張壽斌黃呈輝李 濤廖 華肖 藝龍 瑜黃日妹譚慶瑜黃 艷

1.南方醫(yī)科大學附屬深圳寶安醫(yī)院兒科，廣東深圳 518100；2.南方醫(yī)科大學附屬深圳寶安醫(yī)院感染內(nèi)科，廣東深圳518100

EV71病毒引起手足口病患兒免疫狀態(tài)變化分析

張壽斌1黃呈輝2李 濤1廖 華1肖 藝1龍 瑜1黃日妹1譚慶瑜1黃 艷1

1.南方醫(yī)科大學附屬深圳寶安醫(yī)院兒科，廣東深圳 518100；2.南方醫(yī)科大學附屬深圳寶安醫(yī)院感染內(nèi)科，廣東深圳518100

目的 探討EV71病毒引起手足口病患兒免疫狀態(tài)變化。 方法 收集2013年6月～2014年12月我院收治的手足口病患兒120例，按照病情程度分為輕癥組、重癥組各60例，收集同期來我院進行健康體檢的正常健康體檢兒童60例作為對照組，測定三組IL-10水平、體液免疫功能及細胞免疫。 結果 輕癥組、重癥組IgM、IL-10水平均高于對照組，重癥組IgG、IgA、IgM、IL-10水平高于輕癥組（P＜0.05）。輕癥組、重癥組CD16+56+、CD23+、CD19+高于對照組，CD25+低于對照組（P＜0.05），重癥組CD19+高于輕癥組，CD16+56+、CD25+低于輕癥組（P＜0.05）；重癥組CD4+、CD8+低于輕癥組及對照組（P＜0.05）。 結論EV71病毒引起的HFMD患兒存在細胞免疫、體液免疫功能紊亂，疾病程度越嚴重，細胞免疫、體液免疫功能紊亂程度越嚴重，應提高重視，及時檢測，提高患兒的預后，降低死亡率。

手足口??；EV71；免疫功能

手足口?。℉FMD）是腸道病毒引起的常見傳染病之一，以科薩奇病毒16型（CVA16）和腸道病毒71型（EV71）感染最為常見[1]?；純阂钥谇?、手心、足底、臀部位散在紅色皰疹，可伴有咳嗽、流涕、食欲不振等為主要臨床表現(xiàn)[2]。HFMD患兒疾病的預后隨著病情的不同而有較大的差異，大部分患兒給予及時有效的對癥治療后可痊愈，但少數(shù)重癥患兒可并發(fā)心肌炎、肺水腫、肺出血、腦炎、心力衰竭等并發(fā)癥，危及患兒的生命健康[3]。本研究收集我院收治的手足口病患兒，依據(jù)病情程度分為輕癥組及重癥組，并檢測其免疫狀態(tài)的變化，觀察與疾病程度的關系，現(xiàn)報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

收集2013年6月～2014年12月我院收治的HFMD患兒120例，均符合衛(wèi)生部發(fā)布《手足口病診療指南》（2010年版）的HFMD診斷標準[4]，并且確定為EV71病毒引起。按照《手足口病診療指南》（2010年版）的標準將120例HFMD患兒分為輕癥組和重癥組[4]，輕癥組60例，男29例，女31例，年齡10個月～4.5歲，平均（2.7±0.4）歲，主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱伴手、足、口、臀部皮疹；重癥組60例，男25例，女35例，年齡11個月～4.3歲，平均（2.9±0.5）歲，均有神經(jīng)系統(tǒng)受累、呼吸或循環(huán)功能障礙等表現(xiàn)；收集同期來我院進行健康體檢的正常健康體檢兒童60例作為對照組，男27例，女33例，年齡10個月～5歲，平均年齡（2.5±0.6）歲，三組患兒的年齡、性別等一般資料差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

表1　三組免疫球蛋白及IL-10水平比較

表1　三組免疫球蛋白及IL-10水平比較

注：與對照組比較，*P＜0.05；與輕癥組比較，#P＜0.05

組別　n　IgG（g/L）　IgA（g/L）　IgM（g/L）　IL-10（ng/L）對照組　60　7.67±1.29　0.74±0.12　1.08±0.17　58.97±4.32輕癥組　60　8.12±1.31　0.79±0.15　1.43±0.22*　176.05±6.17*重癥組　60　11.53±1.96#　1.48±0.27#　1.82±0.31*#　294.41±10.04*#F 4.31　3.85　4.06　9.50 P＜0.05　?。?.05　　＜0.05　?。?.05

