梁思婷，董 輝，朱順海，韓紅玉，趙其平，吳 迪，翟 頎，李 莎，楊斯涵，4，裴恩樂，黃 兵，5

（1.上海師范大學生命與環(huán)境科學學院，上海 200234；2.中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點開放實驗室，上海 200241；3.上海市野生動植物保護管理站，上海 200023；4.云南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，昆明 650201；5.江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，揚州 225009）

喜鵲和山斑鳩體內(nèi)棘口科吸蟲的種類鑒定

梁思婷1，2，董 輝2，朱順海2，韓紅玉2，趙其平2，吳 迪3，翟 頎2，李 莎2，楊斯涵2，4，裴恩樂3，黃 兵2，5

（1.上海師范大學生命與環(huán)境科學學院，上海 200234；2.中國農(nóng)業(yè)科學院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學重點開放實驗室，上海 200241；3.上海市野生動植物保護管理站，上海 200023；4.云南農(nóng)業(yè)大學動物科學技術(shù)學院，昆明 650201；5.江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，揚州 225009）

為鑒定喜鵲和山斑鳩體內(nèi)棘口吸蟲種類，本文采用形態(tài)學結(jié)合分子生物學方法對其進行了種類鑒定。分子生物學結(jié)果顯示，來源于喜鵲和山斑鳩蟲體的線粒體NADH脫氫酶1（ND1）基因同源性為99%，在構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹中，兩種鳥的蟲體ND1序列歸類在同一分支，與其親緣關(guān)系最近的是強壯棘口吸蟲（Echinostoma robustum）和弗氏棘口吸蟲（E. friedi）。形態(tài)學觀測結(jié)果顯示，來自同一種鳥的蟲體具有相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，而兩種鳥之間的蟲體形態(tài)存在一定差異；通過比較所獲得蟲體與強壯棘口吸蟲、弗氏棘口吸蟲之間的形態(tài)特征，發(fā)現(xiàn)這兩種鳥體內(nèi)檢出的棘口吸蟲均與弗氏棘口吸蟲的的形態(tài)特征更為相符。結(jié)合分子生物學和形態(tài)學鑒定的結(jié)果，確定感染喜鵲和山斑鳩的棘口科吸蟲均為弗氏棘口吸蟲，這是弗氏棘口吸蟲在國內(nèi)的首次報道，喜鵲和山斑鳩應為弗氏棘口吸蟲的新宿主。

棘口屬；NADH脫氫酶1；弗氏棘口吸蟲；喜鵲；山斑鳩

棘口科吸蟲（Echinostomatidae Dietz，1909）是主要寄生于鳥類和哺乳類動物腸道的小型寄生蟲，種類多，呈世界性分布［1］。已記錄的棘口科吸蟲有600多種，其中400多種寄生于鳥禽類，近70種寄生于哺乳動物，20余種寄生于人體［2］。我國已報道了棘口科吸蟲100多種［3］，寄生于家畜家禽的有78種［4］，寄生于人體的有15種，其中12種為人獸共患寄生蟲［2］。感染棘口科吸蟲，不僅可造成幼鳥禽的生長發(fā)育遲緩［5，6］，還可造成幼兒全身衰竭而死亡［7］。隨著人類生活水平的提高，人與鳥類的接觸越來越頻繁，人類感染棘口科吸蟲的機會大大增高。因此，對棘口科吸蟲的研究，不僅有利于鳥類寄生蟲病的防控，而且有利于提高人們防范人獸共患寄生蟲病的意識，具有重要的公共衛(wèi)生學意義。

本課題組于2012年對來源于曹家渡花鳥市場和龍川北路花鳥市場的103只鳥進行了寄生蟲感染情況調(diào)查，共檢出吸蟲268條［8］。隨后，我們對來源于喜鵲（Pica pica）和山斑鳩（Streptopelia orientalis）腸道吸蟲進行了初步形態(tài)學鑒定，其中有17條為棘口科吸蟲。為了明確上海市鳥類感染的棘口科吸蟲蟲種，本文采用分子生物學與形態(tài)學結(jié)合的方法對所獲得的棘口科吸蟲進行了鑒定。

1 材料與方法

1.1 蟲體來源 17條棘口科吸蟲中有14條蟲體來自上海曹家渡花鳥市場的喜鵲，3條來自龍川北路花鳥市場的山斑鳩。將蟲體自腸道取出后，70%酒精保存。分別從喜鵲源和山斑鳩源蟲體中隨機選取3條和1條用于分子生物學鑒定，其余13條用于形態(tài)學鑒定。

