鄭迎春，曹玉芬*，李 靜，田路明，董星光，張 瑩，齊 丹，常耀軍

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所，農(nóng)業(yè)部果品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（興城），遼寧 興城 125100）

梨葉多酚提取的正交試驗(yàn)優(yōu)化及其成分測(cè)定

鄭迎春，曹玉芬*，李 靜，田路明，董星光，張 瑩，齊 丹，常耀軍

（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所，農(nóng)業(yè)部果品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室（興城），遼寧 興城 125100）

以早酥梨成熟葉片為研究對(duì)象，考察超聲時(shí)間、料液比、溶劑種類3 個(gè)因素對(duì)梨葉多酚提取效果的影響，以優(yōu)化梨葉片多酚提取工藝，并采用超高效液相色譜-光電二極管陣列技術(shù)，測(cè)定梨葉片多酚物質(zhì)組成和含量。結(jié)果表明：梨葉片中熊果苷最佳提取條件是：采用70%甲醇溶液提取溶劑、超聲（超聲功率500 W）輔助提取2 次、每次超聲時(shí)間30 min、料液比1∶150 （g/mL）；梨葉片中咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類的最佳提取條件均是：超聲（超聲功率500 W）輔助提取2 次、每次超聲時(shí)間25 min、采用70%甲醇溶液提取溶劑、料液比1∶125 （g/mL）。在優(yōu)化的提取條件下，梨葉中共檢測(cè)出10 種多酚物質(zhì)，其中熊果苷含量最高為7.934～36.854 mg/g，被檢測(cè)出的多酚物質(zhì)總含量高達(dá)17.852～61.149 mg/g，因此梨葉片可作為開發(fā)化妝品、保健品和藥品的優(yōu)質(zhì)天然材料。

早酥梨葉；超高效液相色譜；多酚；提??；成分

植物多酚物質(zhì)是植物體內(nèi)廣泛存在的一類重要次生代謝產(chǎn)物。在臨床方面應(yīng)用廣泛，主要表現(xiàn)在抗氧化、抗衰老[1]、抗癌、抗腫瘤[2]、抗炎、抗病毒[3]、抗心血管疾病[4]、預(yù)防糖尿病[5]、抗抑郁、保護(hù)神經(jīng)[6]、提高免疫力[7]等方面。在生物學(xué)功能方面，其可以調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)[8]、提高植物抗逆性[9-10]等。

梨是我國(guó)種植面積和產(chǎn)量?jī)H次于蘋果和柑橘的第三大水果。李時(shí)珍《本草綱目》中記載：“梨品甚多，俱為上品，可治百病。潤(rùn)肺涼心，消痰降火，解瘡毒酒毒”。梨果、葉等器官均可入藥[11]，梨的保健價(jià)值與其所含多酚物質(zhì)密切相關(guān)。對(duì)梨屬植物中多酚物質(zhì)研究相對(duì)較少，一般是對(duì)梨果實(shí)（尤其是梨皮）測(cè)定。果肉主要多酚物質(zhì)有18 種[12-13]；梨皮多酚物質(zhì)種類和含量相對(duì)較豐富，Lin等[14]檢測(cè)出53 種主要多酚物質(zhì)（34 種類黃酮和19 種羥甲基肉桂酸）；然而對(duì)梨葉中多酚物質(zhì)研究相對(duì)甚少，一般針對(duì)梨葉中含量較高的熊果苷和綠原酸等幾種多酚物質(zhì)的分析，而且研究對(duì)象主要是西洋梨葉片[9-10,15]，對(duì)東方梨葉片多酚物質(zhì)提取方法及組成和含量的研究報(bào)道更為罕見。早酥梨廣泛分布在我國(guó)的黑龍江、河北、甘肅、陜西和四川等地，其地域適應(yīng)性廣，因此本實(shí)驗(yàn)以早酥梨成熟葉片為原料，通過優(yōu)化提取條件，采用超高效液相色譜-光電二極管（ultra performance liquid chromatography coupled with photodiode array detector，UPLC-PDA）技術(shù)定量和定性分析梨葉片中多酚物質(zhì)，以期為梨葉片進(jìn)一步研究提供技術(shù)參考，為梨葉片保健功能的開發(fā)利用提供依據(jù)，為梨屬植物抗逆性研究積累數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

