張海波 張國禹 黃桂云 吳笛 胡梅香

（長江三峽生態(tài)園林有限公司，湖北宜昌 443000）

蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)研究

張海波 張國禹 黃桂云 吳笛 胡梅香

（長江三峽生態(tài)園林有限公司，湖北宜昌 443000）

自古以來，人們都有發(fā)現(xiàn)美、欣賞美的藝術(shù)追求。花卉等具有“美”的特質(zhì)的植物理所當(dāng)然的成為了養(yǎng)殖、欣賞的對(duì)象。在幾十年以前，我國人民尚徘徊在生存的邊緣，無暇追求美麗事物，隨著我國社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活水平的也逐漸提升，人們?cè)絹碓街匾暽钪械拿??；ɑ茏鳛槿藗冃蕾p美的載體，不論是各類慶典、宴會(huì)，還是環(huán)境綠化建設(shè)等都是不可或缺的。蝴蝶蘭的花形奇特，類似蝴蝶，色彩艷麗鮮明，花期持久，是最適合作為觀賞植物的花種之一。

蝴蝶蘭 組織培養(yǎng) 培育材料 培育方法 激素配方

蝴蝶蘭具有極高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值，是當(dāng)今國際上商業(yè)價(jià)值最大的熱帶蘭花之一。但因?yàn)楹m屬于單莖性氣生蘭，其再生能力不強(qiáng)，因此要進(jìn)行分株繁殖顯得異常困難。蝴蝶蘭的種子十分細(xì)小，在一般的自然條件下很難發(fā)芽，這也導(dǎo)致其增殖系數(shù)極低。雖然其有較高的觀賞價(jià)值，但是因?yàn)椴灰尊B(yǎng)殖，所以在市場上的蝴蝶蘭顯得極為珍貴。為了提高蝴蝶蘭的繁殖力，相關(guān)的專家人員利用組織培養(yǎng)法進(jìn)行蝴蝶蘭的快速繁殖，并取得了成功。蝴蝶蘭的組織培養(yǎng)程序?yàn)椋哼x取外植體——誘導(dǎo)形成不定芽——增殖不定芽——分化小植株——生根壯苗培養(yǎng)——溫室移栽。這整個(gè)程序都是根據(jù)蝴蝶蘭的生長習(xí)性而設(shè)計(jì)的，對(duì)蝴蝶蘭的培育有著顯著效果，解決了以前在蝴蝶蘭工廠化快速繁殖中遇到的技術(shù)問題，增加了蝴蝶蘭的成活率。本文就蝴蝶蘭的組培方案進(jìn)行了分析，首先闡述了蝴蝶蘭組織培育中必須要準(zhǔn)備的材料，然后闡述了蝴蝶蘭組織培育的方法。期望通過本文的分析，能夠讓讀者對(duì)蝴蝶蘭的組培方案有更加深刻的認(rèn)識(shí)。

1 蝴蝶蘭組織培育中必須要準(zhǔn)備的材料

在蝴蝶蘭組織培育中可以作為外植體的有蝴蝶蘭的嫩莖、花梗、葉片、莖段、莖尖等。必須要確保所取外植體的原蝴蝶蘭沒有蟲害、沒有病害，生長狀態(tài)要極好。本文所選蝴蝶蘭是白瓣紅唇蝴蝶蘭。若取花梗作為材料，則要剪去上端無須的花梗，剪成長度為五至十厘米的小段。若取葉片為材料，則要先取花梗進(jìn)行誘導(dǎo)，當(dāng)獲得蝴蝶蘭無菌苗后，待其成長為2葉苗時(shí)，再取其葉片或是莖尖作為培育材料。

表1 花梗誘導(dǎo)不定芽培養(yǎng)基編號(hào)表

表2 不定芽增殖培養(yǎng)基編號(hào)