1.2 分子生物學檢測

1.2.1 蟲體DNA提取 剪取2～3 mm蟲體，置于研磨器內(nèi)研磨破碎，使用TIANamp Genomic DNA Kit提取蟲體DNA，-20℃保存。

1.2.2 線粒體NADH脫氫酶1（ND1）基因克隆和序列測定 根據(jù)文獻［9］報道的棘口科吸蟲ND1基因序列設計并合成引物，ND1-UP-JB11（5'-AGA TTC GTA AGG GGC CTA ATA-3'）和ND1-LOW-JB12（5'-ACC ACT AAC TAA TTC ACT TTC-3'），以提取的蟲體DNA為模板，進行常規(guī)PCR擴增ND1基因。反應體系20 μL，反應參數(shù)：94℃預變性2 min；94℃變性30 s，48℃退火20 s，72℃延伸1 min，共39個循環(huán)；72℃延伸10 min。用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物，并用TIANgel Midi Purification Kit對目的基因進行純化，保存于-20℃。將膠回收產(chǎn)物與pGEM-T-easy vector連接后，轉(zhuǎn)化TOP10感受態(tài)細胞，挑取單克隆培養(yǎng)，經(jīng)PCR鑒定為陽性后，送上海桑尼生物技術(shù)有限公司進行測序。

1.2.3 ND1序列分析和系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建 將測序結(jié)果通過NCBI上的Vector Contamination工具去除載體序列后，用BLAST程序進行同源比對。從GenBank下載相關(guān)的棘口科吸蟲ND1序列21條，其中棘口屬（Echinostoma）的強壯棘口吸蟲（E. robustum）4條，弗氏棘口吸蟲（E. friedi）1條，卷棘口吸蟲（E. revolutum）7條，E. trivolvis 2條，E.paraensei 2條，凱氏棘口吸蟲（E.caproni）2條，棘緣屬（Echinoparyphium）的曲領棘緣吸蟲（E. recurvatum）1條，低頸屬（Hypoderaeum）的似錐低頸吸蟲（H. conoideum）1條，似頸屬的（Isthmiophora）獾似頸吸蟲（I. melis）1條，選取片形科（Fasciolidae）原片屬（Protofasciola）的強壯原片吸蟲（P. robusta）作為外群（表1），用MEGA 6.06中的鄰接法（Neighbour-joining，NJ），基于Kimura 2-parameter模型構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，自展檢驗1000次，以估計可靠性。

1.3 形態(tài)學觀測

1.3.1 蟲體封片標本制備 將蟲體從70%酒精保存液中取出，置于EP管內(nèi)，42℃水浴2 h，使蟲體變?nèi)彳?。用兩片載玻片壓住蟲體，放入70%酒精中固定3～5d后，按照文獻［10］的方法進行沖洗、染色、脫水、脫色、再脫水、透明、封片，制備封片標本。

表 1 構(gòu)建進化樹所用的棘口科吸蟲種株及相關(guān)信息Table 1 Species of Echinostomatidae analyzed phylogenetically using ND1 gene sequences and related information

1.3.2 標本的觀察、拍照、測量與繪圖 將制作好的蟲體標本置于生物顯微鏡（型號：Nikon Eclipse 50i）和體視顯微鏡（型號：Olympus SZX16）下觀察，拍照并測量蟲體的長寬和頭襟、頭棘、口吸盤、前咽、咽、食道、腹吸盤、卵巢、睪丸等器官的大小，根據(jù)標本描繪蟲體的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖。