早酥梨成熟葉片（2013年7月25日采集）、早三花、南果梨、庫爾勒香梨和華酥的成熟葉片（2014年9月10日采集）均來自“國(guó)家果樹種質(zhì)興城梨、蘋果圃”，經(jīng)干燥粉粹在－20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

熊果苷、沒食子酸、原兒茶酸、新綠原酸、原花青素B1、DL-兒茶素、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、原花青素B2、丁香酸、表兒茶素、原花青素C1、楊蘚素、p-香豆酸、槲皮素-阿拉伯-葡糖苷、反式阿魏酸、蘆丁、槲皮素-3-半乳糖苷、槲皮素-3-葡糖苷、木犀草-7-O-葡糖苷、異綠原酸B、莰菲醇-3-O-蕓香糖苷、槲皮素-阿拉伯糖苷、異綠原酸A、水仙苷、異鼠李素-3-O-半乳糖苷、異鼠李素-3-O-葡糖苷、根皮苷、白藜蘆醇、肉桂酸、二水槲皮素、根皮素、芹菜素、山奈黃酮醇（純度均不小于98%） 美國(guó)Sigma公司；甲醇、乙醇、乙腈、甲酸等均為色譜純。

1.2 儀器與設(shè)備

Acquity H-class UPLC儀、Acquity UPLC HSS T3色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）、Oasis HBL 6 CC（200 mg）固相萃取小柱 美國(guó)Waters公司；0.22 μm濾膜 天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；DFT-50手提式中藥粉碎機(jī) 溫嶺市林大機(jī)械有限公司；CF16RXⅡ立式大容量高速離心機(jī) 日本日立公司；R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士Buchi公司；Mill-Q Direct8水純化系統(tǒng) 美國(guó)Millipore公司；SK-12TC超聲波清洗器 上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 梨葉片多酚物質(zhì)提取工藝流程

梨葉片→105 ℃殺青（抽真空）15 min→65 ℃干燥至恒質(zhì)量→研磨（200目）→稱樣（重復(fù)3 次）→加23 mL溶劑→室溫超聲（超聲功率為500 W[16]，下同）提取→離心（10 000 r/min）5 min→取上清液→加23 mL溶劑→室溫超聲提取→離心（10 000 r/min）5 min→定容至50 mL（稱為粗提液）→取5 mL粗提液→35 ℃旋蒸近干→過已用甲醇和水活化好的固相萃取小柱→用5 mL水洗固相萃取小柱2 次（除去葉綠素、糖和強(qiáng)極性化合物[17]）→用5 mL甲醇洗固相萃取小柱2次收集溶液→將收集液于35 ℃旋蒸近干→用甲醇定容至5 mL→過0.22 μm濾膜→UPLC測(cè)定。

1.3.2 梨葉片多酚含量的測(cè)定

采用福林酚（Folin-Ciocalteu）法[18]對(duì)粗提液進(jìn)行測(cè)定，以沒食子酸為基準(zhǔn)物質(zhì)，計(jì)算梨葉多酚含量?；貧w方程為y=0.012x－0.016 1，R2=0.993 3。

1.3.3 梨葉片多酚提取量的計(jì)算

式中：ρ為上樣液中多酚質(zhì)量濃度/（mg/mL）；V為粗提液體積/mL；N為稀釋倍數(shù)；m為梨葉片干質(zhì)量/g。

1.3.4 梨葉片多酚提取的單因素試驗(yàn)

選取超聲時(shí)間、料液比和溶劑種類為影響因素，進(jìn)行單因素試驗(yàn)，均設(shè)置3 次重復(fù)。

1.3.4.1 超聲時(shí)間對(duì)梨葉片多酚提取量的影響

采用不同的超聲時(shí)間15、30、60、90 min（第1次超聲結(jié)束后，離心取上清液，加適量提取劑立即進(jìn)行第2次超聲，此處為每次超聲時(shí)間），固定料液比1∶150（g/mL）、提取溶劑60%甲醇溶液，研究超聲時(shí)間對(duì)梨葉片多酚提取量的影響。

