施兆鴻 張艷亮 高權(quán)新 彭士明 張晨捷

(1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090;2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306)

云紋石斑魚(Epinehelus moara)隸屬硬骨魚綱(Osteichthyes)，輻鰭亞綱(Actinopterygii)，鱸形目(Perciformes)，科(Serranidae)，石斑魚屬(Epinephelus)，俗稱真油斑，為暖溫性戀礁魚類，廣泛分布于東海、南海以及臺(tái)灣沿海［1-2］。由于其生長(zhǎng)快，肉質(zhì)鮮美，養(yǎng)殖前景看好，當(dāng)前除福建、廣東、海南等地把云紋石斑魚被列為重點(diǎn)發(fā)展的養(yǎng)殖種類外，許多大型的工廠化循環(huán)水養(yǎng)殖企業(yè)也把此魚納入重要的養(yǎng)殖品種。但在高密度工廠化養(yǎng)殖的水體中，因殘餌和魚體排泄物的氨化作用會(huì)產(chǎn)生大量的氨氮［3］，一定濃度的氨氮可以對(duì)魚類產(chǎn)生脅迫，導(dǎo)致魚體的應(yīng)激反應(yīng)，出現(xiàn)攝食量減小、生長(zhǎng)緩慢、免疫力降低等，脅迫時(shí)間過(guò)長(zhǎng)甚至死亡。大多數(shù)硬骨魚類對(duì)氨氮都非常敏感，水體中氨氮濃度會(huì)導(dǎo)致血清皮質(zhì)醇(COR)含量的激增［4］，血液中葡萄糖(GLU)和乳酸(LD)含量的升高［5-7］。氨氮也影響魚類的機(jī)體抗氧化系統(tǒng)，使部分酶活力降低［8-9］，抗氧化物質(zhì)含量減少。有研究表明氨氮也是誘發(fā)養(yǎng)殖魚類患病的主要環(huán)境因子［10］。因此，研究血液中 COR、GLU、LD 含量以及各抗氧化指標(biāo)對(duì)魚類氨氮脅迫時(shí)的響應(yīng)具有理論意義。

維生素E是非酶抗氧化物質(zhì)中的重要組成成分，具有抗氧化作用，可以保護(hù)細(xì)胞膜、亞細(xì)胞膜不被氧化［11］;在生理方面，維生素E與甲狀腺機(jī)能、血紅素合成以及組織內(nèi)核酸代謝、抗壞血酸合成和氧化磷酸化等代謝過(guò)程都存在一定的關(guān)系［11］，還可有效地增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物抗擁擠脅迫［12］、抗亞硝酸鹽和酸應(yīng)激能力［13-14］，近年來(lái)通過(guò)在飼料中添加維生素E水平來(lái)提高水產(chǎn)動(dòng)物的抗氧化和抗應(yīng)激能力正成為研究熱點(diǎn)。本試驗(yàn)通過(guò)在飼料中添加維生素E來(lái)補(bǔ)充非酶類的抗氧化物質(zhì)，以提高云紋石斑魚幼魚的抗氧化和抗應(yīng)激能力;并在養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后用氨氮脅迫來(lái)驗(yàn)證飼料中維生素E水平對(duì)抗氧化和抗應(yīng)激能力的影響，以期為云紋石斑魚幼魚養(yǎng)殖過(guò)程中飼料中維生素E的添加量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)用魚及飼料制備

云紋石斑魚幼魚在福建東山島培育，幼魚長(zhǎng)到(15.6±0.2)g時(shí)開始試驗(yàn)。試驗(yàn)開始前在養(yǎng)殖池中挑選體表無(wú)傷、體色正常的云紋石斑魚作為試驗(yàn)對(duì)象。

以維生素E醋酸酯(羅氏公司提供)作為維生素E添加源，以微晶纖維素為填充劑，使各試驗(yàn)飼料其他營(yíng)養(yǎng)水平保持一致，其中復(fù)合維生素、復(fù)合礦物質(zhì)、誘食劑參照文獻(xiàn)［15］推薦的石斑魚營(yíng)養(yǎng)需求添加，略作修改。所有飼料經(jīng)過(guò)60目篩，且充分混勻后用OMAS的TS-12型顆粒飼料機(jī)制成直徑為2 mm的顆粒飼料，置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。試?yàn)飼料中的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分、水分含量分別采用GB/T 6432—1994、GB/T 643—1994、GB/T 6438—1992、GB/T 6435—1986 中方法進(jìn)行測(cè)定，試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets %

