張衛(wèi)云，任廣立，伍令燦，孫朝暉，李林海

廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院a.檢驗(yàn)科；b.兒科；廣東 廣州 510010

全球約有20 億人曾感染過乙肝病毒（hepatitis B virus，HBV），其中3.5億人為慢性HBV感染者，幾乎一半在中國。我國作為乙型肝炎的高感染區(qū)，嚴(yán)重威脅著人們的身體健康。急性乙肝中有20%會(huì)轉(zhuǎn)為慢性，進(jìn)而可能發(fā)展為肝硬化和肝癌。因此，準(zhǔn)確、迅速的診斷對(duì)乙肝的療效和預(yù)后極為重要。HBV對(duì)肝功能的損害機(jī)制非常復(fù)雜[1-2]，臨床中常將外周血中HBV-DNA含量作為病毒復(fù)制活躍最可靠和直接的指標(biāo)[3]，其高低能直接反映肝炎患者的病毒水平；而常常將血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）水平作為反映肝細(xì)胞功能的指標(biāo)，因?yàn)橥ǔ４嗣冈诟渭?xì)胞漿內(nèi)含量最為豐富，當(dāng)肝炎病毒損害肝細(xì)胞時(shí)其從胞漿內(nèi)釋放到血清中，使血清中的含量升高[4]。本研究探討乙型肝炎患者血清中乙肝表面抗原（HBsAg）定量與HBV-DNA 定量及ALT 水平的相關(guān)性，旨在為進(jìn)一步研究HBC 復(fù)制、感染性及臨床抗病毒的治療提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象

收集廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院2014年10月至12月乙肝患者血清124 例，檢測(cè)HBsAg、HBV-DNA 及ALT的血清水平?；颊咂骄挲g為39.6±13.4歲，同時(shí)排除其他疾病的干擾。

1.2 研究方法

HBsAg 定量采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)，儀器為雅培公司的i-2000 全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀，試劑為原裝配套試劑，操作過程嚴(yán)格按照SOP文件執(zhí)行。HBV-DNA定量采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 法檢測(cè)，儀器為美國Bio-Rad PCR 儀，試劑盒購于上?？迫A生物科技有限公司，血清HBV-DNA陽性（＞500拷貝/mL）作為病毒復(fù)制的標(biāo)準(zhǔn)。血清ALT 采用日立7600 全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，試劑采用廣州科方生物技術(shù)有限公司提供的試劑盒。

根據(jù)HBsAg 水平把乙肝患者分成3 組，即≤1000 IU/mL 組、1000～10 000 IU/mL 組和≥10 000 IU/mL 組。按照HBV-DNA 含量的高低分成4組，即≤500 拷貝/mL（Ⅰ級(jí)）組、500～104拷貝/ml（Ⅱ級(jí)）組、104～106拷貝/mL（Ⅲ級(jí)）組和≥106拷貝/ml（Ⅳ級(jí)）組。根據(jù)ALT 水平分成3 組，即≤40 U/L 組、41～100 U/L組和＞100 U/L組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用Excel軟件建立數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。差異性比較兩組資料時(shí)采用t檢驗(yàn)，多組采用χ2分析，相關(guān)分析采用Spearman。

2 結(jié)果

2.1 乙型肝炎患者HBsAg 定量與ALT 水平的相關(guān)分析

124例乙型肝炎患者HBsAg 定量與ALT水平的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。經(jīng)檢驗(yàn)，χ2=0.918＜9.49（χ20.05，4），P＞0.05，3 組不同HBsAg 水平的患者血清ALT 含量無顯著性差異。經(jīng)Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)，等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.117（P=0.195），說明患者血清HBsAg 水平與ALT含量無明顯的相關(guān)關(guān)系。

2.2 乙型肝炎患者HBsAg 定量與HBV-DNA 含量的相關(guān)分析

124 例乙型肝炎患者HBsAg 定量與HBV-DNA含量的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表2。經(jīng)檢驗(yàn)，χ2=23.85＞22.46（χ20.001，6），P＜0.001,說明HBsAg 水平與患者血清HBV-DNA 含量有相關(guān)性。經(jīng)Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)，等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.286（P＜0.01），表明乙肝患者血清HBsAg 水平與HBV-DNA 含量存在正相關(guān)關(guān)系，即HBsAg含量越高，HBV-DNA水平越高。

表1 124例HBV患者HBsAg定量與ALT水平分組結(jié)果

2.3 乙型肝炎患者HBV-DNA含量與ALT水平的相關(guān)分析

124 例乙型肝炎患者HBV-DNA 含量與ALT 水平的統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。經(jīng)檢驗(yàn)，χ2=22.89＞22.46（χ20.001，6），P＜0.001，說明HBV-DNA含量與患者血清ALT 水平有相關(guān)性。經(jīng)Spearman 秩相關(guān)檢驗(yàn)，等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.387（P＜0.01），表明乙肝患者的血清HBV-DNA 含量與ALT 水平存在正相關(guān)關(guān)系，即HBV-DNA含量越高，ALT水平越高。