1.3.4.2 料液比對(duì)梨葉片多酚提取量的影響

采用不同的料液比1∶50、1∶100、1∶150、1∶200、1∶250（g/mL），固定超聲時(shí)間為1.3.4.1節(jié)確定的超聲時(shí)間，提取溶劑為60%甲醇溶液，研究料液比對(duì)梨葉片多酚提取量的影響。

1.3.4.3 溶劑種類對(duì)梨葉片多酚提取量的影響

采用20%、40%、60%、80%、100%（均為體積分?jǐn)?shù)）乙醇、甲醇溶液為提取劑，固定料液比為1.3.4.2節(jié)確定的料液比，超聲時(shí)間為1.3.4.1節(jié)確定的超聲時(shí)間，研究提取溶劑種類對(duì)梨葉片多酚提取量的影響。

1.3.5 梨葉片多酚提取的正交試驗(yàn)

在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L16（45）利用UPLC技術(shù)對(duì)梨葉片多酚物質(zhì)提取條件進(jìn)一步優(yōu)化，設(shè)置3 個(gè)因素超聲時(shí)間、料液比和溶劑種類（存在兩個(gè)空白列），每個(gè)因素設(shè)4 個(gè)水平，重復(fù)3 次，具體實(shí)施方案見表1。

表1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素及水平Table1 Factors and levels used in orthogonal array design

1.3.6 梨葉片多酚物質(zhì)的UPLC-PDA檢測(cè)

利用UPLC-PDA技術(shù)，采用Acquity UPLC HSS T3（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色譜柱，以0.5%甲酸溶液和乙腈分別為流動(dòng)相A和B[16]，在200～400 nm波長(zhǎng)處進(jìn)行光譜掃描，獲取280、320 nm和360 nm波長(zhǎng)處的色譜圖，柱溫為40 ℃，樣品溫度為10 ℃，流速為0.4 mL/min，梯度洗脫條件為：0～1 min，0～5% B；1～6 min，5%～15% B；6～16 min，15%～40% B；16～18 min，40%～50% B；18～19 min，50%～100% B；19～20 min，100% B；20～21 min，100%～0 B；21～30 min，0 B。對(duì)早酥、早三花、南果梨、庫爾勒香梨和華酥梨成熟葉片多酚物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 超聲時(shí)間對(duì)梨葉片多酚提取量的影響

圖1 超聲時(shí)間對(duì)多酚提取量的影響Fig.1 Effect of ultrasonication time on the extraction rate of polyphenols

如圖1所示，在15～60 min超聲時(shí)間范圍內(nèi)，多酚提取量隨超聲時(shí)間延長(zhǎng)而呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，60～90 min超聲時(shí)間范圍內(nèi)，多酚提取量反而有所下降。是由于開始隨著超聲時(shí)間延長(zhǎng)，多酚物質(zhì)充分溶解，繼續(xù)延長(zhǎng)超聲時(shí)間，超聲清洗器內(nèi)溫度升高使其發(fā)生降解、氧化等反應(yīng)[19]。超聲時(shí)間在30～60 min范圍內(nèi)時(shí)，多酚提取量增長(zhǎng)趨于平緩，因此選取最佳超聲時(shí)間為30 min。

2.1.2 料液比對(duì)梨葉片多酚提取量的影響

圖2 料液比對(duì)多酚提取量的影響Fig.2 Effect of leaf to solvent ratio on the extraction rate of polyphenols

如圖2所示，隨著溶劑用量增大，多酚提取量逐漸增加，當(dāng)達(dá)到1∶150（g/mL）后，多酚提取量增加幅度很小，提取溶劑用量過大，增加提取成本，從提取效果和經(jīng)濟(jì)綜合考慮，最佳料液比為1∶150 （g/mL）。

2.1.3 溶劑種類對(duì)梨葉片多酚提取量的影響

圖3 溶劑種類對(duì)多酚提取量的影響Fig.3 Effect of solvents on the extraction rate of polyphenols

