于青海 李玉杰 孔祥華 姜秀云 陳靜 馬慧玲 藺曉月 劉麗平 徐鴻 孫圣福 田夫林

（山東省動物疫病預防與控制中心 250022）

牛結核病PPD皮內變態(tài)反應和ELISA檢測方法對比分析

于青海 李玉杰 孔祥華 姜秀云 陳靜 馬慧玲 藺曉月 劉麗平 徐鴻 孫圣福*田夫林*

（山東省動物疫病預防與控制中心 250022）

本試驗采集了2個牛場的10頭疑似結核病的血清，采用ELISA方法進行牛結核病抗體檢測，同時對該10份樣品進行了PPD皮內變態(tài)反應，通過兩種檢測方法的比較，以期篩選出切實可行牛結核病的檢測方法，為牛結核病的凈化提供基礎。

牛；結核??；PD皮內變態(tài)反應；ELIS；檢測方法

牛結核病 （Bovine tuberculosis）是由牛結核分支桿菌（Mycobacterium bovis） 和結核分支桿菌 （Mycobacterium tuberculosis）所引起的一種人畜共患的傳染病，主要引起組織器官的肉芽腫性結核結節(jié)和化膿性或干酪樣或鈣化的壞死病灶為特征，牛結核病在世界各國均有發(fā)生，在我國是常見的多發(fā)性疫病，牛結核病的流行嚴重影響畜牧業(yè)的健康發(fā)展，更嚴重威脅著人身安全。世界衛(wèi)生組織 （OIE）將其列為必須通報疫病，農業(yè)部將其列為二類動物傳染病，列為檢疫撲殺對象[1]。

目前，結核病的監(jiān)測主要采取PPD皮內變態(tài)反應試驗進行，PPD皮內變態(tài)反應需要現場操作，操作過程繁瑣，通量小，需要有人保定、剪毛、測皮厚，操作者有一定的風險，時間長，需要120h才能完成。因此亟需一種簡便易操作的方法替代該方法，我們引入了IDEXX的結核桿菌ELISA檢測試劑盒，采集牛血清進行抗體檢測，同時進行PPD皮內變態(tài)反應，比較兩種方法的一致性、敏感性和特異性。

1 材料和方法

1.1 被檢血清及被檢牛

2014年秋季山東省2個養(yǎng)牛場的疑似結核牛血清樣品10份。

1.2 試劑

牛結核菌素由黑龍江生物制品一廠提供；牛結核分支桿菌抗體ELISA檢測試劑盒由IDEXX公司提供。

1.3 試驗方法

1.3.1 ELISA

按照IDEXX牛分支桿菌抗體檢測試劑盒操作說明書進行。

1.3.2 PPD皮內變態(tài)反應

將牛只頸側中部上三分之一處剪毛，直徑約10cm，用游標卡尺測量中央皮皺厚度，記錄；測量完畢，用75%酒精消毒術部，皮內注射0.1m l提純結核菌素；觀察反應：皮內注射72h后判定，觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應，并用游標卡尺測量皮皺厚度，做好記錄，疑似牛和陰性牛，96h和120h再分別觀察一次，并記錄皮厚。

2 結果

2.1 牛結核病不同檢測方法結果

2.1.1 ELISA監(jiān)測結果

對2個養(yǎng)牛場的10頭牛采集血清進行抗體檢測，根據IDEXX的試劑盒說明書的結果判定標準，S/P值≥0.3判定為陽性，10份樣品全部為陽性。

表1 ELISA監(jiān)測結果

2.1.2 PPD皮內變態(tài)反應結果

對2個養(yǎng)牛場的10頭牛進行PPD皮內變態(tài)反應試驗，每頭牛頸部注射0.1ml結核菌素，72h后觀察結果，有3頭牛皮厚差≥4mm，96h后觀察結果，有6頭牛皮厚差≥4mm，120h后觀察結果，有6頭牛皮厚差≥4mm。

3 結論

（1）通過采用IDEXX的牛分支桿菌抗體檢測試劑盒與傳統(tǒng)PPD皮內變態(tài)反應兩種結核病的監(jiān)測方法的比較，發(fā)現兩種方法存在一定的差異，本試驗采用ELISA方法篩選的陽性樣品進行PPD皮內變態(tài)反應，10份樣品中PPD皮內變態(tài)反應有6份樣品為陽性，陽性符合率為60%。

表2 PPD皮內變態(tài)反應結果

（2）ELISA方法試驗操作簡單，進行94份樣品的檢測，只需要不到3h的時間即可檢出結果，而PPD皮內變態(tài)反應需要120h才可出具結果，而且操作復雜，需要輔助人員保定，剪毛、測量皮厚等過程。從檢測方法的便捷程度以及通量來看，ELISA方法較PPD皮內變態(tài)反應有很大的可操作性。

（3）從兩種方法的檢測結果來看，ELISA方法可以用來結核病的篩查，而篩查的陽性樣品可以用PPD皮內變態(tài)反應來確診。兩種方法相結合，對于牛場的結核病的凈化消除具有較高的可操作性。楊顯超等人建議采用變態(tài)反應PPD皮內結合ELISA方法進行牛結核病的監(jiān)測凈化[2]。李金嶺等采用PPD皮內變態(tài)反應和ELISA結合的方式進行牛結核病的監(jiān)測，建議ELISA監(jiān)測陽性的進行撲殺，監(jiān)測陰性而PPD皮內變態(tài)反應陽性的觀察，隔離、淘汰[3]。

[1]王曲直,劉佩紅,沈素芳,等.牛結核病診斷方法研究進展[J].中國獸醫(yī)雜志,2015,51(2)：56-59.

[2]楊顯超,吳秀娟,李凱航,等.皮試法與ELISA法結核病檢測中的對比試驗[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊,2015(2)：10-12.

[3]李金嶺,郭宏軍,高明輝,等.歐盟皮內變態(tài)反應比較試驗法結合ELISA檢測牛結核病的研究[J].中國動物檢疫,2007,24(7)：28-29.

山東省動物疫病監(jiān)測防治項目。

于青海 （1957-），男，山東省濟南市人，助理獸醫(yī)師，主要從事動物疫病監(jiān)測與工作。*

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