文│李娟 黃仁樹(shù)（四川省什邡市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)診斷注意事項(xiàng)

文│李娟 黃仁樹(shù)（四川省什邡市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心）

隨著畜牧業(yè)的發(fā)展，獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室在動(dòng)物疫病防控體系的作用日趨凸顯，而實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，直接影響后續(xù)畜牧生產(chǎn)指導(dǎo)和動(dòng)物疫病防控的方向。目前獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷主要分三大類：血清學(xué)診斷、病毒學(xué)診斷、細(xì)菌學(xué)診斷。細(xì)菌學(xué)與病毒學(xué)檢測(cè)工作在基層實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展得不多，使用最普遍的是血清學(xué)診斷。由于基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)工作起步晚、人員素質(zhì)參差不齊等原因，在血清學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)實(shí)施和操作中常出現(xiàn)一些問(wèn)題，筆者就該實(shí)驗(yàn)應(yīng)該注意的問(wèn)題進(jìn)行了總結(jié)和分析，旨在提高動(dòng)物疫病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力和水平，增強(qiáng)動(dòng)物疫病防控的針對(duì)性和有效性。

一、血液樣品的采集、保存和運(yùn)送

1.血液采集和血清制取中應(yīng)注意問(wèn)題。在血清學(xué)診斷中，診斷樣品主要是血清。對(duì)于不同的畜禽采血方法較多，通過(guò)實(shí)踐，筆者發(fā)現(xiàn)家禽采用翅下靜脈采血、小豬采用臥式采血、中豬和大豬采用立式采血以及奶牛采用尾靜脈采血的方式，是畜禽應(yīng)激最小、最為方便的方式。在血清學(xué)診斷中應(yīng)注意采血的時(shí)間，需在抗體的高峰期進(jìn)行血樣采集。

在血樣采集過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，針頭、血樣容器、采血部位須全部消毒。采樣人員務(wù)必熟練掌握采血技術(shù)，選用合適的注射器及針頭，做好保定工作，選準(zhǔn)采血進(jìn)針的部位。例如豬的前腔靜脈越往頭部越淺，但也越細(xì)；越靠胸部越粗，但也越深。在采血過(guò)程中要掌握好一定的方向、角度和深度，針尖進(jìn)入血管后應(yīng)順著血管的方向向前推進(jìn)，推偏刺穿血管會(huì)引起血腫。

2.血清的制取。血清的制取通常有兩種方法：第一種自然析出法，采血后，應(yīng)使注射器活塞向后拉一兩厘米，留血清析出的空隙，并放在30度左右?jiàn)A角上靜置，讓血清自然析出，通常溫度高血清析出快，夏日一般一個(gè)小時(shí)血清即可析出；另一種方法是離心法，該方法是立即將注射器內(nèi)的血液沿容器壁（血清管壁）徐徐注入，不能用力擠，也不能震蕩，否則易使紅細(xì)胞破裂而發(fā)生溶血，待容器內(nèi)的血液凝固后，用離心機(jī)4000轉(zhuǎn)5分鐘左右離心，上層即是血清，須凝血后再離心，否則離心出來(lái)是血漿。

3.血液樣品的保存和運(yùn)送。血清制備后，應(yīng)4℃冷藏，在24小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。如24小時(shí)內(nèi)不能送達(dá)，則將血清置于冰箱-20℃凍存，切記不可反復(fù)凍融。樣品運(yùn)輸過(guò)程中，為避免因劇烈震動(dòng)使容器破損，樣品裝入冷藏箱前應(yīng)鋪設(shè)襯墊并用柔軟的東西互相隔開(kāi)防止碰撞，而且要保持溫度在必要的范圍內(nèi)（通常加入冰袋）。需要注意的是所有盛裝送檢樣品的容器，應(yīng)貼上可防止因各種原因（冷凍、擠碰等）脫落的標(biāo)簽，同時(shí)填完整采樣單，標(biāo)明采樣時(shí)間、地點(diǎn)、編號(hào)和樣品名稱、畜禽品種、免疫情況等。

二、實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)診斷

1.試劑、器具的選擇。在血清學(xué)診斷中的試劑要選擇有批文批號(hào)的，并注意試劑的有效期。特別要注意的是診斷試劑的有效期通常比較短，甚至有的有效期只有3個(gè)月?；瘜W(xué)試劑應(yīng)主要選擇分析純，并注意試劑的保存方法。

另外，移液器量程的選用也要注意，因?yàn)槠錅?zhǔn)確性直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。選用最大量程與所量體積最為接近的移液器，誤差會(huì)較小。

在血清學(xué)檢測(cè)中經(jīng)常會(huì)用到96孔血凝板，通常豬瘟的間接血凝試驗(yàn)選用110度V型板，而禽流感和新城疫的血凝試驗(yàn)選用90V型度板，因?yàn)樵谕葧r(shí)間內(nèi)不同型號(hào)的板血沉降效果是不同的。