如圖3所示，甲醇、乙醇體積分?jǐn)?shù)小于60%時(shí)，多酚提取量均隨著溶劑體積分?jǐn)?shù)增大而增加；甲醇在60%～80%范圍內(nèi)時(shí)，多酚提取量增長(zhǎng)趨于平緩，當(dāng)甲醇體積分?jǐn)?shù)高于80%時(shí)，多酚提取量有所下降，而乙醇體積分?jǐn)?shù)高于60%時(shí)，多酚提取量開始下降。可能是由于溶劑體積分?jǐn)?shù)低時(shí)，水比例高，水?dāng)嗔褮滏I的作用力不足以破壞多酚在植物體內(nèi)和其他物質(zhì)形成的氫鍵或疏水鍵，使多酚提取量低；當(dāng)溶劑體積分?jǐn)?shù)過高時(shí)，溶出較多醇溶性雜質(zhì)、色素和親脂性較強(qiáng)的成分，該物質(zhì)與多酚物質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)相同的溶劑分子[20]，也會(huì)導(dǎo)致多酚提取量降低。從提取效果、旋蒸速率（過固相萃取小柱前需旋蒸，甲醇沸點(diǎn)低，旋蒸速率快）和UPLC分離[17]綜合考慮，應(yīng)選擇60%甲醇溶液為提取劑；但從提取效果、溶劑毒性和經(jīng)濟(jì)成本綜合考慮，應(yīng)選擇60%乙醇溶液為提取劑。為綜合考察兩種溶劑的提取效果，正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)選取60%、70%的甲醇、乙醇溶液進(jìn)一步研究。

2.2 梨葉片多酚物質(zhì)提取條件的正交試驗(yàn)優(yōu)化

經(jīng)測(cè)定熊果苷、咖啡酰奎寧酸類（新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、異綠原酸A）和黃酮醇類（槲皮素-3-半乳糖苷、槲皮素-3-葡糖苷、蘆丁、木犀草-7-O-葡糖苷）是早酥梨葉中含量較多的3 類多酚物質(zhì)，所以正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)分熊果苷、咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類3 部分來研究梨葉多酚物質(zhì)的最佳提取條件（表2）。

表2結(jié)果表明，梨葉多酚物質(zhì)種類不同受各提取因素的影響程度有所不同。熊果苷提取量最重要因素是溶劑種類，而其他兩部分最重要因素是超聲時(shí)間，對(duì)3 部分影響最小因素均是料液比。甲醇比乙醇對(duì)于熊果苷提取效果好，而甲醇對(duì)咖啡酰奎寧酸類和黃酮醇類的提取效果沒有明顯提高，但70%甲醇溶液對(duì)3 部分的提取效果均最好。提取熊果苷相比咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類需要超聲時(shí)間更長(zhǎng)，分別是30 min和25 min。

梨葉片中熊果苷最佳提取條件為采用70%甲醇溶液提取溶劑、超聲輔助提取2次、每次超聲30 min、料液比1∶150 （g/mL），利用該條件提取梨葉熊果苷含量為39.031 mg/g；咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類最佳提取條件均為：超聲輔助提取2次、每次超聲25 min、采用70%甲醇溶液提取溶劑、料液比1∶125（g/mL），利用該條件提取梨葉咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類含量分別為19.651 mg/g和3.740 mg/g。

表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)L16（45）提取優(yōu)化結(jié)果Table2 Orthogonal array design L16(45) with experimental results

2.3 梨葉片多酚物質(zhì)的UPLC-PDA檢測(cè)結(jié)果

圖4 在280 nm波長(zhǎng)處的多酚物質(zhì)色譜圖Fig.4 Chromatograms of pear leaf polyphenols at 280 nm

采用與咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類相一致的提取條件（因咖啡酰奎寧酸類和黃酮醇類包含8種多酚物質(zhì)），按1.3.1節(jié)處理5 種梨葉樣品并進(jìn)行UPLC檢測(cè)。利用UPLC技術(shù)將35 種多酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行分離（圖4A），梨葉中檢測(cè)出10 種多酚物質(zhì)（圖4B）：熊果苷、新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、表兒茶素、蘆丁、槲皮素-3-半乳糖苷、槲皮素-3-葡糖苷、木犀草-7-O-葡糖苷、異綠原酸A，其干質(zhì)量含量見表3。梨葉片中被檢測(cè)出的多酚物質(zhì)總含量為17.852～61.149 mg/g，其中熊果苷含量最多，為7.934～36.854 mg/g。