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)5個(gè)飼料維生素 E水平，即0、35、80、125和170 mg/kg，分別用A、B、C、D和E組表示。采用高效液相色譜法實(shí)測(cè)飼料中維生素E有效水平依次為 11.09、47.52、91.38、134.57、178.92 mg/kg，每個(gè)維生素E水平設(shè)3個(gè)重復(fù)(網(wǎng)箱)。按20尾/網(wǎng)箱的密度將幼魚隨機(jī)放入直徑1.0 m、深度0.8 m的塑料網(wǎng)箱中，網(wǎng)箱置于30 m3的圓形水泥池中。養(yǎng)殖試驗(yàn)開始前先進(jìn)行14 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)，適應(yīng)期間所有網(wǎng)箱中的云紋石斑魚統(tǒng)一飼喂農(nóng)好飼料有限公司生產(chǎn)的石斑魚飼料。適應(yīng)期后仍在塑料網(wǎng)箱中開始的正式試驗(yàn)。試驗(yàn)期間對(duì)云紋石斑魚經(jīng)行飽食投喂，具體方法為飼養(yǎng)試驗(yàn)前4周每天按照魚體總重的3.0%投喂，后4周按魚體總重的2.0%投喂。每天投喂2次(09:30、16:30)。試驗(yàn)用水經(jīng)暗沉淀、砂濾處理，24 h不間斷充氣，水溫為(27.8±0.5)℃，pH 為7.8±0.3，溶氧量 7～8 mg/L，適應(yīng)期和正式試驗(yàn)期換水量為50%/d，養(yǎng)殖周期為56 d。

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，停止投喂飼料24 h后進(jìn)行氨氮脅迫試驗(yàn)。參照鄭樂(lè)云［16］試驗(yàn)中所得到的氨氮對(duì)平均體長(zhǎng)10.5 cm斜帶石斑魚苗的24 h半致死濃度(LC50)58.6 mg/L，設(shè)置本試驗(yàn)氨氮脅迫濃度為58.6 mg/L。從每個(gè)網(wǎng)箱中隨機(jī)撈取5尾云紋石斑魚，分別放入裝有157 L清潔海水的水桶中適應(yīng)1 h，然后向每個(gè)水桶中緩慢倒入用氯化銨(NH4Cl)配制好的117.2 mg/L氨氮溶液157 L，總水體達(dá)到314 L，使水體氨氮濃度達(dá)到設(shè)置濃度，6 h后脅迫結(jié)束。

1.3 樣品采集

在養(yǎng)殖試驗(yàn)前及氨氮脅迫前后均停食24 h，從每個(gè)網(wǎng)箱中隨機(jī)撈取5尾魚放入盛有0.15 mL/L丁香油溶液中短暫麻醉;氨氮脅迫結(jié)束后為避免撈取應(yīng)激，直接滴入丁香油至水桶中進(jìn)行短暫麻醉。將養(yǎng)殖試驗(yàn)前及氨氮脅迫前后取樣的魚麻醉后隨即在準(zhǔn)備好的冰盤上用1 mL無(wú)菌注射器尾靜脈采血至無(wú)菌離心管中，4℃靜止12 h，4 000 r/min離心15 min，取其上清液，-70℃保存?zhèn)溆茫糜跍y(cè)定抗應(yīng)激反應(yīng)和抗氧化的各項(xiàng)指標(biāo)。取血后的魚在冰盤上解剖取肝臟，剔除其表面的結(jié)締組織附著物，搗碎、勻漿、離心，制備上清液，置于-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 指標(biāo)測(cè)定

GLU、LD和COR含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，測(cè)定方法參見說(shuō)明書。

超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶活力(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力，總抗氧化能力(T-AOC)以及丙二醛(MDA)含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，測(cè)定方法參見說(shuō)明書。

