yù)后與許多分子標(biāo)志物密切相關(guān)。在臨床上，檢測ER、PR、HER2、EGFR的表達(dá)情況，可以較準(zhǔn)確指導(dǎo)臨床治療及預(yù)測患者預(yù)后，為乳腺癌的臨床治療、預(yù)后判斷和個體化治療提供重要依據(jù)，但目前監(jiān)測乳腺癌樣本中EGFR水平的方法主要是傳統(tǒng)的免疫組化，這種方法容易受多因素干擾，敏感性不穩(wěn)定，EGFR與乳腺癌臨床病理特征之間的研究結(jié)果在不同的報告中可能存在差異甚至相反的結(jié)果，有待進(jìn)一步深入研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]儲大同.腫瘤生物治療的新熱點(diǎn)—細(xì)胞、分子靶向性藥物的發(fā)展[J].中國新藥雜志，2002，11(4)：285-288.

[2]Siziopikou Kp,Cobleigh M.The basal subtype of breast carcinomas may represent the group Of breast tumors that could benefit from EGFR-targeted therapies[J].Breast,2007,16(1)：104-107.

[3]鄧再興，俞文菊，朱凱，等.乳腺癌組織cK5，6與EGFR表達(dá)及其臨床意義的研究[J].中華腫瘤防治雜志,2008，15(19)：1477-1480.

[4]Sainsbury J R,Nicholson S,Augus B，et al.Epidermal growth factor receptor status of Histological sub—types of breast cancer[J].Br cancer,1988,58(4):458-460.

[5]Harvey JM，Clark GM，Osborne CK，et al.Estrogen receptor status by immunohistochemistry is superior to the ligand-binding assay for predicting response to adjuvant endocrine Therapy in breast cancer[J].J Cfin Oncol，1999，17(5)：1474-1481.

[6]《乳腺癌HER2檢測指南》編寫組.乳腺癌HER2檢測指南[J].中華病理學(xué)雜志，2006，35(10)：631-633.

[7]許良中，楊文濤．免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中國癌癥雜志，1996(6)：229-231.

[8]Fruehauf J.EGFR Function and detection in cancer therapy[J].J Exp Their oncol,2006,5(3):231-246.

[9] Formento JL, Francoual M, Formento P,et al.EGFR assay：validation of a single point method And application to breast cancer[J].Breast cancer Res Trert,1991,17(3):211-219.

[10] Spyratos F,Delarue JC,Andrieuc,et al.epidermal growth factor receptors and prognosis in primary, breast cancer[J].Breast cancer Res Treat，1990,17(2)：83-89.

EGFR Expression in Breast Cancer Tissue and Clinicopathological Characteristics

WANG Rui-ping

(ShanxiUniversityofChineseMedicine,Xianyang712046,China)

【Abstract】Objective To investigate EGFR distribution characteristic in the breast Cancer and its relationship with the breast cancer age, histological grad, with or without lymph node metastasis, estrogen and progesterone receptor so as to provide an important basis on diagnosis, clinical treatment and prognosis of the breast cancer.Methods Material taking and eosin staining, detect the expression of EGFR in 144 cases of breast cancer with the method of immunohistochemistry. Analyze the expression of EGFR in breast cancer tissue.Results ①The positive rate of EGFR is 38.2% in 144 breast cancer tissues,infiltrating ductal carcinoma 102 cases, invasive lobular carcinoma 26 cases. ②The relationship between the expression of EGFR menopause，histological grade,with or without lymph node metastasis,pathological grade Ⅰ and Ⅱ,Ⅱ and Ⅲ are not statistically significant (P>0.05),but the comparison of histological grade Ⅰ and Ⅲ,lymph node metastasis is less than 4 and greater than or equal to 4 significant differences(P<0.05).③There is no difference(P>0.05) in the comparison between EGFR expression on ER, PR results but in the ER (-), PR (-) of the patients, positive expression rate of EGFR is low; there was no statistically significant difference (P>0.05) in HER2 (-) and HER2 (+), HER2 (++) and HER2 (+++) expression,but in HER2 (-) and HER2 (++),HER2 (-) and HER2 (+++),HER2 (+) and HER2 (+++),statistically significant difference (P<0.05).Conclusion ①The expressions of EGFR are not related to ER and PR status.The expressions of EGFR in HER2 high positive breast cancer are more than in the negative breast cancer. That suggests the expression of EGFR is correlated to the invasion, metastasis and prognosis of breast cancer.②lymph node metastasis is less than 4 and greater than or equal to 4 significant differences(P<0.05).

【Key words】breast cancer; epidermal growth factor; immunohistochemical

[收稿日期2014-06-22]

【中圖分類號】R737.9

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1008-8164(2014)03-0005-04

作者簡介王瑞平(1986- )，女，河南周口人，碩士在讀，研究方向：腺體腫瘤基礎(chǔ)與臨床。