2 蝴蝶蘭組織培育的方法

2.1 不同外植體的消毒

不同外植體的消毒可分為三個(gè)步驟，下面就對(duì)這三個(gè)步驟進(jìn)行仔細(xì)分析。

（1）第一步：在取得蝴蝶蘭的培育材料以后，需要先對(duì)其進(jìn)行清理，去除多余的部分，將主要的部分清洗干凈。然后將材料剪成適當(dāng)大小，以能放入滅菌容器中的大小為宜。將剪好的培育材料放在水龍頭下沖洗，沖洗的時(shí)間要根據(jù)材料的清潔程度而定，可能是幾分鐘，也可能是幾小時(shí)。在污染嚴(yán)重的情況下，流水清洗是最有效的清潔方式。在清洗的過程中，可以適當(dāng)加入少量的洗衣粉，洗衣粉能夠很容易的去除附著在材料上的污物，尤其是脂質(zhì)性的污物。再用自來水將洗衣粉水清洗干凈。為了使清洗的效果更好，還可以適當(dāng)?shù)募尤氡砻婊钚晕镔|(zhì)——“吐溫”。

（2）第二步：培育材料的表面浸潤滅菌。首先要準(zhǔn)備好滅菌的器械，比如玻璃棒、燒杯、無菌水、70%酒精、消毒液等等。先在燒杯中倒入消毒溶液，并加幾滴消毒助劑Tween-80，在消毒的過程中要不斷的用玻璃棒進(jìn)行輕輕攪動(dòng)，這樣有助于消毒液與培育材料的充分接觸，能夠驅(qū)除氣泡，使消毒更為徹底。在設(shè)計(jì)的消毒時(shí)間結(jié)束之前的一到兩分鐘，就可以將消毒液慢慢傾入另一個(gè)燒杯，切記不要將材料也倒入另一個(gè)燒杯。在消毒液倒完以后，立即注入無菌水進(jìn)行涮洗，涮洗結(jié)束以后，再用自來水沖洗30～60min。接著在超凈工作臺(tái)上，將已經(jīng)切割好的材料用準(zhǔn)備好的酒精清洗半分鐘時(shí)間，再用無菌水進(jìn)行沖洗，完成以后，如果所取材料是葉片，則將其放入0.1%HgCI溶液中浸泡八到十二分鐘左右的時(shí)間，再用無菌水沖洗五到八次；如果所取材料是花梗，則將其放入0.1%HgCI溶液中浸泡十到二十分鐘，再使用無菌水沖洗三到五次。

（3）第三步：使用無菌水涮洗。無菌水涮洗的主要目的是免除消毒劑對(duì)材料細(xì)胞的副作用，在使用無菌水涮洗的過程中，必須要堅(jiān)持涮洗五到十次，每次清洗都要確保持續(xù)時(shí)間在30s以上。其中必須要注意的幾點(diǎn)：1）在酒精中浸泡的時(shí)間要短，避免因浸泡過久導(dǎo)致材料失綠；2）對(duì)于老熟材料，比如種子等，要在酒精中浸泡久一點(diǎn)；3）升汞的滲透力較弱，可以多浸泡一些時(shí)間；4）在消毒液中加入濃度在0.08%～012%之間的Tween-20或是Tween-80，能夠降低植物材料表面的張力，使消毒效果更加明顯。

2.2 培養(yǎng)基激素配方

初代培養(yǎng)的目的是為了誘導(dǎo)類不定芽（PLB）或叢生芽，基本培養(yǎng)基為2/3MS培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基中均要加入蔗糖、瓊脂、碳粉等，蔗糖的加入量為20mg.L-1，瓊脂的加入量為5mg.L-1，碳粉的加入量為AC1.0mg.L-1。接種之后，將其放入暗培養(yǎng)室25～30小時(shí)，再改為光照培養(yǎng)，此時(shí)溫度應(yīng)該控制在23～25℃之間，日光燈照明的強(qiáng)度為2000 Lux，光照時(shí)間設(shè)定為10h/d。其具體配方如下表1所示。一般情況下，30小時(shí)以后，就會(huì)分化出新芽。在30小時(shí)以后，再開始統(tǒng)計(jì)，選擇出分化最好的培養(yǎng)基。

