于洪艷 朱 丹 丁 寧

丹紅注射液對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用及其對(duì)白細(xì)胞介素-8的影響

于洪艷1朱 丹1丁 寧2

目的 探討丹紅注射液對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注損傷（MI/RI）的保護(hù)作用及其對(duì)白細(xì)胞介素-8（IL-8）的影響。方法 SD大鼠完全隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、丹紅注射液組，每組12只，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支前30 min，再灌注120 min制備大鼠MI/RI模型。在結(jié)扎前15 min予以靜脈注射丹紅注射液8 ml/kg。觀察丹紅注射液對(duì)MI/RI模型大鼠心肌組織病理、血清IL-8水平、心肌組織IL-8 mRNA及IL-8蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 丹紅注射液能改善MI/RI模型大鼠心肌組織病理形態(tài)，降低血清中IL-8含量和心肌組織IL-8mRNA、IL-8蛋白表達(dá)水平。結(jié)論 丹紅注射液能夠通過(guò)對(duì)IL-8的調(diào)節(jié)減輕心肌缺血/再灌注損傷。

心肌缺血-再灌注；丹紅注射液；白細(xì)胞介素-8

心肌缺血-再灌注損傷（Myocardial ischemia/ reperfusion injury,MI/RI）是經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈成形術(shù)、冠狀動(dòng)脈溶栓術(shù)、冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)、冠狀動(dòng)脈內(nèi)支架植入術(shù)等進(jìn)行有效的心肌再灌注縮小心肌梗死面積治療后發(fā)生的損傷[1]。MI/RI已成為影響心肌梗死患者缺血/再灌注后心臟結(jié)構(gòu)和功能恢復(fù)的主要因素。研究表明，心肌缺血能夠引起急性炎性反應(yīng)，再灌注后會(huì)加劇炎性反應(yīng)，導(dǎo)致不可逆的細(xì)胞損傷[2]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)大鼠建立MI/RI模型，研究丹紅注射液對(duì)MI/RI的保護(hù)作用及其對(duì)白細(xì)胞介素-8（IL-8）的影響，為丹紅注射液的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取SD大鼠36只，體質(zhì)量（200± 20）g，雌雄各半。由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證編號(hào)為：SCXK（京）2007-0001。適應(yīng)性馴養(yǎng)1周，自由飲水、攝取標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。室溫20～23 ℃，相對(duì)濕度40%～80%。將大鼠完全隨機(jī)分為3組，即假手術(shù)組、模型組、丹紅注射液預(yù)處理組，每組12只。

1.2 試劑及試藥 心電圖記錄儀（日本 KOHDEN公司）；全自動(dòng)生化儀（美國(guó)TECHICON公司）；小動(dòng)物呼吸機(jī)（成都泰盟科技有限公司）；普通光學(xué)顯微鏡（日本OLYMPUS公司）；IL-8多克隆抗體（武漢博士德生物工程有限公司）；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體（上海北諾生物科技有限公司）；熒光定量PCR儀（西安天隆科技有限公司）；Western blot印跡轉(zhuǎn)移電泳儀（君意東方電泳設(shè)備有限公司）。IL-8酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）試劑盒（南京森貝伽生物科技有限公司）。丹紅注射液由山東省步長(zhǎng)制藥有限公司提供。

1.3 模型制備[3]采用20%烏拉坦50 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰臥固定。將心電圖記錄儀的針狀電極分別插入四肢皮下，接心電圖記錄儀，記錄標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)心電圖。頸部備皮，行氣管插管，接大鼠呼吸機(jī)通氣。距離胸骨左緣0.5 cm處，從第3、4肋間開(kāi)胸，剪開(kāi)心包膜，暴露心臟。在肺動(dòng)脈圓錐左緣與左心耳右緣之間暴露冠狀動(dòng)脈左前降支。用4-0無(wú)損傷縫合線在左心耳根部下方2 mm處，以深1～2 mm、寬2～3 mm穿于帶凹槽的細(xì)聚乙烯管制成的冠脈阻斷小環(huán)，穿過(guò)心肌表層。假手術(shù)組不結(jié)扎。模型組、丹紅注射液預(yù)處理組均結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支30 min，造成心肌缺血后，在凹槽部剪斷結(jié)扎用的無(wú)損傷縫合線，再灌注120 min制備大鼠MI/RI模型。其中結(jié)扎缺血模型成功標(biāo)準(zhǔn)為心電圖示ST段明顯抬高，并與T波融合，心肌顏色變淺紅色；再灌注模型成功標(biāo)準(zhǔn)為剪斷結(jié)扎用的無(wú)損傷縫合線后ST段降低≥1/2，心肌逐漸紅潤(rùn)。

表1 3組MI/RI大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA、IL-8蛋白相對(duì)表達(dá)量比較(±s)

表1 3組MI/RI大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA、IL-8蛋白相對(duì)表達(dá)量比較(±s)