1.5 數(shù)據(jù)處理

所得數(shù)據(jù)用SPSS 19軟件處理。對(duì)不同維生素E水平飼喂過(guò)的幼魚和氨氮脅迫后的幼魚各檢測(cè)指標(biāo)進(jìn)行單因素方差分析。當(dāng)顯著差異(P＜0.05)時(shí)采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較;用t檢測(cè)檢驗(yàn)氨氮脅迫前后的變化;用Excel進(jìn)行圖形處理。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 氨氮脅迫下血清GLU含量的變化

由圖1可知，不同維生素E水平的飼料飼喂云紋石斑魚幼魚56 d后，血清中GLU含量在飼喂前后均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。但氨氮脅迫6 h后，除E組外其他各組血清中GLU含量在脅迫前后均有顯著差異(P＜0.05)，且各組中脅迫前后的差異程度差異較大，A組從脅迫前的(8.792±0.781)mmol/L上 升 至 脅 迫 后 的 (51.390 ±1.358)mmol/L，B 組也從脅迫前的 (8.699 ±0.675)mmol/L上 升 至 脅 迫 后 的 (19.110 ±1.285)mmol/L;而 C～E組脅迫前平均為8.58 mmol/L，脅迫后平均為 11.44 mmol/L。氨氮脅迫后A組血清中GLU含量達(dá)到了C～E組的4.6倍之多，B組血清中GLU含量也超過(guò)了C～E組的2.7倍，差異顯著(P ＜0.05);而 C、D 和E 組之間則無(wú)顯著差異(P ＞0.05)。

2.2 氨氮脅迫下血清LD含量的變化

由圖2可知，不同維生素E水平的飼料飼喂云紋石斑魚幼魚56 d后，血清中LD含量在飼喂前后除C組之外均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。在氨氮脅迫6 h后，A和B組血清中LD含量在脅迫前后有顯著差異(P＜0.05)。脅迫后血清中LD含量與飼料中維生素E水平呈反比，并在飼料中維生素E水平達(dá)到47.52 mg/kg之后血清中LD含量維持穩(wěn)定。

圖1 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清GLU含量的變化Fig.1 Serum GLU content change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

圖2 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清LD含量的變化Fig.2 Serum LD content change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

2.3 氨氮脅迫下血清COR含量的變化

由圖3可知，不同維生素E水平的飼料飼喂云紋石斑魚幼魚56 d后，血清中COR含量比飼喂前均有升高，且都達(dá)到了顯著水平(P＜0.05)，并隨飼料中維生素E水平的升高而降低。氨氮脅迫之后，各組血清中COR含量都有升高的趨勢(shì)，與脅迫前血清中COR含量的差異都達(dá)到了顯著水平;氨氮脅迫之后，血清中COR含量表現(xiàn)為A組顯著高于B～E組(P＜0.05)，B～E組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

圖3 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清COR含量的變化Fig.3 Serum COR content change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

2.4 氨氮脅迫下抗氧化指標(biāo)的變化

由圖4可知，不同維生素E水平飼料飼喂云紋石斑魚幼魚56 d，肝臟和血清中SOD活力除B組外均有顯著差異(P＜0.05)，其中飼料中維生素E水平在11.09 mg/kg時(shí)肝臟和血清中SOD活力顯著下降(P＜0.05)，而飼料中維生素E水平等于或超過(guò)91.38 mg/kg時(shí)肝臟和血清中SOD活力顯著上升(P＜0.05)。氨氮脅迫后除A組肝臟和血清中SOD活力均顯著下降(P＜0.05)外，其他各組差異均不顯著(P＞0.05)。結(jié)果表明，在本試驗(yàn)條件下，只有當(dāng)飼料中維生素E水平在11.09 mg/kg時(shí)，飼喂56 d后再經(jīng)氨氮脅迫，體內(nèi)的SOD活力會(huì)顯著下降;而當(dāng)飼料中維生素E水平達(dá)到47.52 mg/kg后，飼喂56 d后再氨氮脅迫對(duì)體內(nèi)的SOD活力不產(chǎn)生顯著影響。

