葉珩 錢(qián)科卿 黃薇

·臨床研究與應(yīng)用·

肺癌患者血清TK1水平與臨床病理學(xué)特點(diǎn)及預(yù)后關(guān)系的研究

葉珩 錢(qián)科卿 黃薇

目的：探討細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1（TK1）在肺癌患者血清中的陽(yáng)性率及其與肺癌臨床病理學(xué)特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系。方法：檢測(cè)75例肺癌患者血清TK1水平，同時(shí)選取56例健康體檢者作為對(duì)照。比較分析血清TK1水平與肺癌臨床病理學(xué)特點(diǎn)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果：肺癌患者血清TK1的陽(yáng)性率（33.3%）高于健康對(duì)照組（12.5%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者血清TK1陽(yáng)性率（53.8%）明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者（22.4%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。TNM分期為晚期的肺癌患者血清TK1陽(yáng)性率（54.5%）高于TNM分期早期的患者（16.7%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。肺癌患者血清中TK1的陽(yáng)性率與患者性別、是否吸煙、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肺癌的病理類(lèi)型無(wú)相關(guān)性。血清TK1陰性患者的2年生存率（78%）顯著高于TK1陽(yáng)性患者（28%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。結(jié)論：血清TK1與肺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)，是肺癌患者預(yù)后不佳的標(biāo)志之一。

肺癌 細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1 預(yù)后

肺癌在全世界的發(fā)病率和死亡率均居于首位［1］。肺癌起病隱匿，臨床上往往缺乏特異性表現(xiàn)，血清學(xué)檢查也無(wú)高度特異性的腫瘤標(biāo)志物［2］，70%以上的患者確診時(shí)已是晚期。目前，肺癌的治療效果尚不理想，肺癌的5年生存率僅17%左右［3］。早期診斷是提高臨床療效和降低病死率的關(guān)鍵。細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1（thymidine kinase 1，TK1）與細(xì)胞的增殖有關(guān)，在DNA的合成中將脫氧胸苷轉(zhuǎn)換為胸苷酸，是嘧啶補(bǔ)救途徑的關(guān)鍵酶［4］。在腫瘤細(xì)胞中，這種高水平的TK1從S期可以持續(xù)到M期，其水平的增加和DNA的合成相一致，提示TK1可作為腫瘤生長(zhǎng)和細(xì)胞增殖的一種標(biāo)志物。本研究通過(guò)檢測(cè)肺癌患者血清中TK1的水平，分析其與肺癌的臨床病理學(xué)及預(yù)后的關(guān)系。從而探討血清TK1在肺癌診斷、治療和預(yù)后等方面的應(yīng)用價(jià)值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 一般資料 收集2012年3月至2013年4月，常州市第二人民醫(yī)院收治的肺癌患者75例，其中男性52例、女性23例，患者年齡34～80歲，中位年齡59歲。其中非小細(xì)胞肺癌68例（鱗癌28例、腺癌40例），Ⅰ期28例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例、Ⅳ期25例；小細(xì)胞肺癌7例，其中局限期4例、廣泛期3例。另取56例在常州市第二人民醫(yī)院健康體檢者（其中男性34例、女性22例；年齡28～76歲，中位年齡55歲）為正常對(duì)照組。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑 TK1診斷試劑盒、CIS-1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀購(gòu)自華瑞同康生物技術(shù)（深圳）有限公司，數(shù)字顯示水浴箱購(gòu)自上海精宏科學(xué)儀器有限公司，超速離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司，脫色搖床購(gòu)自江蘇省金壇市醫(yī)療器械廠。

1.2 方法

1.2.1 TK1測(cè)定步驟 患者及健康查體者早晨空腹抽血3 mL，30 min內(nèi)經(jīng)高速離心，取血清備用。TK1測(cè)定在本院腫瘤科實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。制備好抗體稀釋液、洗液、封閉液。將內(nèi)含硝酸纖維素膜的模板平放在一張干凈的濾紙上，不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品按1號(hào)、2號(hào)、3號(hào)的順序點(diǎn)樣到A1、A2及A3位置上，每孔3 μL；待檢血清按每孔3 μL順序點(diǎn)在后面的膜上，室溫下自然晾干。打開(kāi)模板，將膜放入反應(yīng)盒內(nèi)，用配制后的稀釋液振搖洗膜2次，每次5 min。棄去洗滌液，加封閉液，室溫下振搖封閉l h。加一抗（TK1-IgY），4℃下過(guò)夜。棄去反應(yīng)液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加二抗（生物素化抗IgY二抗），室溫下振搖反應(yīng)40 min。棄去反應(yīng)液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加鏈酶親合素-酶復(fù)合物，室溫下振搖反應(yīng)1 h。棄去封閉液，用洗液漂洗3次后，振搖洗滌3次，每次5 min。加ECL發(fā)光試劑，過(guò)膜浸濕，精確反應(yīng)1 min。將膜放入CIS-1型化學(xué)發(fā)光成像分析系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行分析。上述重復(fù)3次。取3次測(cè)量值均數(shù)，測(cè)量值波動(dòng)范圍為均數(shù)±0.5 mg。