注：與假手術(shù)組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.01

組別 例數(shù) 血清IL-8(μg/L) 心肌組織IL-8mRNA相對(duì)表達(dá)量 心肌組織IL-8mRNA相對(duì)表達(dá)量假手術(shù)組 12 36±8 0.42±0.09 0.45±0.07模型組 12 94±11# 0.87±0.14# 0.92±0.16#丹紅注射液預(yù)處理組 12 63±9* 0.65±0.11* 0.69±0.12*

1.4 方法 假手術(shù)組大鼠僅對(duì)左冠狀動(dòng)脈前降支用4-0縫合線穿過(guò)心肌表層，不進(jìn)行結(jié)扎。穿縫合線后予以靜脈注射0.9%氯化鈉注射液8 ml/kg。模型組大鼠在結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支前15 min予以靜脈注射0.9%氯化鈉注射液8 ml/kg。丹紅注射液組大鼠在結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支前15 min予以靜脈注射丹紅注射液8 ml/kg。

1.5 觀察指標(biāo) 采用ELISA法檢測(cè)血清中IL-8的水平；采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)IL-8 mRNA表達(dá)；采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)IL-8蛋白表達(dá)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 丹紅注射液預(yù)處理對(duì)MI/RI大鼠心肌組織病理形態(tài)學(xué)的影響 假手術(shù)組大鼠心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，排列整齊，無(wú)心肌纖維的破壞；核內(nèi)物質(zhì)分布均勻，無(wú)水腫斷裂，胞間間隙正常。模型組大鼠心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊，邊界不清，心肌纖維變長(zhǎng)呈波浪形、排列紊亂，發(fā)生斷裂，細(xì)胞內(nèi)水腫明顯，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。丹紅注射液預(yù)處理組大鼠散在少量細(xì)胞結(jié)構(gòu)模糊，邊界不清，僅少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)?？梢?jiàn)，丹紅注射液預(yù)處理能夠抗 MI/RI，具有保護(hù)心肌細(xì)胞的作用。

2.2 血清IL-8水平、心肌組織IL-8 mRNA、IL-8蛋白相對(duì)表達(dá)量 與假手術(shù)組大鼠比較，模型組大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，丹紅注射液預(yù)處理組大鼠血清IL-8水平、心肌組織IL-8mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)表1。

3 討論

致炎因子、炎性介質(zhì)及其介導(dǎo)的炎性反應(yīng)在MI/RI的病理生理中起重要作用[4]。中性粒細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞等在心肌缺血再灌注時(shí)，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制發(fā)生細(xì)胞炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致白細(xì)胞介素-6、腫瘤壞死因子、血小板活化因子、血栓素等多種炎性細(xì)胞因子大量生成，生成的炎性細(xì)胞因子被激活后又能合成和釋放有趨化作用的炎性介質(zhì)，進(jìn)一步擴(kuò)大了炎性反應(yīng)，導(dǎo)致組織的損傷和破壞。IL-8是巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子，是炎癥早期最具影響的介質(zhì)之一，能夠結(jié)合趨化因子受體對(duì)中性粒細(xì)胞有細(xì)胞趨化作用而實(shí)現(xiàn)其對(duì)炎性反應(yīng)的調(diào)節(jié)，促使炎性介質(zhì)釋放和誘導(dǎo)其他炎性因子啟動(dòng)炎癥級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)，使受損心肌的惡性循環(huán)加重[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，采用結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支前30 min，再灌注120 min制備大鼠MI/RI模型，模型組心肌組織病理表現(xiàn)出明顯的損傷，同時(shí)伴有IL-8明顯升高，其參與了MI/RI的發(fā)生和發(fā)展，參與了炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使心肌組織受損。而通過(guò)丹紅注射液預(yù)處理后血清中IL-8含量和心肌組織 IL-8 mRNA表達(dá)水平、IL-8蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯下降。提示丹紅注射液可能是通過(guò)對(duì)IL-8的調(diào)節(jié)減輕MI/RI。

[1] 高妮妮,王芳,廉哲勛.PI3K-Akt-eNOS信號(hào)通路在三磷酸腺苷后處理減輕兔心肌缺血再灌注損傷中的作用[J].中國(guó)循環(huán)雜志, 2014,29(1):59-63.

[2] 趙潤(rùn)英,郝偉,孟祥軍,等.阿魏酸川芎嗪對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及分子機(jī)制研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2012,18(19):230-234.

[3] 王淑俠,蘭小莉,王吉文,等.大鼠MI/R損傷模型的改進(jìn)與評(píng)價(jià)[J].解剖學(xué)進(jìn)展,2000,6(4):371-371.

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R542.2

A

1673-5846(2015)08-0020-02

1齊齊哈爾市中醫(yī)醫(yī)院，黑龍江齊齊哈爾 161000

2黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱 150001

于洪艷（1973.10-），本科學(xué)歷，副主任藥師，副院長(zhǎng)。從事藥理學(xué)研究

丁寧（1968-），本科學(xué)歷，副主任醫(yī)師。研究方向：心腦血管疾病的診斷學(xué)研究。E-mail：ningning_680512@163.com