馮杰 涂軍榮 王焱

(1.云南省食品藥品監(jiān)督管理局藥品認證中心 云南昆明 650101;2.佛上市三水區(qū)人民醫(yī)院心內科 廣東佛山 528527;3.廣東食品藥品職業(yè)技術學校 廣東廣州 510500)

缺血性心臟病患者外周血中EPCs數(shù)量減少、功能受損,與血管內皮功能障礙密切相關[1、2]。腦心清片是廣州白云山和記黃埔中藥有限公司生產的柿葉提取物制劑。有研究表明,腦心清片具有良好的防治動脈硬化癥作用[3],并可以抑制高血壓引起的頸動脈重構[4]。本文旨在研究腦心清片對缺血性心臟病患者外周血中EPCs數(shù)量及功能的影響。

1 材料與方法

(1)臨床資料:選取2013年9月～2013年12月在本院住院的被確診為IHD患者40例,其中男17例、女23例,年齡(64.0±5.5)歲,入選者均伴有胸痛,冠脈造影顯示至少一支冠脈狹窄>50%,其中單支病變13例,2支病變17例,3支病變10例。將入選患者按照電腦隨機數(shù)字表的方法隨機分為腦心清組30例和貝那普利組10例。腦心清組給予腦心清片4片Tid(廣州白云山和記黃埔中藥有限公司)貝那普利組給予貝那普利10mg/d(北京諾華公司),治療12周。兩組性別(男/女)比例是腦心清組13/17,貝那普利組4/6,無顯著差異。其他基本資料如年齡、吸煙、血脂、糖尿病等亦無統(tǒng)計學差異(見表1)。

(2)EPCs的分離、培養(yǎng)和鑒定:患者的靜脈血樣取至治療開始前和治療結束后,采用密度梯度離心法分離單核細胞,置于涂有人HFN的24孔培養(yǎng)板中,用EBM-2培養(yǎng),4d后換培養(yǎng)液,至d7時將貼壁細胞用DiLDL(2.4ug/ml)在37℃溫育1h,然后用2%多聚甲醛固定10min,再用FITC-UEA-I(10ug/ml)溫育1h。雙染色陽性者為正在分化的EPCs,每孔隨機選取3個視野(200倍)計數(shù)EPCs。

(3)粘附能力的檢測:用0.1%胰酶消化后收集EPCs,懸浮于500ulEBM-2培養(yǎng)液中計數(shù)。將同密度的EPCs接種在涂有人HFN的24孔培養(yǎng)板中,37℃下培養(yǎng)30min,計貼壁細胞數(shù)。

(4)EPCs遷移能力檢測:用0.1%胰酶消化后收集EPCs,懸浮于500ulEBM-2培養(yǎng)液中計數(shù)。在Boyden小室的下室中注入500ul EBM-2培養(yǎng)液,在上室中注入含有2×104EPCs懸浮細胞的EBM-2培養(yǎng)液50ul。在37℃培養(yǎng)24h,去除上室和濾膜未移動的細胞,將底層細胞用甲醇固定后進行Giemsa染色,計數(shù)。

(5)體外血管生成能力的檢測:在倒置顯顯微鏡下計數(shù)小血管生成細胞,EPCs細胞長度超過寬度的4倍以上即可被認為形成小血管。

(6)統(tǒng)計學方法:各組計量資料均以(x±S)表示,計數(shù)資料用x2檢驗,計量資料用t檢驗,單因素相關性分析,P< 0.05被認為有統(tǒng)計學差異。

2 結果

(1)治療前后兩組EPCs數(shù)量比較:在熒光顯微鏡下計數(shù)雙染色陽性者,即正在分化的EPCs數(shù)量,腦心清組治療前為(162±33)個/視野,治療后為(219±48)個/視野,治療前后比較有顯著差異(P<0.05)。

(2)治療前后EPCs的功能比較:兩組治療后,EPCs粘附、遷移、血管生成細胞比較,EPCs功能顯著提高,腦心清組相比貝那普利組的血管生成細胞略低,但沒有統(tǒng)計學差異,見表2。

3 討論

外周血中的內皮祖細胞EPCs可參與出生后的新生血管形成和損傷血管的再內皮化過程,對內皮修復、維持血管穩(wěn)定的功能具有重要作用[5]。IHD患者的EPCs數(shù)量減少及功能損傷會導致冠狀動脈自身修復能力降低與缺血心肌新生血管減少[1]。前期研究發(fā)現(xiàn)腦心清片改善冠心病患者的內皮功能可能與調節(jié)血脂、抗血小板聚集和抗氧化的綜合作用有關[6]。

表1 兩組患者基本資料比較(x±S)

表2 兩組治療前后各參數(shù)比較(x±S)

本研究首次發(fā)現(xiàn),腦心清片可以提高IHD患者外周血中EPCs數(shù)量并改善其粘附能力、遷移能力和體外生成血管能力。這可能是腦心清片改善血管內皮功能的機制之一。至于腦心清片提高EPCs數(shù)量和功能是否與上調SDF-1水平和CXCR4的表達有關,有待進一步的研究。

[1]陳海波,張淑霞.缺血性心臟病患者外周血中內皮祖細胞數(shù)量和功能的變化[J].河北醫(yī)學,2007,13(6):689-691.

[2]Yao EH,Fukuda N,Matsumoto T,et al.Losartan improves the impairedfunction of endothelial progenitor cells in hypertension via an antioxidanteffect[J].Hypertens Res,2007;30(11):1119-28.

[3]李楚源,貝偉劍,劉昌孝,等.腦心清片防治腦動脈硬化研究進展[J].藥物評價研究,2010,33(4):296-301．

[4]吳玉玲,張銳,黃美蘭.腦心清對自發(fā)性高血壓大鼠血壓、血小板聚集及頸動脈重構的影響[J].中藥材,2013,36(6):982-5.

[5]崔斌,黃嵐,宋耀明,等.冠心病患者循環(huán)內皮祖細胞與相關危險因素及冠狀動脈病變的關系[J].中華心血管病雜志,2005,33:785-788.

[6]梁斯碧,萬貞.腦心清片治療冠心病變異型心絞痛臨床療效及內皮功能的影響[J].廣東藥學,2004,14(6):39-41.