由圖5可知，不同維生素E水平飼料飼喂56 d后，A和B組血清中CAT活力呈顯著下降(P＜0.05)，C～E組血清中CAT活力差異不顯著(P＞0.05);A組肝臟中 CAT活力也顯著下降(P＜0.05)，但 C ～E 組則呈顯著上升(P ＜0.05)。氨氮脅迫后A、B組血清中CAT活力變化趨勢(shì)與飼喂前后的變化趨勢(shì)相似，且與脅迫前差異顯著(P＜0.05);C～E組肝臟中CAT活力都出現(xiàn)下降，但無(wú)規(guī)律性變化。結(jié)果表明，低維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚，在飼喂后和脅迫后血清中CAT活力均有下降的趨勢(shì)，當(dāng)飼料中維生素E水平達(dá)到91.38 mg/kg后，不論飼喂后還是脅迫后，血清中CAT活力變化都不顯著。肝臟中CAT活力在低維生素E水平飼料飼喂時(shí)與血清中的結(jié)果相似，但在高維生素E水平飼料飼喂時(shí)則呈顯著性上升，脅迫后出現(xiàn)下降。

圖4 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清和肝臟中SOD活力的變化Fig.4 Serum and liver SOD activity change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

圖5 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清和肝臟中CAT活力的變化Fig.5 Serum and liver CAT activity change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

由圖6可知，MDA含量在血清和肝臟中都表現(xiàn)出相似的規(guī)律性，即飼料中維生素E水平為11.09和47.52 mg/kg時(shí)，飼喂后以及氨氮脅迫后均呈顯著上升(P＜0.05);飼料中維生素E水平達(dá)到91.38 mg/kg后，血清和肝臟中MDA含量在氨氮脅迫后沒(méi)有產(chǎn)生顯著變化(P＞0.05)。

圖6 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清和肝臟中MDA含量的變化Fig.6 Serum and liver MDA content change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

由圖7可知，飼喂后血清中GSH-Px活力與飼料中維生素E水平為同向遞增，但在飼料維生素E水平為47.52 mg/kg時(shí)出現(xiàn)拐點(diǎn)，GSH-Px活力雖然仍隨飼料維生素E水平遞增而增加，但各組間差異不顯著(P＜0.05)。在飼料維生素E水平為11.09和47.52 mg/kg時(shí)，飼喂后和氨氮脅迫后血清中GSH-Px活力均顯著下降(P＜0.05);而在飼料維生素E水平等于或超過(guò)91.38 mg/kg時(shí)，飼喂后血清中GSH-Px活力均有大幅度上升(P＜0.05)，氨氮脅迫后血清中GSH-Px活力則無(wú)顯著變化(P＞0.05)。

圖7 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清GSH-Px活力的變化Fig.7 Serum GSH-Px activity change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

由圖8可知，在飼料維生素 E水平為11.09 mg/kg時(shí)，血清T-AOC在飼喂后和脅迫后均呈顯著下降(P＜0.05);但在飼料維生素E水平等于或超過(guò)47.52 mg/kg時(shí)，血清T-AOC在飼喂后則呈現(xiàn)出增高的態(tài)勢(shì)，并且各組都達(dá)到顯著差異(P＜0.05)，而氨氮脅迫后又都出現(xiàn)下降的趨勢(shì)，其中C、D組的差異還達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。