1.4 蟲種的判定 綜合分子生物學檢測和形態(tài)學觀測結(jié)果，并與近緣蟲種進行形態(tài)特征的比較，最終確定喜鵲源和山斑鳩源棘口吸蟲的種類。

2 結(jié)果

2.1 分子生物學檢測結(jié)果 用于分子生物學檢測的4個蟲體均成功擴增出棘口科吸蟲的ND1基因，大小均為530 bp（圖1）。將喜鵲源蟲體的序列命名為N06-1、N06-2和N10，山斑鳩源蟲體序列命名為N65。N06-1、N06-2和N10之間的同源性為99%，他們與N65的同源性均為99%。通過BLAST同源性比對，4條ND1基因序列與已報道的強壯棘口吸蟲（E. robustum）（GenBank登錄號：AF025832）和弗氏棘口吸蟲（E.friedi）（GenBank登錄號：AJ564379）的同源性最高，分別為91%和90%。構(gòu)建的進化樹見圖2，所獲得的4條序列歸類在同一分支，自展支持率為100，此單源支在棘口屬吸蟲的大分支內(nèi)，與強壯棘口吸蟲和弗氏棘口吸蟲的親緣關(guān)系最近，且有較高的自展支持率；與同屬的卷棘口吸蟲、凱氏棘口吸蟲、E.trivolvis、E.paraensei的親緣關(guān)系較遠，與不同屬的似錐低頸吸蟲、曲領棘緣吸蟲、獾似頸吸蟲的親緣關(guān)系更遠，位于不同的分支上。

2.2 形態(tài)學觀測結(jié)果 13個蟲體封片標本的形態(tài)學觀察顯示，來自同一種鳥的蟲體具有相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，而兩種鳥之間的蟲體形態(tài)存在一定的差異（圖3A、圖4A）。蟲體測量結(jié)果也存在差異，13條蟲體各器官大小相關(guān)數(shù)據(jù)見表2。因喜鵲源棘口吸蟲數(shù)量多，其形態(tài)學特征更具代表性，將其重點描述，而對山斑鳩源棘口吸蟲的形態(tài)特征主要簡述其與喜鵲源棘口吸蟲的差別。

圖 1 棘口科吸蟲 ND1 基因 PCR 擴增結(jié)果Fig.1 PCR-amplified results of ND1 gene of Echinostomatidae

圖 2 基于 ND1 基因序列構(gòu)建的 NJ 樹Fig.2 Construction of NJ tree based on ND1 gene sequences

2.2.1 喜鵲源棘口吸蟲的形態(tài)特征 蟲體呈長葉狀，向腹面卷曲，檢測11個蟲體，長寬為（6.470～9.319）mm×（1.718～1.987） mm，蟲體最寬處位于腹吸盤與卵巢間（圖3A、B）。頭冠發(fā)達呈腎形，大小為（0.275～0.401） mm×（0.504～0.727） mm。具有頭棘37枚，其中左右腹角棘各5枚，排成兩列，上列3枚、下列2枚；左右側(cè)棘各6枚，呈單列排列；背棘15枚，前后兩排相互排列；頭棘平均大小為（0.065～0.112）mm×（0.016～0.031）mm（圖3C、3D）。體表被有三角狀體棘，自頭冠開始分布至后睪，體前部密集，腹吸盤后逐漸稀疏（圖3E）?？谖P位于蟲體前端腹面，扁圓形，大小為（0.229 ～ 0.283）mm×（0.236～0.345）mm。腹吸盤位于蟲體前1/5，肌質(zhì)，似球狀，大小為（0.802～0.961）mm×（0.791～0.918） mm。前咽長0mm～0.160mm，個別標本的前咽不明顯。咽較發(fā)達，短橢圓形，大小為（0.240～0.320）mm×（0.190～0.227）mm。食道長（0.459～0.633）mm，向后伸至腹吸盤前，形成腸叉，兩腸管沿蟲體兩側(cè)向后延伸至蟲體亞末端。睪丸2枚，位于蟲體3/4處，兩腸管之間，前后排列或略有重疊，邊緣凹陷呈2～3個淺裂瓣，前睪大小為（0.486～0.755）mm×（0.654～0.928）mm，后睪大小為（0.589～0.866）mm×（0.653～0.855）mm。雄莖囊呈橢圓形，位于腸叉與腹吸盤中部之間，其始端常與腹吸盤的中部相重疊，大小為（0.414～0.629）mm×（0.293～0.390）mm。雄莖囊內(nèi)有長卵形儲精囊、前列腺和彎曲的射精管，生殖孔位于腹吸盤前緣，開口于生殖腔。卵巢1個，橫橢圓形，位于蟲體中部或稍后，前睪之前，大小為（0.220～0.416）mm×（0.485～0.682）mm。從卵巢后緣伸出輸卵管，后接卵模，外周有發(fā)達的卵殼腺。卵黃腺發(fā)達，呈濾泡狀，排列致密，自腹吸盤后緣開始，沿蟲體兩側(cè)向后延伸，直至蟲體亞末端，并將兩側(cè)的腸管覆蓋，睪丸后方的左右卵黃腺接近蟲體中央，大部分蟲體中央?yún)R合。卵黃管在前睪前緣匯合，形成三角形的卵黃囊。子宮很長，橫向彎曲于卵巢與腹吸盤之間，內(nèi)含大量蟲卵，最終形成肌質(zhì)的子宮末段，開口于生殖腔。排泄管呈Y形，于后睪后緣匯合形成排泄囊，排泄孔開口于蟲體末端。蟲卵呈長卵形，金黃色或黃褐色，前端具卵蓋，后端皺褶（圖3F），大小為（67～112）μm×（44～82）μm。