表3 梨葉片多酚物質(zhì)組成與含量Table3 Contents of polyphenols present in pear leavesmg/g

3 結(jié) 論

通過對(duì)早酥梨葉不同種類的多酚物質(zhì)（熊果苷、咖啡酰奎寧酸類和黃酮醇類）的提取方法優(yōu)化，結(jié)果表明，影響熊果苷提取效果的關(guān)鍵因素為溶劑種類，而影響咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類提取效果的關(guān)鍵因素為超聲時(shí)間，表明多酚物質(zhì)種類不同受提取因素的影響程度不同，因此應(yīng)根據(jù)研究的梨葉多酚物質(zhì)的種類，選擇合適的提取條件：梨葉熊果苷最佳提取條件為采用70%甲醇溶液提取溶劑、超聲輔助提取2次、每次超聲30 min、料液比1∶150（g/mL）；梨葉咖啡?？鼘幩犷惡忘S酮醇類最佳提取條件均為超聲輔助提取2次、每次超聲25 min、采用70%甲醇溶液提取溶劑、料液比1∶125（g/mL）。提取條件的優(yōu)化為梨葉的進(jìn)一步研究提供了技術(shù)參考。利用UPLC檢測(cè)出梨葉片中10 種多酚物質(zhì)，其中熊果苷含量最高。熊果苷具有美白、祛斑、護(hù)法、利尿、抗感染的功效[21-23]，因此梨葉片可作為開發(fā)化妝品、保健品和藥品的優(yōu)質(zhì)天然材料。

[1] 謝棒祥, 張敏紅. 生物類黃酮的生理功能及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào), 2003, 15(2): 11-15.

[2] CASSIDY C E, SETZER W N. Cancer-relevant biochemical targets of cytotoxic Lonchocarpus fl avonoids: a molecular docking analysis[J]. Journal of Molecular Modeling, 2010, 16(2): 311-315.

[3] 劉金霞, 鄧淑華, 楊賀松. 黃芩莖葉總黃酮的抗炎作用機(jī)制的研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào), 2002, 18(6): 713-714.

[4] CASSIDY A, RIMM E B, O’REILLY E J, et al. Dietary fl avonoids and risk of stroke in women[J]. Stroke, 2012, 43(4): 946-951.

[5] COSKUN O, KANTER M, KORKMAZ A. Quercetin, a flavonoid an-tioxidant, prevents and protects strepto-zotocin-induced oxidative stress and beta-cell damage in rat pancreas[J]. Pharmaceutical Research, 2004, 51(2): 117-123.

[6] PAULKE A, N?LDNER M, SCHUBERT Z M. John’s wort flavonoids and their metabolites show anti-depressant activity and accumulate in brain after multiple oral doses[J]. Die Pharmazie, 2008, 63(4): 296-302.

[7] CORVAZIER E, MACLOUF J. Interference of some fl avonoids and non-steroidal anti-inflammatory drugs with oxidative metabolism of arachidonic acid by human platelets and neutrophils[J]. Biochimica et Biophysica Acta, 1985, 835(2): 315-321.

[8] JAEOBS M, RUBERY P H. Naturally occurring auxin transport regulators[J]. Science, 1988, 241: 346-349.

[9] CARLO A, GUGLIELMO C, DIETER T. Composition of phenolic compounds in pear leaves as affected by genetics, ontogenesis and the environment[J]. Scientia Horticulturae, 2006, 109(2): 130-137.

[10] YASEMIN G, ADALET M, RUHINAZ G. Leaf phenolic content of pear cultivars resistant or susceptible to fire blight[J]. Scientia Horticulturae, 2005, 105(2): 213-221.

[11] 董忠義, 曉彤. 梨的藥用功效[J]. 綠化與生活, 1994, 4(2): 15-16.

[12] SCHIEBER A, KELLER P, CARLE R. Determination of phenolic acids and flavonoids of apple and pear by high-performance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatography A, 2001, 910(2): 265-273.

[13] SALTA J, MARTINS A, SANTOS R G, et al. Phenolic composition and antioxidant activity of Rocha pear and other pear cultivars: a comparative study[J]. Journal of Functional Foods, 2010, 2(2): 153-157.