3 討論

3.1 飼料維生素E水平對(duì)氨氮脅迫后云紋石斑魚幼魚應(yīng)激反應(yīng)的影響

氨氮是指水中以游離氨(NH3)和銨離子(NH+4)形式存在的氮，其中對(duì)魚類起危害作用主要是游離氨(非離子銨)。關(guān)于游離氨對(duì)魚類的致毒濃度［17-19］以及毒害機(jī)理［20-21］方面的研究已有很多報(bào)道。已有的研究認(rèn)為，游離氨為親脂性分子，能夠穿透脂質(zhì)性生物膜的疏水性微孔進(jìn)入生物體內(nèi)，從而對(duì)水生生物的鰓表皮細(xì)胞造成損傷，降低魚的免疫力［22］。本試驗(yàn)中，不論在飼喂何種飼料維生素E水平飼料，受氨氮脅迫后血清COR含量與脅迫前相比均顯著升高，這一現(xiàn)象可能說(shuō)明了氨氮脅迫過(guò)程中水體中的游離氨進(jìn)入機(jī)體內(nèi)，使魚產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)。COR是一種由腎上腺產(chǎn)生的類激素，在應(yīng)激反應(yīng)時(shí)會(huì)大量產(chǎn)生，COR一般直接進(jìn)入血液不被貯存，因此血液中COR含量常可作為衡量魚所受應(yīng)激強(qiáng)度的指標(biāo)［23］。COR分泌能釋放來(lái)自肝臟的GLU，在應(yīng)激反應(yīng)中被輸送到血液里充當(dāng)能量使用，由于GLU是多種組織代謝的重要能源物質(zhì)，穩(wěn)定的血糖濃度對(duì)維持魚類正常生命活動(dòng)有著重要的作用。研究表明，應(yīng)激反應(yīng)可導(dǎo)致魚類血糖含量明顯升高［4，24］。從醫(yī)學(xué)上說(shuō)，LD 是一種肌肉在供氧不足的情況下通過(guò)糖酵解產(chǎn)生的疲勞物質(zhì)。Iversen等［5］在對(duì)大西洋鮭(Salmo salar)以及 Sckreek等［24］在對(duì)大鱗大麻哈魚(Oncorhynchus tshawytscha)的研究中都發(fā)現(xiàn)，環(huán)境脅迫均會(huì)導(dǎo)致魚體內(nèi)LD含量的升高。檢測(cè)血液中的GLU、LD和COR含量可提示機(jī)體受脅迫的程度［4，25］。本試驗(yàn)中，血清 GLU 和 LD 含量在脅迫前后隨飼料中維生素E水平的提高差異減小，在低維生素E水平(11.09 mg/kg)飼喂條件下脅迫后的血清GLU和LD含量分別達(dá)到了脅迫前的464%和277%;而當(dāng)飼料中維生素E水平達(dá)到91.38 mg/kg后，脅迫前后血清LD含量沒(méi)有顯著差異;血清GLU含量在維生素E水平達(dá)到178.92 mg/kg后脅迫前后才沒(méi)有顯著差異。這可以得出2個(gè)結(jié)論:一是不論飼料中維生素E水平多還是少，氨氮均可以引導(dǎo)魚體產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng);二是在本試驗(yàn)條件下，飼料中維生素E水平低于47.52 mg/kg時(shí)飼喂56 d后云紋石斑魚幼魚不能適應(yīng)氨氮脅迫，而當(dāng)飼料中維生素E水平大于91.38 mg/kg時(shí)，云紋石斑魚幼魚遭受氨氮脅迫后雖然也出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，但其程度明顯低于飼料中維生素E水平低時(shí)。這可能說(shuō)明了飼料中高水平的維生素E對(duì)提高云紋石斑魚幼魚的抗應(yīng)激能力起到了一定的作用。

3.2 飼料維生素 E水平對(duì)氨氮脅迫后云紋石斑魚幼魚抗氧化指標(biāo)的影響

魚體內(nèi)的抗氧化酶包括SOD、CAT和GSHPx等，另有一類非酶類抗氧化物如維生素E、維生素C、谷胱甘肽和有機(jī)曬等，由抗氧化酶和非酶類抗氧化物共同構(gòu)成抗氧化防御體系，對(duì)魚體進(jìn)行保護(hù)免受氧化傷害，同時(shí)與體內(nèi)產(chǎn)生的活性氧物質(zhì)之間達(dá)到一種平衡的狀態(tài)［26］。然而，此種狀態(tài)會(huì)因環(huán)境條件的改變而失去平衡，在體內(nèi)形成氧化脅迫對(duì)細(xì)胞造成傷害。本試驗(yàn)中，當(dāng)飼料中維生素E水平達(dá)到91.38 mg/kg后，飼喂56 d后可以顯著提高云紋石斑魚幼魚血清中SOD、CAT和GSH-Px的活力，并且在氨氮脅迫后這3種抗氧化酶活力與脅迫前差異并不顯著或下降幅度低于飼喂低維生素E水平飼料的A和B組。這說(shuō)明了飼料中維生素E水平達(dá)到或超過(guò)91.38 mg/kg時(shí)對(duì)提高云紋石斑魚幼魚的抗氧化能力具有顯著作用，并在本試驗(yàn)條件下有效地提高其抗應(yīng)激能力。MDA是脂質(zhì)被氧化后的終產(chǎn)物，機(jī)體內(nèi)MDA的含量顯示機(jī)體脂質(zhì)受活性氧、自由基氧化損害的程度。在青魚(Mylopharyngodon piceus)［3］、大菱鲆 (Scophthalmus maximus)［27］和 黃 顙 魚 (Pelteobagrus fulvidraco)［28］等品種的研究中均表明維生素E可以有效降低魚體內(nèi)的MDA含量，本試驗(yàn)的結(jié)果與上述報(bào)道相似。在飼料中維生素E水平達(dá)到或超過(guò)91.38 mg/kg時(shí)，飼喂56 d后云紋石斑魚幼魚血清MDA含量與飼喂前沒(méi)有顯著差異，而肝臟中MDA含量則顯著下降。由于MDA是組織中脂質(zhì)過(guò)氧化的最終產(chǎn)物，具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性［29］，而本試驗(yàn)氨氮脅迫前后的血清和肝臟中MDA含量并無(wú)顯著差異，可以說(shuō)明飼料中維生素E水平達(dá)到或超過(guò)91.38 mg/kg能有效提高云紋石斑魚幼魚的抗氧化能力。