表 2 喜鵲源和山斑鳩源棘口吸蟲各器官的大小（μm）Table 2 The dimension of organs of parasite from Pica pica and Streptopelia orientalis （μm）

2.2.2 山斑鳩源和喜鵲源棘口吸蟲的形態(tài)特征差異來自山斑鳩的棘口吸蟲的形態(tài)特征（圖4）與來自喜鵲的存在一定差異。主要表現(xiàn)：蟲體各器官均較小，頭頸部彎曲（圖4A、B），出現(xiàn)頭棘不全或丟失，其中一條蟲體的頭棘無法觀察，而另一條僅觀察到34枚，且腹角棘分布不規(guī)則（圖4C、D）。睪丸位于蟲體中部至后1/2，邊緣略微凹陷，前睪稍寬呈類圓形，后睪稍長呈縱橢圓形。雄莖囊為長橢圓形，位于腹吸盤中部，其始端常與腹吸盤的后半部相重疊，雄莖囊的長度占腹吸盤長度的89%。卵巢位于體中部稍前，卵黃腺于體末端不匯合。其余特征與喜鵲的相似。

圖 3 喜鵲腓氏棘口吸蟲形態(tài)Fig. 3 The morphology of Echinostoma friedi from Pica pica

圖 4 山斑鳩腓氏棘口吸蟲形態(tài)Fig. 4 The morphology of Echinostoma friedi from Streptopelia orientalis

2.3 鑒定結(jié)果 序列分析和進化樹結(jié)果表明，喜鵲源和山斑鳩源棘口吸蟲為棘口屬的同一種吸蟲，該種吸蟲與強壯棘口吸蟲和弗氏棘口吸蟲的同源性最高。將形態(tài)學的觀測結(jié)果分別與文獻報道的弗氏棘口吸蟲［16］、強壯棘口吸蟲［17］進行比較（表3），發(fā)現(xiàn)在食道長度、體棘分布、睪丸形態(tài)和位置等方面所獲蟲體與強壯棘口吸蟲存在明顯差異，而與弗氏棘口吸蟲的特征基本相符。綜合兩方面的信息，確定喜鵲源和山斑鳩源棘口吸蟲均為弗氏棘口吸蟲（Echinostoma friedi）。

2.4 中文譯名依據(jù) Toledo等［16］為贊揚美國賓夕法尼亞德·弗里德（Bernard Fried）教授在37枚頭棘的棘口吸蟲生物學研究方面所作出的杰出貢獻，將他們發(fā)現(xiàn)的棘口屬吸蟲新種以該教授的姓氏命名為Echinostoma friedi，其中文譯名為弗氏棘口吸蟲。

表 3 喜鵲和山斑鳩體內(nèi)與弗氏棘口吸蟲和強壯棘口吸蟲的形態(tài)特征比較Table 3 Mophological comparison between E. friedior and E. robustum from Pica pica and Streptopelia orientalis