[14] LIN L Z, HARNLY J M. Phenolic compounds and chromatographic profilesof pear skins (Pyrus spp.)[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, 56(19): 9094-9101.

[15] MATEJA C, FRANCI S, METKA H. Bending affects phenolic content of William pear leaves[J]. Acta Agriculturae Scandinavica, Section B-Plant Soil Science, 2007, 57(2): 187-192.

[16] 王臨賓. 超聲波輔助提取蘋果葉多酚及其體外抗氧化性研究[D]. 楊凌: 西北農(nóng)林科技大學(xué), 2010.

[17] SHA Chen, WU Benhong, FANG Jinbao, et al. Analysis of fl avonoids from lotus (Nelumbo nucifera) leaves using high performance liquid chromatography/photodiode array detector tandem electrospray ionization mass spectrometry and an extraction method optimized by orthogonal design[J]. Journal of Chromatography A, 2012, 12(27): 145-153.

[18] 李靜, 聶繼云, 李海飛, 等. Folin-酚法測(cè)定水果及其制品中總多酚含量的條件[J]. 果樹學(xué)報(bào), 2008, 25(1): 126-131.

[19] JORGE L, GARDEN T, DERMIS W. Effect of chemical modifi cation of algae carboxyl groups on metal ion binding[J]. Environment Science and Technology, 1990, 24(9): 1372-1378.

[20] MOON J, CHOI I. Development of natural meat-like fl avor based on Maillard reaction products[J]. Korean Journal for Food Science of Animal Resources, 2011, 31(1): 129-138.

[21] 高瑞英, 傅中, 慕丹, 等. 超聲乳化法構(gòu)建化妝品用熊果苷/透明質(zhì)酸-己二酸二酰肼交聯(lián)載藥微球[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥, 2010, 21(8): 1962-1965.

[22] 房軍, 杜順晶, 金銀龍. 熊果苷在化妝品中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]. 衛(wèi)生研究, 2009, 38(1): 111-113.

[23] 王慧琛, 王麗琴. 熊果苷的應(yīng)用及檢測(cè)研究進(jìn)展[J]. 天津藥學(xué), 2012, 24(4): 71-74.

Optimization of Extraction of Pear Leaf Polyphenols by Orthogonal Array Design and Polyphenol Composition Analysis

ZHENG Yingchun, CAO Yufen*, LI Jing, TIAN Luming, DONG Xingguang, ZHANG Ying, QI Dan, CHANG Yaojun
(Research Institute of Pomology, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Laboratory of Quality and Safety Risk Assessment for Fruit (Xingcheng), Ministry of Agriculture, Xingcheng 125100, China)

The ultrasonic-assisted extraction of polyphenols from mature leaves of Zaosu pear was optimized by investigating the effects of ultrasonic time, solid-to-solvent ratio and solvent type on extraction effi ciency. The components and contents of pear leaf polyphenols were determined by ultra performance liquid chromatography (UPLC) coupled with photodiode array detector (PDA). The results showed that the optimal conditions for arbutin extraction from pear leaves were found to be 30 min extraction carried out twice using 70% aqueous ethanol as the extraction solvent with a solid-to-solvent ratio of 1:150 (g/mL) at an ultrasonic power of 500 W, while the optimal conditions for the extraction of both caffeoylquinic acid and fl avonols were identical to those for arbutin except for an extraction time of 25 min and a solid-to-solvent ratio of 1:125 (g/mL). Ten polyphenols were detected in pear leaves under the optimized conditions with total contents ranging from 17.852 to 61.149 mg/g, and the contents of arbutin were 7.934-36.854 mg/g. Therefore, pear leaves can be used as an excellent natural material for developing cosmetics, health products and medicines.

Zaosu pear leaf; ultra performance liquid chromatography (UPLC); polyphenols; extraction; components

S661.2

A

1002-6630（2015）20-0032-05

10.7506/spkx1002-6630-201520006

2015-02-13

國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（梨）產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)（CARS-29-01）

鄭迎春（1986—），女，碩士，研究方向?yàn)楣?樹種質(zhì)資源。E-mail：zhengyingchunaiyy@163.com

*通信作者：曹玉芬（1965—），女，研究員，博士，研究方向?yàn)楣麡浞N質(zhì)資源。E-mail：yfcaas@263.net