表2 124例HBV患者HBsAg定量與HBV-DNA含量分組結(jié)果

表3 124例HBV患者HBV-DNA含量與ALT水平分組結(jié)果

3 討論

血清HBsAg、HBV-DNA 含量和ALT 水平都是反映乙肝患者肝功能的重要指標(biāo)。HBsAg主要反映機(jī)體的乙肝感染狀態(tài)；HBV-DNA 含量能直接而真實(shí)地體現(xiàn)機(jī)體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制程度和傳染性；ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中，是反映肝損害極為敏感的生化指標(biāo)[5]，當(dāng)大量肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞損傷時(shí)，肝細(xì)胞膜的通透性增大，使血清中的ALT水平顯著升高，因此其血清水平的改變能反映肝損傷程度，同時(shí)也能反映機(jī)體對(duì)HBV的免疫強(qiáng)度。

本研究選取124 例HBsAg 定量檢測(cè)陽性標(biāo)本，檢測(cè)其HBV-DNA 含量和ALT 水平，分析HBsAg 與HBV-DNA 和ALT 的相關(guān)性。研究發(fā)現(xiàn)，乙肝患者的血清HBsAg 水平與ALT 含量無明顯的相關(guān)性，等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.117（P=0.195）；而HBsAg 與HBVDNA 含量存在正相關(guān)關(guān)系，等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.286（P＜0.01）；同時(shí)HBV-DNA 含量與ALT 存在正相關(guān)性，等級(jí)相關(guān)系數(shù)為0.387（P＜0.01）。乙肝患者的血清HBsAg 水平與ALT 含量的相關(guān)性不明顯，可能與患者免疫狀態(tài)存在差異或抗病毒治療相關(guān)，因此單獨(dú)用HBsAg 水平判定肝細(xì)胞的損害程度須慎重[6]。乙肝病毒進(jìn)入被感染的肝細(xì)胞后立即在細(xì)胞中不同部位開始裂解復(fù)制，產(chǎn)生許多病毒“零件”：含有DNA 和酶類的核心，病毒的外殼。外殼有3 種顆粒形式，一是含有外膜和核衣殼的完整病毒粒子，稱作Dane（丹氏）顆粒，直徑45 nm；二是由空心包膜組成的球形顆粒，直徑20 nm，其含量一般要超過Dane顆粒10 000～1 000 000倍；三是少量由空心包膜構(gòu)成的管狀顆粒，直徑20 nm，斷裂后可形成小球形顆粒[7]。3種病毒外殼顆粒都有共同的HBV表面抗原，外殼的數(shù)量總比核心的數(shù)量要多，過剩的病毒外殼釋放到血液中，以小球形或管形顆粒的形式存在于血液中并隨之循環(huán)，這些小顆粒就是在血清中檢查到的表面抗原。由此可見，HBsAg 含量受HBVDNA 翻譯為外殼蛋白質(zhì)的量和肝臟組織釋放乙肝病毒外殼的數(shù)量的影響，即與HBV-DNA 的含量有相關(guān)性，與本次研究相符。肝臟細(xì)胞不被破壞，同樣可大量釋放乙肝病毒外殼（即HBsAg），所以乙肝患者的血清HBsAg 水平與ALT 含量無明顯的相關(guān)性。定量檢測(cè)血清中的HBV-DNA含量主要來自兩部分，一為肝細(xì)胞分泌的完整乙肝病毒，二為機(jī)體清除乙肝病毒的同時(shí)啟動(dòng)了宿主針對(duì)HBV 的免疫應(yīng)答，造成肝細(xì)胞的破壞而釋放的大量乙肝病毒，所以HBV-DNA 含量與ALT 水平存在相關(guān)性受機(jī)體的免疫狀態(tài)影響。

由表1 可見，124 例HBsAg 定量陽性中HBVDNA定量陰性的有55例，占44%，這表明雖然HBVDNA 定量檢測(cè)提示病毒復(fù)制已得到抑制，但它不足以反映表面抗原的清除[8]。HBV-DNA 陰性時(shí)肝功能正?？梢哉f明病情處于較為穩(wěn)定的階段，表示乙肝病毒復(fù)制不活躍，處于低復(fù)制或不復(fù)制的狀態(tài)。另外，由于肝臟組織中的乙肝病毒每時(shí)每刻釋放到血液中的數(shù)量都在變化之中，每天檢測(cè)血液中的乙肝病毒核酸含量也不盡相同。其次，HBV-DNA 的定量采用了實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)法，最低檢測(cè)限只有500 拷貝/mL，如果服用抗病毒藥物，可抑制HBVDNA 的復(fù)制，而由于HBV-DNA 整合到肝細(xì)胞基因組中，不影響其翻譯蛋白質(zhì)外殼，使血清中HBVDNA含量小于500拷貝/mL，同樣導(dǎo)致HBsAg定量陽性而HBV-DNA 陰性的結(jié)果。有文獻(xiàn)報(bào)道，HBV 基因的S區(qū)發(fā)生有意義的點(diǎn)突變或插入、缺失突變，亦可導(dǎo)致PCR結(jié)果陰性[9]。

[1]陳兆軍,張臘紅,朱明利,等.多色熒光PCR 法檢測(cè)HBV 耐藥位點(diǎn)突變[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2010,24(6):473-475.

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[4]胡旭,劉紅霞,任東方.乙型肝炎病毒感染患者的聯(lián)合檢測(cè)臨床意義[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,24(15):3890-3892.

[5]王元,朱亞洲,種瑩,等.乙肝患者血清的HBV-DNA 含量與ALT 水平的關(guān)系研究[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014,14(29):5735-5737.

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