3 討論

本文應用分子生物學與形態(tài)學相結(jié)合的方法，鑒定了寄生于喜鵲和山斑鳩的棘口科吸蟲均為弗氏棘口吸蟲。進化樹結(jié)果表明，來源于棘口科的棘口屬、棘緣屬、低頸屬和似頸屬形成一個大分支，而片形科的原片屬形成另一分支。在同一個科內(nèi)，所有22條棘口屬序列形成一個單系群，而棘緣屬和低頸屬序列形成另一個單系群，兩個單系群形成一個大分支，似頸屬吸蟲形成另一分支，與Detwiler等［13，18］的結(jié)果一致。在37枚頭棘的棘口屬吸蟲的大支內(nèi)，本文所獲的4條序列歸類為一個分支，與來源于強壯棘口吸蟲/弗氏棘口吸蟲的序列形成姐妹分支，說明來源于喜鵲和山斑鳩的棘口屬吸蟲具有相似的進化關(guān)系，均與強壯棘口吸蟲/弗氏棘口吸蟲的親緣關(guān)系最近。這2種棘口吸蟲的形態(tài)特征相似，親緣關(guān)系近，進化距離僅為0.9%［13，16］。Toledo等［16］認為二者的區(qū)別在于食道長度的差異，強壯棘口吸蟲的食道長度占體長的百分比要比弗氏棘口吸蟲的大（前者占9%，后者占5%）。本文中檢測的喜鵲源棘口吸蟲食道長度約占體長的7%，山斑鳩源約為6%，與Toledo等［16］的記錄基本一致。查閱相關(guān)專著和文獻，發(fā)現(xiàn)除了食道長度外，二者在體棘的分布（弗氏棘口吸蟲的體棘至后睪，強壯棘口吸蟲的體棘至前睪）、睪丸的位置（弗氏棘口吸蟲為體后3/4，強壯棘口吸蟲為體后1/3）、睪丸的形態(tài)（弗氏棘口吸蟲分為3個裂瓣，強壯棘口吸蟲分為3～4個深裂瓣，呈“不”字形）等方面也存在明顯差異［17，19-23］。經(jīng)形態(tài)學觀測，發(fā)現(xiàn)來源于喜鵲和山斑鳩棘口吸蟲的形態(tài)特征與強壯棘口吸蟲存在明顯的差異，而與弗氏棘口吸蟲基本相符。

來源于喜鵲和山斑鳩的弗氏棘口吸蟲，在蟲體及器官的大小、睪丸形態(tài)、雄莖囊位置及其長度占腹吸盤長度百分比、卵黃腺匯合程度等方面都存在一定差異，我們推測這種差異與蟲體對宿主的適應性有關(guān)。通常蟲體在適宜宿主比非適宜宿主發(fā)育的更好，相對于山斑鳩，喜鵲也許是弗氏棘口吸蟲較為適宜的宿主。Kinsella［24］認為終末宿主不同，吸蟲成蟲的形態(tài)、器官的大小會出現(xiàn)差異，在較為適宜的宿主中蟲體較大，而蟲卵的長度差異不明顯。楊健美等［25］把來源相同的日本血吸蟲尾蚴感染不同宿主，比較相同日齡蟲體的發(fā)育情況，結(jié)果在不同宿主的蟲體長度、寬度和發(fā)育情況存在差異，適宜宿主體內(nèi)的蟲體長度要明顯長于非適宜宿主體內(nèi)的蟲體長度。

吸蟲的傳統(tǒng)分類是以成蟲和幼蟲各階段的形態(tài)特征為主，由于蟲體的形態(tài)特征易受環(huán)境、宿主等因素影響，使得形態(tài)學分類的準確性和可靠性受到一定的限制［26］。這在具有37枚頭棘的棘口屬吸蟲的分類中更為典型［27］。相對于傳統(tǒng)的形態(tài)學技術(shù)，分子生物學技術(shù)更靈敏、準確可靠，可用于蟲種的分類鑒定和遺傳多樣性研究。目前，棘口科吸蟲常用的分類分子標記有核糖體DNA的ITS和線粒體DNA的CO1、ND1。Morgan和Blair［11］比較了具有37枚頭棘的棘口屬吸蟲ITS、CO1和ND1之間的差異，發(fā)現(xiàn)ITS平均種間差異為2.2%，CO1為8%，ND1為14%，表明三者中ND1進化速度快，種間差異顯著，更適用于親緣關(guān)系較近的物種（如具有37枚頭棘的棘口屬吸蟲）的種系發(fā)生關(guān)系研究［11，15］。本文中來自喜鵲和山斑鳩的4個蟲體均成功克隆出ND1基因，4條序列的同源性為99%，平均種內(nèi)差異僅為0.4%，遠遠小于種間的14%，因此，這2種鳥的棘口吸蟲盡管在形態(tài)上存在一些差異，我們?nèi)源_定為同一種吸蟲。

弗氏棘口吸蟲是由Toledo等［16］在西班牙的褐家鼠腸道中發(fā)現(xiàn)并命名，通過實驗感染證明該吸蟲可在禽類腸道寄生。本研究在喜鵲和山斑鳩的腸道檢出弗氏棘口吸蟲，這是該吸蟲在國內(nèi)的首次報道，喜鵲和山斑鳩應為其新宿主。由于弗氏棘口吸蟲可感染哺乳類（褐家鼠）、鳥類（鵲和山斑鳩）、禽類等多種動物，說明其宿主范圍較廣，但其能否感染人類，尚需進一步研究。

［1］汪天平.人體棘口吸蟲病研究進展［J］. 中國寄生蟲病防治雜志， 1996， 9（4）: 304-307.