圖8 不同維生素E水平飼料飼喂的云紋石斑魚幼魚氨氮脅迫前后血清T-AOC的變化Fig.8 Serum T-AOC change of juvenile Epinehelus moara fed diets with different vitamin E levels before and after ammonia nitrogen stress

4 結(jié)論

根據(jù)應(yīng)激反應(yīng)和抗氧化指標(biāo)對(duì)氨氮脅迫響應(yīng)的綜合分析，云紋石斑魚幼魚飼料中維生素E水平達(dá)到或超過(guò)91.38 mg/kg能有效地提高抗應(yīng)激和抗氧化能力。

［1］ 朱元鼎.東海魚類志［M］.北京:科學(xué)出版社，1963:642.

［2］ 張永嘉.云紋石斑魚淋巴囊腫病的光鏡和電鏡研究［J］.海洋學(xué)報(bào)，1992，14(6):97-102.

［3］ 黃云，胡毅，文華，等.維生素E對(duì)青魚幼魚生長(zhǎng)、免疫及抗氨氮脅迫能力的影響［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2013，37(3):507-514.

［4］ 彭士明，施兆鴻，李杰，等.運(yùn)輸脅迫對(duì)銀鯧血清皮質(zhì)醇、血糖、組織中糖元及乳酸含量的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2011，35(6):831-837.

［5］ IVERSEN M，F(xiàn)INSTAD B，MCKINLEY R S，et al.Stress responses in Atlantic salmon(Salmo salar L.)smolts during commercial well boat transports，and effects on survival after transfer to sea［J］.Aquaculture，2005，243(1/2/3/4):373-382.

［6］ OLSEN Y A，EINARSDOTTIR I E，NILSSEN K J.Metomidate anaesthesia in Atlantic salmon，Salmo salar，prevents plasma cortisol increase during stress［J］.Aquaculture，1995，134(1/2):155-168.

［7］ 李愛(ài)華.擁擠脅迫對(duì)草魚血漿皮質(zhì)醇、血糖及肝臟中抗壞血酸含量的影響［J］.水生生物學(xué)報(bào)，1997，21(4):384-386.

［8］ ROMANO N，ZENG C S.Ontogenetic changes in tolerance to acute ammonia exposure and associated gill histological alterations during early juvenile development of the blue swimmer crab，Portunus pelagicus［J］.Aquaculture，2007，266(1/2/3/4):246-254.

［9］ CHING B，CHEW S F，WONG W P，et al.Environmental ammonia exposure induces oxidative stress in gills and brain of Boleophthalmus boddarti(mudskipper)［J］.Aquatic Toxicology，2009，95(3):203-212.

［10］ CHEN J C，CáRDENAS E C，KOU C T.Nitrogenous excretion in Macrobrachium rosenbergii at different pH levels［J］.Aquaculture，1996，144(1/2/3):155-164.

［11］ CARBALLO E C，TUAN PM，JANSSEN M，et al.Vitamin E(α-toeopherol)production by the marine microalgae Dunaliella tertiolecta and Tetraselmis suecica in batch cultivation［J］.Biomolecular Engineering，2003，20(4/5/6):139-147.