1.2.2 參考值 依據(jù)以往的大樣本臨床試驗(yàn)研究數(shù)據(jù)確立血清TK1的參考值：血清TK1水平0～2.0 pmol/L為正常，>2.0 pmol/L為異常［5］。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有的數(shù)據(jù)資料采用SPSS 19.0軟件包處理。兩組間TK1陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清TK1在肺癌患者及健康對(duì)照組間的比較

在肺癌組患者的血清中，TK1的陽(yáng)性率為33.3%，而在健康對(duì)照組中的陽(yáng)性率為12.5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。

2.2 肺癌組血清TK1與患者吸煙與否的關(guān)系

在肺癌組患者的血清中，吸煙者TK1的陽(yáng)性率為38.3%，而在不吸煙組中的陽(yáng)性率為25.0%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 肺癌組血清TK1與患者性別的關(guān)系

在肺癌組患者的血清中，女性TK1的陽(yáng)性率為34.8%，而在男性中的陽(yáng)性率為32.7%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.4 肺癌組血清TK1與病理學(xué)特點(diǎn)的關(guān)系

在肺癌組患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的患者血清TK1陽(yáng)性率為40%，淋巴結(jié)陰性患者的TK1陽(yáng)性率為28.9%，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者血清TK1陽(yáng)性率（53.8%）明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者（22.4%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。TNM分期為晚期的肺癌患者血清TK1陽(yáng)性率（54.5%）高于TNM分期早期的患者（16.7%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001）。另外，小細(xì)胞肺癌患者的TK1陽(yáng)性率（42.9%）明顯高于非小細(xì)胞肺癌患者（32.4%），但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1，P>0.05）。

2.5 肺癌患者血清TK1與2年生存率的關(guān)系

至2年隨訪截止日，46例患者生存，血清TK1陰性患者的2年生存率為78%，TK1陽(yáng)性患者為28%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2，P<0.001）。

表1 TK1與肺癌臨床病理學(xué)特點(diǎn)的關(guān)系Table 1 Relationship between TK1 and clinical pathological features of lung cancer

表2 TK1與肺癌患者2年生存率的關(guān)系Table 2 Relationship between TK1 and 2 year survival rate of lung can?cer patients

3 討論

細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1（TK1）是細(xì)胞S期DNA合成所需的關(guān)鍵酶之一，TK1酶是細(xì)胞增殖指數(shù)的測(cè)量標(biāo)記物之一。TK1在非增殖細(xì)胞和健康人血清中含量極微或檢測(cè)不到［6-7］，而在增殖細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞G1期→S期→G2期早期升高明顯［8］。研究發(fā)現(xiàn)［9］食管癌、胃癌、結(jié)直腸癌患者的血清TK1水平明顯高于對(duì)照組，且TK1檢測(cè)的陽(yáng)性率明顯高于CEA、CA199、CA50。因此TK1可用于觀察腫物實(shí)體的細(xì)胞增殖度，判定其惡性程度，對(duì)細(xì)胞異常增殖病變的治療效果和預(yù)后的判斷有重要意義［10-11］。

有研究［12-13］認(rèn)為T(mén)K1是肺癌患者一項(xiàng)可信的特異性高的腫瘤細(xì)胞增殖標(biāo)志物。結(jié)合本研究結(jié)果顯示，肺癌組血清TK1陽(yáng)性率高于對(duì)照組（P=0.006）。因此說(shuō)明TK1檢測(cè)可成為肺癌的輔助診斷方法之一。

本研究結(jié)果顯示TK1與患者性別無(wú)相關(guān)性。雖然提示在不同的病理類(lèi)型中，小細(xì)胞肺癌患者血清TK1的陽(yáng)性率高于非小細(xì)胞肺癌患者。有吸煙史的肺癌患者中其血清TK1陽(yáng)性率比無(wú)吸煙史的肺癌患者高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的患者血清TK1陽(yáng)性率高于淋巴結(jié)陰性患者，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者血清TK1陽(yáng)性率明顯高于無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006）。因此，認(rèn)為在診斷肺癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中，TK1在判斷血行轉(zhuǎn)移中有一定的臨床價(jià)值。本研究發(fā)現(xiàn)TNM分期為晚期的肺癌患者血清TK1陽(yáng)性率高于TNM分期早期的患者，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明血清TK1陽(yáng)性率與肺癌的發(fā)展程度相關(guān)。黃銳等［14］檢測(cè)了63例肺癌患者血清TK1的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)其與患者病理學(xué)類(lèi)型相關(guān)，而與吸煙、TNM分期，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移不相關(guān)，這可能與樣本量相對(duì)較少有一定的關(guān)系。

本研究生存率顯示，TK1陽(yáng)性率與患者的2年生存率顯著相關(guān)，證實(shí)了TK1還可作為評(píng)價(jià)肺癌預(yù)后的一項(xiàng)新的生物指標(biāo)。

綜上，發(fā)現(xiàn)血清TK1陽(yáng)性率與肺癌及其臨床病理特征有一定的相關(guān)性，血清TK1檢測(cè)可能對(duì)于指導(dǎo)肺癌臨床分期和判斷預(yù)后有一定的臨床意義。

[1] Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics[J].CA Cancer J Clin,2012,62(1):10-29.