［2］黃兵，韓紅玉，董輝，等.動物寄生蟲與人類健康·重要寄生蟲病30種［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社，2015: 66.

［3］林金祥， 高依國， 程由注， 等. 人體自然感染日本棘隙吸蟲（Echinochasmus japonicus）的發(fā)現(xiàn)［J］.福建醫(yī)藥雜志， 1982（2）: 30-32.

［4］黃兵，董輝，韓紅玉，等.中國家畜家禽寄生蟲名錄（第二版）［M］. 北京: 中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社，2014: 47-54.

［5］劉世修，于曉平.朱鹮寄生蠕蟲及蠕蟲病初步研究［C］//中國野生動物保護協(xié)會、中國鳥類學會、陜西省野生動物保護協(xié)會.稀世珍禽——朱鹮——'99國際朱鹮保護研討會文集.北京: 中國林業(yè)出版社， 1999: 175-178.

［6］于金玲，于迪，劉孝剛.幼齡豁眼鵝卷棘口吸蟲病的診治［J］. 中國家禽， 2013， 35（22）: 54

［7］吳德明， 朱雪明， 唐學恒. 江蘇省日本棘隙吸蟲病首例報告［J］. 寄生蟲學與寄生蟲病雜志， 1990 （2）: 76-86.

［8］韓紅玉， 李榴佳， 董輝， 等. 上海市部分鳥類寄生蠕蟲感染情況調(diào)查［J］.中國動物傳染病學報， 2013， 21（6）: 43-49.

［9］Noikong W， Wongsawad C， Chai J， et al. Molecular analysis of Echinostome metacercariae from their second intermediate host found in a localised geographic region reveals genetic heterogeneity and possible cryptic speciation［J］. PLOSNeglect Trop D， 2014， 8（4）: 1-7.

［10］索勛， 楊曉野， 朱興全， 等. 高級寄生蟲學實驗指導［M］. 北京: 中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社， 2005: 104-107.

［11］Morgan J A T， Blair D. Relative merits of nuclear ribosomal internal transcribed spacers and mitochondrial CO1 and ND1 genes for distinguishing among Echinostoma species（Trematoda）［J］. Parasitol， 1998， 116（3）: 289-297.

［12］Morgan J A T， Blair D. Mitochondrial ND1 gene sequences used to identify echinostome isolates from Australia and New Zealand［J］. Int J Parasitol， 1998， 28（3）: 493-502.

［13］Detwiler J T， Bos D H， Minchella D J. Revealing the secret lives of cryptic species:examining the phylogenetic relationships of echinostome parasites in North America［J］. Mol Phylogenet Evol， 2010， 55（2）: 611-620.

［14］Kostadinova A， Herniou E A， Barrett J， et al. Phylogenetic relationships of Echinostoma Rudolphi，1809 （Digenea: Echinostomatidae） and related genera re-assessed via DNA and morphological analyses［J］. Syst Parasitol， 2003， 54（3）: 159-176.

［15］Georgieva S， Selbach C， Faltynkova A， et al. New cryptic species of the 'revolutum' group of Echinostoma （Digenea: Echinostomatidae） revealed by molecular and morphological data［J］. Parasit Vector， 2013， 6 :64 1-12.

［16］Toledo R， Munoz-Antoli C， Esteban J G. The life-cycle of Echinostoma friedi n. sp. （Trematoda: Echinostomatidae） in Spain and a discussion on the relationships within the 'revolutum' group based on cercarial chaetotaxy［J］. Syst Parasitol，2000， 45（3）: 199-217.

［17］王溪云， 周靜儀. 江西動物志·人與動物吸蟲志［M］. 南昌:江西科學技術(shù)出版社， 1993: 85-86.

［18］Detwiler J T， Zajac A M， Minchella D J， et al. Revealing cryptic parasite diversity in a definitive host: echinostomes in muskrats［J］. J Parasitol， 2012， 98（6）: 1148-1155.