［12］ 王桂芹，牛小天，盧洪梅，等.飼料中添加VE和DHA對(duì)不同養(yǎng)殖密度建鯉生長(zhǎng)、攝食和分化的影響［J］.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32(5):548-554.

［13］ 高明輝.VC、VE對(duì)亞硝酸鹽脅迫下異育銀鯽血液指標(biāo)及抗氧化能力的影響［D］.碩士學(xué)位論文.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

［14］ 周顯青，謝孟峽，牛翠娟，等.維生素C和E合用對(duì)應(yīng)激和非應(yīng)激中華鱉幼鱉生長(zhǎng)、肝臟維生素C和E以及血清皮質(zhì)醇含量的影響［J］.動(dòng)物學(xué)報(bào)，2004，50(2):158-164.

［15］ 徐立紅，陳專，徐盈，等.用高效液相色譜法測(cè)定魚樣中的維生素 D3和 E［J］.水生生物學(xué)報(bào)，1994，18(2):192-193.

［16］ 鄭樂(lè)云.氨氮和亞硝酸鹽對(duì)斜帶石斑魚苗的急性毒性效應(yīng)［J］.海洋科學(xué)，2012，36(5):81-86.

［17］ 王侃，劉葒.非離子態(tài)氨及亞硝酸鹽對(duì)鱖魚苗的急性毒性試驗(yàn)［J］.淡水漁業(yè)，1996，26(3):7-10.

［18］ 陳瑞明.銨態(tài)氮和亞硝酸鹽氮對(duì)鱖魚苗的急性毒性試驗(yàn)［J］.水利漁業(yè)，1998(1):17-20.

［19］ RUYET J PL，GALLAND R，ROUX A L，et al.Chronic ammonia toxicity in juvenile turbot(Scophthalmus maximus)［J］.Aquaculture，1997，154(2):155-171.

［20］ 余瑞蘭，聶湘平，魏泰莉.分子氨和亞硝酸鹽對(duì)魚類的危害及其對(duì)策［J］.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，1999，6(3):73-77.

［21］ SAMPAIO L A，WASIELESKY W，MIRAND-FILHO K C.Effect of salinity on acute toxicity of ammonia and nitrite to juvenile Mugil platanus［J］.Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology，2002，68(5):668-674.

［22］ ARMSTRONG D A，CHIPPENDALE D，KNIGHT A.W.Interaction of ionized and unionized ammonia on short-term survival and growth of prawn larvae，Macrobrachium rosenbergii［J］.Biological Bulletin，1978，154(1):15-31.

［23］ HSIEH S L，CHEN Y N，KUO C M.Physiological responses，desaturase activity，and fatty acid composition in milkfish(Chanos chanos)under cold acclimation［J］.Aquaculture，2003，220(1/2/3/4):903-918.

［24］ SCKREEK C B，JONSSON L，F(xiàn)EIST G，et al.Conditioning improves performance of juvenile chinook salmon，Oncorhynchus tshawytscha，to transportation stress［J］.Aquaculture，1995，135(1/2/3):99-110.

［25］ SULIKOWSKI JA，F(xiàn)AIRCHILD EA，RENNELSN，et al.The effects of transport density on cortisol levels in juvenile winter flounder，Pseudopleuronectes americanus［J］.Journal of the World Aquaculture Society，2006，37(1):107-112.

［26］ 亢玉靜，郎明遠(yuǎn)，趙文.水生生物體內(nèi)抗氧化酶及其影響因素研究進(jìn)展［J］.微生物學(xué)雜志，2013，33(3):75-80.

［27］ 魏玉婷，王小潔，麥康森，等.飼料中的維生素E對(duì)大菱鲆幼魚生長(zhǎng)、脂肪過(guò)氧化及抗氧化能力的影響［J］.中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2011，41(6):45-50.

［28］ 陳騁，熊晶，左永松，等.飼料中不同維生素E添加量對(duì)黃顙魚幼魚生長(zhǎng)性能及免疫功能的影響［J］.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2010，17(3):521-526.

［29］ PENG S，CHEN L，QIN JG，et al.Effects of dietary vitamin E supplementation on growth performance，lipid peroxidation and tissue fatty acid composition of black sea bream(Acanthopagrus schlegeli)fed oxidized fish oil［J］.Aquaculture Nutrition，2009，15(3):329-337.