[2] Rhea JM,Molinaro RJ.Cancer biomarkers:surviving the journey from bench to bedside[J].Med Lab Observ,2011,43(3):10-26.

[3] Chen WQ,Zhang SW.Analysis of tumor incidence and mortali?ty in China Cancer Registry in 2007[J].Chinese Cancer,2011,20 (3):162.[陳萬(wàn)青,張思維.中國(guó)腫瘤登記地區(qū)2007年腫瘤發(fā)病和死亡分析[J].中國(guó)腫瘤,2011,20(3):162.]

[4] Mutahir Z,Clausen AR,Anderson KM,et al.Thymidine kinasel 1 regulatory fine-tuning through tetramer formation[J].FEBSJ, 2013,280(6):1531-1541.

[5] Chen ZH,Huang SQ,Wang Y,et al.Serological thymidine ki?nase 1 is a biomarker for early detection of tumours-a health screening study on 35 365 people,using a sensitive chemilumines?cent dot blot assay[J].Sensors(Basel),2011,11(12):11064-11080.

[6] Agarwal HK,McElroy CA,Sjuvarsson E,et al.Synthesis of N3-substituted carboranyl thymidine bioconjugates and their evalua?tion as substrates of recombinant human thyidine 1[J].Eur J Med Chem,2013,60:456-468.

[7] Liang QL,Wang BR,Li ZY,et al.Construction of eukaryotic ex?pression vector of TSLC1 gene[J].Arch Med Sci,2011,7(4):579-585.

[8] Arner ES,Eeiksson S.Mammalian deoxyribonucleoside kinases[J]. Pharmacol Ther,1995,67(2):155-186.

[9] Zhang ZJ,Zheng YP,Lin YF,et al.Clinical application of TK1 detection in diagnosis of common malignant tumor[J].Int J Medi Lab Med,2014,35(19):2636-2637.[張志堅(jiān),鄭艷蘋(píng),林元峰,等. TK1檢測(cè)對(duì)常見(jiàn)惡性腫瘤診斷的臨床應(yīng)用[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,35(19):2636-2637.]

[10]Alegre MM,Robison RA,O'Neill KL.Thymidine Kinase 1:a universal marker for cancer[J].Cancer and Clin Oncol,2013,2(1): 159-167.

[11]Sharif H,von Euler H,Westberg S,et al.A sensitive and kinetical?ly defined radiochemical assay for canine and human serum thy?midine kinase 1(TK1)to monitor canine malignant lymphoma[J]. Veterinary Journal,2012,194(1):40-47.

[12]Kuroiwa N,Nakayama M,Fukuda T,et al.Specific recognition of cytosolic thymidne kinase in the human lung tumor by mono?clonal antibodies raised against recombinant human thymidine ki?nase[J].Immu Met,2001,253:1-11.

[13]Melissa MA,Michanel JW,Daine TB,et al.Serum detection of thymidine kinase 1 as a means of early detection of lung cancer [J].Ant Res,2014,34:245-2152.

[14]Huang R,Ye YZ,Chen ML,et al.Expression of cytoplasmic thy?midine kinase in lung cancer[J].J Clin Med,2015,20(3):402-404. [黃 銳,葉元滋,陳梅莉,等.細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶在肺癌中的表達(dá)極其臨床意義[J].臨床肺科雜志,2015,20(3):402-404.]

（2015-06-24收稿）

（2015-09-22修回）

（編輯：楊紅欣）

Serum TK1 and its relation to the clinicopathological features and prognosis of patients with lung cancer

Heng YE,Keqing QIAN,Wei HUANG

Oncology Department,Changzhou Second People's Hospital affiliated to Nanjing Medical University,Changzhou 213000,China.

Objective:This study investigated the positive detection rate of cytoplasm thymidine kinase 1(TK1)in lung cancer patients and the relationship of TK1 with clinicopathological features and prognosis.Methods:Sensitive chemiluminescence dot-blot assay was used to detect serum TK1 levels in 73 lung cancer patients and 56 normal control subjects.Results:The positive detection rate of TK1 was elevated in the lung cancer patients compared with the controls(P=0.006).The positive detection rate of TK1 was also correlated with distant metastases,but not with other factors,such as smoking,sex,lymph node metastasis,and pathology types.The 2 year survival of the patients with negative TK1 detection was significantly longer than that of the patients positively detected with the marker(P<0.001).Conclusion: Serum TK1,a new tumor marker,has potential applications in the diagnosis and prognosis of lung cancer.

lung cancer,cytoplasm thymidine kinase 1,prognosis

10.3969/j.issn.1000-8179.2015.21.679

南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州第二人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科（江蘇省常州市213000）

錢(qián)科卿 oncol@foxmail.com

葉珩 專(zhuān)業(yè)方向?yàn)閻盒阅[瘤內(nèi)科治療。

E-mail：dongyi8816@126.com