［19］蔣學良， 周婉麗， 廖黨金， 等. 四川畜禽寄生蟲志［M］. 成都:四川科學技術(shù)出版社， 2004: 268-270.

［20］黃兵， 沈杰， 董輝， 等. 中國畜禽寄生蟲形態(tài)分類圖譜［M］.北京: 中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社， 2006: 67-68.

［21］成源達， 劉多， 葉立云， 等. 湖南動物志:人體與動物寄生蠕蟲［M］. 長沙: 湖南科學技術(shù)出版社， 2011: 38-39.

［22］顧昌棟，李敏敏，祝華.北京地區(qū)家禽體內(nèi)棘口科（Echinostomatidae）幾種吸蟲的初步研究［J］. 動物學報， 1964， 16（1）: 39-53.

［23］張峰山， 楊繼宗， 潘新玉， 等. 浙江省家畜家禽寄生蠕蟲志［M］. 杭州: 浙江省農(nóng)業(yè)廳畜牧管理局， 1986: 30-31.

［24］Kinsella J M. Growth，development，and intraspecific variation of Quinqueserialis quinqueserialis （Trematoda: Notocotylidae）in rodent hosts［J］. J Parasitol， 1971， 57（1）: 62-70.

［25］楊健美， 苑純秀， 馮新港， 等. 日本血吸蟲感染不同相容性動物宿主的比較研究［J］.中國人獸共患病學報，2012，28（12）: 1207-1211.

［26］劉娟， 李雍龍. DNA序列分析在吸蟲種株基因差異研究方面的應用［J］. 國外醫(yī)學寄生蟲病分冊， 2004， 31 （3）: 108-111.

［27］Morgan J A T， Blair D. Nuclear rDNA ITS sequence variation in the trematode genus Echinostoma an aid to establishing relationships within the 37-collar-spine group［J］. Parasitol， 1995， 111（5）: 609-615.

SPECIES IDENTIFICATION OF ECHINOSTOMATIDAE （TREMATODA）FROM MAGPIE （PICA PICA） AND ORIENTAL TURTLE DOVE （STREPTOPELIA ORIENTALIS）

LIANG Si-ting1，2，DONG Hui2，ZHU Shun-hai2，HAN Hong-yu2，ZHAO Qi-ping2，WU Di3，ZHAI Qi2，LI Sha2，YANG Si-han2，4，PEI En-le3，HUANG Bing2，5
（1. College of Life and Environment Sciences， Shanghai Normal University， Shanghai 200234， China； 2. Key Laboratory of Animal Parasitology， Ministry of Agriculture， Shanghai Veterinary Research Institute， CAAS， Shanghai 200241， China； 3.Shanghai Department of Wildlife Protection Administration， Shanghai 200023， China；4. College of Animal Science and Technology， Yunnan Agricultural University， Kunming 650201，China；5. Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses， Yangzhou 225009， China）

In order to identify species of the parasites， which were collected from magpie （Pica pica） and oriental turtle dove （Streptopelia orientalis）， belonging to the family Echinostomatidae （Trematoda）， we used the morphology combining with molecular biology. The molecular biology results showed that the mitochondrial NADH dehydrogenase 1 （ND1） gene sequences from parasites found in magpie displayed 99% homology with that found in oriental turtle dove. In the phylogenetic tree， all the ND1 sequences from parasites found in two kinds of birds formed a monophyletic group and their closest relatives included Echinostoma robustum and E. friedi. The morphology results showed that the parasites from the same kind of bird had similar morphological structure， but there were some differences fromthe different kinds of bird. Comparison of the morphological characteristics between the parasites found in magpie and oriental turtle dove to E. robustum or E. friedi indicated that the parasites found in two kinds of birds prefer to be E. friedi. According to the molecular and morphological results， two kinds of birds were infected with the same parasite identified as E. friedi. This is the first report of E. friedi in China and the magpie and oriental turtle dove should be the new host of E. friedi.

Echinostoma； NADH dehydrogenase 1； Echinostoma friedi ； Pica pica； Streptopelia orientalis

S852.735

A

1674-6422（2015）04-0044-09

2015-02-10

上海市野生動植物保護管理站科技項目（HX201203）；上海市閔行區(qū)高層次人才科研項目（2012RC030）

梁思婷，女，碩士研究生，動物學專業(yè)

黃兵，E-mail:hb@shvri.ac.cn