2.實(shí)驗(yàn)室儀器的校正。在血清學(xué)診斷中，常用的儀器有電子天平、水浴鍋、酶標(biāo)儀、純水器、滅菌鍋、移液器和恒溫箱。電子天平應(yīng)注意在第一次使用、長(zhǎng)時(shí)間未使用、天平移動(dòng)位置和天氣溫差變化等情況下都要做校準(zhǔn)，才能保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。應(yīng)經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和水中（或溫箱內(nèi)）實(shí)測(cè)溫度是否一致，允許有±1℃的誤差。對(duì)酶標(biāo)儀應(yīng)經(jīng)常維護(hù)其光學(xué)部分，防止濾光片霉變，定期檢測(cè)校正，使其保持良好的工作性能，因?yàn)椴煌噭┖幸蟛捎貌煌牟ㄩL(zhǎng)。純水器應(yīng)注意器濾芯、反滲透膜和純化柱子是否超出使用壽命，如果失效，立即更換，否則影響純水的質(zhì)量。滅菌鍋的安全閥、溫度表、壓力表要定期校驗(yàn)，以確保設(shè)備的安全和正常使用。移液器可用分析天平稱量所取純水的重量并計(jì)算的方法，來(lái)校正取液量。恒溫箱的電動(dòng)機(jī)軸承應(yīng)每半年加油一次，經(jīng)常檢查恒溫箱所示的溫度和溫箱內(nèi)實(shí)測(cè)溫度是否一致。

3.實(shí)驗(yàn)室操作的規(guī)范。實(shí)驗(yàn)室操作的規(guī)范性，直接影響著實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。在血清學(xué)診斷中，一是應(yīng)注意所用的器皿都要洗凈，配好的溶液需要進(jìn)行滅菌，并注明日期和名稱，放置低溫或冷凍保存。二是所用的電子儀器設(shè)備在使用之前都應(yīng)提前10分鐘打開(kāi)，讓儀器預(yù)熱，達(dá)到最佳的工作狀態(tài)。三是在移液器的使用時(shí)，為獲得的較高的精度，吸頭最好預(yù)先吸取一次樣品溶液，然后正式移液；吸液時(shí)應(yīng)保證槍頭內(nèi)沒(méi)有氣泡；每次實(shí)驗(yàn)后務(wù)必將刻度調(diào)整至最大，讓彈簧恢復(fù)原型以延長(zhǎng)移液槍的使用壽命。四是對(duì)于所用溶液和試劑，盡量做到取多少用多少，對(duì)于取出又未用完的溶液或試劑，絕不能倒回瓶中。五是實(shí)驗(yàn)中應(yīng)注意控制好實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度，通常溫度控制在20～25℃，對(duì)于特定的實(shí)驗(yàn)要控制好相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度。

4.實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中的生物安全。作為基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室，一般不從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，但是在做人畜共患病檢測(cè)（比如布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)）時(shí)對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員仍有潛在危險(xiǎn)，實(shí)驗(yàn)室的其他血清學(xué)監(jiān)測(cè)的生物安全也有隱患。所以實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)提高防護(hù)意識(shí)，懂得生物安全對(duì)自身和環(huán)境的重要性，而且在實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)該做好防護(hù)措施。

對(duì)于實(shí)驗(yàn)室環(huán)境應(yīng)定期或不定期的通過(guò)紫外燈或消毒劑進(jìn)行消毒；每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后都應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面進(jìn)行消毒，廢棄物不能隨便丟棄，對(duì)其消毒后，做統(tǒng)一處理；對(duì)于個(gè)人，應(yīng)佩戴好手套、口罩、鞋套和實(shí)驗(yàn)服，每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束都要洗凈雙手。

三、實(shí)驗(yàn)室記錄

采樣記錄應(yīng)一式兩份，一份隨樣品送實(shí)驗(yàn)室，一份采樣單位備案。通常血清學(xué)實(shí)驗(yàn)的采樣記錄，包括以下幾方面的內(nèi)容：畜主的姓名、電話、畜禽場(chǎng)的地址、動(dòng)物種類、數(shù)量、日齡和免疫情況。采樣記錄單一定要填寫(xiě)詳實(shí)，因?yàn)樗鼘?duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析起著很關(guān)鍵的作用。在實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)診斷中的實(shí)驗(yàn)也應(yīng)做好原始記錄，記錄應(yīng)包括：檢測(cè)時(shí)間、樣品名稱、檢測(cè)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、環(huán)境溫度和濕度、檢查結(jié)果以及檢查人員等。

四、結(jié)語(yǔ)

血清學(xué)診斷是基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室主要進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)，隨著畜牧業(yè)的發(fā)展和疫病譜的變化，基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該在此基礎(chǔ)上，引進(jìn)各種新設(shè)備、新方法、專業(yè)人員，開(kāi)展更多實(shí)驗(yàn)，為養(yǎng)殖業(yè)服務(wù)好，對(duì)提高動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)水平、提升預(yù)警預(yù)報(bào)能力、合理安排疫病防控措施、保證畜產(chǎn)品質(zhì)量安全有重要意義。