表2　三組淋巴細胞亞群比較

表2　三組淋巴細胞亞群比較

注：與對照組比較，*P＜0.05；與輕癥組比較，#P＜0.05

組別　n　CD4+　CD8+　CD16+56+　CD23+　CD25+　CD19+對照組　60　37.91±6.31　26.14±4.37　21.09±3.51　5.98±0.85　7.31±1.25　17.52±2.79輕癥組　60　38.32±6.47　27.58±4.62　26.47±4.38*　14.75±2.63*　5.06±0.87*　21.83±3.64*重癥組　60　28.15±4.73*#　21.46±3.57*#　11.86±1.97*#　17.21±3.19*　3.82±0.64*#　31.59±5.28*#F 6.32　4.59　8.25　10.06　3.97　9.17 P＜0.05　?。?.05　?。?.05　?。?.05　　＜0.05　?。?.05

1.2研究方法

留取靜脈EDTA抗凝血3mL。（1）IL-10表達測定和分析：取靜脈EDTA抗凝血1mL。采用雙抗體夾心ELISA法測定IL-10的濃度，按照試劑盒（美國R&D公司生產(chǎn)）說明操作。（2）體液免疫功能IgA、IgG、IgM檢測：采用HITACHI7600型全自動生化分析儀檢測，采用免疫透射比濁法測定。（3）細胞免疫應用流式細胞儀檢測淋巴細胞亞群檢測項目包括：CD4+、CD8+、CD16+56+、CD23+、CD25+T淋巴細胞計數(shù)，以及CD19+B淋巴細胞計數(shù)。流式細胞儀（FCM）分析10000個以上細胞。

1.3統(tǒng)計學處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理和分析。計量資料以表示，組間比較用單因素方差分析及t檢驗，計數(shù)資料用x2檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結果

2.1三組免疫球蛋白及IL-10水平比較

輕癥組、重癥組IgM、IL-10水平均高于對照組，重癥組IgG、IgA、IgM、IL-10水平高于輕癥組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2三組淋巴細胞亞群比較

輕癥組、重癥組CD16+56+、CD23+、CD19+高于對照組，CD25+低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），重癥組CD19+高于輕癥組，CD16+56+、CD25+低于輕癥組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；重癥組CD4+、CD8+低于輕癥組及對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

3　討論

HFMD是由腸道病毒感染導致的傳染性疾病，在各個年齡均可發(fā)病，但由于小兒免疫系統(tǒng)功能還沒有發(fā)育完全，且處于較大的變化之中，因此，HFMD多見于5歲以下的嬰幼兒，全年均可發(fā)病，但在夏、秋季節(jié)發(fā)病率相對較高，傳染性較強，流行速度快，常群體性發(fā)病[5]。HFMD主要的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、皮疹，重癥患兒出現(xiàn)嚴重并發(fā)癥，如腦干腦炎、血管神經(jīng)性肺水腫等，使患兒的生長發(fā)育受到嚴重影響，嚴重者甚至危及到生命安全。

HFMD患兒體內(nèi)存在過度炎癥反應現(xiàn)象，IL-10是中性粒細胞的趨化和活化因子，是重要的免疫調(diào)節(jié)因子之一，可調(diào)節(jié)機體免疫，主要表現(xiàn)在趨化性的作用中，主要為誘導細胞形態(tài)的改變，釋放超氧化物和溶酶體酶，促進炎癥反應[6]。輕癥組、重癥組IL-10水平均高于對照組，重癥組高于輕癥組（P＜0.05）。提示HFMD患兒機體存在炎癥反應，體內(nèi)IL-10存在過度表達，并隨著炎癥反應進展持續(xù)大量產(chǎn)生，患兒免疫狀態(tài)紊亂。IL-10主要是由Th2細胞、B細胞和巨噬細胞分泌，抑制Th1細胞和單核-巨噬細胞增殖和活化，促進B淋巴細胞增殖和活化，可對Th細胞免疫平衡進行調(diào)節(jié)，使過度的免疫反應受到抑制[7]，IL-10水平較高提示患兒存在細胞免疫的異常，推測可能是小兒的免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，對輕度炎癥刺激反應不靈敏導致[8]。

在HFMD發(fā)病過程中體液免疫具有重要的免疫監(jiān)視及病毒感染預防作用，體液免疫是機體特異性免疫的重要組成部分。其中IgG是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體，僅以單體形式存在，主要用于中和多種病原體及其有害代謝產(chǎn)物[9]。輕癥HFMD患兒IgM與對照組比較明顯較高，主要由于急性感染期體內(nèi)的體液免疫被激活，產(chǎn)生抗體中和病毒，延緩疾病的進展[10]。重癥組IgG、IgA、IgM水平高于輕癥組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。提示隨著手足口病疾病越來越嚴重，體液免疫能力增強，該結果與相關報道具有一致性[11]。