表3 瓶苗質(zhì)量分級(jí)

2.3 不定芽增殖

將花梗初代培養(yǎng)萌發(fā)的不定芽切下，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上，如表2所示。每隔40～50天就繼代增殖一次，次數(shù)不宜超過15次。隨著繼代增殖次數(shù)的增加，6-BA的濃度也隨著降低。在接種的過程中，要確保材料不受到傷害。培養(yǎng)室的溫度要控制在24～28℃之間，光照強(qiáng)度要控制在1900～2100Lux之間，光照時(shí)間以10h/d最合適。培養(yǎng)基的附加材料與基本培養(yǎng)基一致。

2.4 生根

在生根培養(yǎng)期間，其溫度要控制在24～28℃，光照強(qiáng)度要設(shè)置在4000～10000Lux，時(shí)間要設(shè)置為12h/d。若是直接利用太陽散射光也可以。當(dāng)芽生長到有兩三片葉子，葉長有一到兩厘米時(shí)，此時(shí)可將芽單個(gè)分開，按大小分級(jí)接種到生根培養(yǎng)基中。

2.5 煉苗移栽

當(dāng)苗長至2～3cm，有1～3根條根和3～4片葉子時(shí)，便可進(jìn)行煉苗。先取掉瓶蓋，將其置于常溫室內(nèi)的散射光下，煉苗六天左右，然后再取出試管苗，將其附著的瓊脂清洗干凈，放入1000倍的多菌靈溶液中浸泡20s，再取出晾干，接著將其栽到不同的基質(zhì)中。基質(zhì)可以使用水苔、樹皮塊以及水苔和蕨根按1：1配合這三種。在移栽以前，必須要對(duì)基質(zhì)進(jìn)行消毒處理。具體的管理方法宜采用溫室內(nèi)小拱棚的方式。首先是環(huán)境設(shè)計(jì)，必須要將拱棚內(nèi)的溫度控制在18～28℃之間，棚內(nèi)必須要有太陽散射光，光照強(qiáng)度為5000～8000Lux。其次是管理方面，移栽以后，每天都要對(duì)其進(jìn)行噴霧澆水兩次左右，前兩周時(shí)間，要將濕度控制在80%～90%之間，后面幾周要將濕度保持在70%～80%。瓶苗質(zhì)量的要求必須做到：根系粗壯、品種純正、無污染、不徒長、變異率小于5%。見表3。

3 結(jié)語

總而言之，蝴蝶蘭組織培育方式是當(dāng)前最為有效的培育方式，雖然其中還有很多方面需要完善，但是只要通過試驗(yàn)和努力，必定會(huì)將該方法打造得更加完美和可行。

［1］王玲，陳發(fā)棣，陳鳳，等.蝴蝶蘭花梗芽的初代誘導(dǎo)［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（12）：68-71.

［2］楊華庚.高溫脅迫對(duì)蝴蝶蘭幼苗葉綠素及其熒光參數(shù)的影響［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（19）：177-183.

［3］劉學(xué)慶，孫紀(jì)霞，丁朋松等.低溫脅迫對(duì)蝴蝶蘭內(nèi)源激素的影響［J］.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34（3）：464-469.

［4］蔣瑞萍，李蘋，徐培智等.花卉緩/控釋復(fù)合肥對(duì)盆栽蝴蝶蘭生長發(fā)育及其觀賞性的影響［J］.中國農(nóng)學(xué)通報(bào)，2012，28（19）：184-188.

［5］王玲，陳發(fā)棣，陳鳳等.不同培養(yǎng)基及不同添加物對(duì)蝴蝶蘭花梗芽增殖生長的影響［J］.江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（1）：56-57，103.

張海波（1980—），男，內(nèi)蒙古赤峰人，工程師，主要從事三峽珍稀瀕危野生植物繁育與保護(hù)方面的研究工作。