在免疫應答過程中，末梢血淋巴細胞發(fā)育分化成為T、B、NK細胞等功能不同的亞群，生理狀態(tài)下T細胞的多個亞群相對平衡、穩(wěn)定對機體免疫功能起著調(diào)節(jié)作用，維持著機體的正常免疫應答反應[5]。當亞群的數(shù)量及功能發(fā)生異常時，導致機體免疫紊亂并產(chǎn)生病理變化[12]。有學者研究發(fā)現(xiàn)，T細胞通過釋放多種細胞因子參與機體的免疫應答在手足口病的發(fā)生發(fā)展過程中起了重要的介導作用。研究發(fā)現(xiàn)，輕癥組、重癥組CD16+56+、CD23+、CD19+高于對照組，CD25+低于對照組（P＜0.05），重癥組CD19+高于輕癥組，CD16+56+、CD25+低于輕癥組（P＜0.05）；重癥組CD4+、CD8+低于輕癥組及對照組（P＜0.05），說明EV71病毒引起的HFMD患兒存在細胞免疫功能紊亂，紊亂程度隨疾病程度加重。臨床通常根據(jù)T細胞亞群判定機體免疫細胞功能，T細胞中CD8+、CD4+兩者的比值為機體免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境指標[13]；輕癥組、重癥組CD25+較對照組明顯降低提示HFMD患兒T淋巴細胞及NK細胞均顯著降低，患兒機體的細胞免疫功能下降，抵御病毒感染的能力降低，不能將受感染的細胞有效殺滅，延長了病程，而機體的免疫功能又由于病程的延長而進一步受損，導致病情越來越嚴重[14]。HFMD患兒CD23+較對照組升高，但輕癥組和重癥組無統(tǒng)計學差異，CD23+主要存在于B淋巴細胞表面，是B淋巴細胞活化的標志之一[15]。有報道表明，對腸道病毒感染主要是T淋巴細胞或NK細胞參與防御，在機體有病毒入侵時，NK細胞首先參與應答，NK細胞為固有的免疫應答細胞，無需抗原致敏，可對病毒感染的靶細胞直接進行殺傷，是機體防御病毒感染的第一道防線[16]。

綜上所述，EV71病毒引起的HFMD患兒存在細胞免疫、體液免疫功能紊亂，疾病程度越嚴重，細胞免疫、體液免疫功能紊亂程度越嚴重。提示對HFMD患兒入院時應對上述三項指標進行及時檢測并觀察變化，與患兒的臨床表現(xiàn)相結合，使重癥患兒在早期就可準確的識別并及時采用相應的措施干預，以延緩疾病的進展，以提高患兒的預后，降低死亡率。

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Analysis on the change of HFMD caused by EV71 virus immune status of children

ZHANG Shoubin1HUANG Chenghui2LI Tao1LIAO Hua1XIAO Yi1LONG Yu1HUANG Rimei1TAN Qingyu1HUANG Yan1
1.Department of Pediatrics，Southern Medical University Affiliated of Shenzhen Baoan Hospital, Shenzhen 518100, China;
2.Department of Infectious, Southern Medical University Affiliated of Shenzhen Baoan Hospital, Shenzhen 518100, China

Objective To investigate the cause of EV71 HFMD child immunization status changes. Methods 120 cases with hand, foot and mouth disease were selected from June 2013 to December 2014 in our hospital, according to severity they were divided into the mild group(n=60), the severe group(n=60), 60 cases of children were collected came to our hospital for normal healthy physical examination as the same period as the mild group and the severe group and considered them as the control group. IL-10 level, humoral and cellular immune function of three groups were measured. Results IgM, IL-10 levels of the mild group, severe group were higher than the control group, IgG, IgA, IgM, IL-10 levels of the severe group was higher than mild group (P＜0.05). CD16+56+, CD23+, CD19+of Mild group, severe group was higher than the control group, CD25+of the Mild group, severe group was lower than the control group (P＜ 0.05), CD19+ of the severe group was higher than the mild group, CD16+56+，CD25+was lower than the mild group (P＜0.05); CD4+, CD8+of the severe group was lower than the mild group and the control group (P＜ 0.05). Conclusion Children with HFMD caused by EV71 virus exists cellular immunity, humoral immune dysfunction, the more severe the disease extent, cell-mediated immunity, humoral immune dysfunction more serious degree, should increase attention to timely detect and improve the prognosis of children and reduce mortality.

HFMD; EV71; Immune function

R725.1

B

2095-0616（2015）09-49-03

廣東省深圳市衛(wèi)生和人口計生委員會醫(yī)療衛(wèi)生類科研項目（201302164）。

（2015-02-13）