陸 杰，代園園，羅 慧，龔金鋒，王緒楊，武 陽(yáng)，，楊 旭，馬 萍，*（.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 43700；.華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院環(huán)境生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430079）

鄰苯二甲酸二異壬酯致小鼠肝組織氧化損傷的研究

陸 杰1，代園園1，羅 慧1，龔金鋒1，王緒楊1，武 陽(yáng)1，2，楊 旭2，馬 萍1，2*（1.湖北科技學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，湖北 咸寧 437100；2.華中師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院環(huán)境生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢 430079）

研究鄰苯二甲酸二異壬酯對(duì)小鼠肝細(xì)胞的氧化損傷.以昆明小鼠為受試動(dòng)物，隨機(jī)分為5組，包括1個(gè)陰性對(duì)照組、4個(gè)鄰苯二甲酸二異壬酯染毒組，染毒組按0.5，5，50，500mg/kg4個(gè)劑量水平，灌胃染毒小鼠14d.以肝組織勻漿測(cè)定活性氧（ROS）、還原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）和8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷（8-OHdG）的含量；以肝組織細(xì)胞測(cè)定DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)（DPC）系數(shù).隨著鄰苯二甲酸二異壬酯染毒劑量的升高，肝組織的ROS、MDA、8-OHdG含量和DPC系數(shù)逐漸上升，GSH含量逐漸降低，各指標(biāo)呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系.染毒劑量為50mg/kg時(shí)， ROS、GSH、8-OHdG含量和DPC系數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05， P＜ 0.01）；染毒劑量為500mg/kg時(shí)，上述指標(biāo)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)（P＜ 0.05，P＜ 0.01）.同時(shí)對(duì)小鼠肝組織形態(tài)進(jìn)行光鏡觀察，結(jié)果表明，隨著染毒劑量的加大，小鼠肝細(xì)胞的病理?yè)p傷越嚴(yán)重.較高劑量（≥50mg/kg）的鄰苯二甲酸二異壬酯能造成小鼠肝組織的氧化損傷.

活性氧；還原型谷胱甘肽；丙二醛；8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷；DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)；氧化損傷

鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP）屬于鄰苯二甲酸酯類化合物，是一種新型替代增塑劑，現(xiàn)廣泛應(yīng)用于各類軟質(zhì)聚氯乙烯產(chǎn)品、橡膠產(chǎn)品和涂料的工業(yè)生產(chǎn)中.作為鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)中重要的類型，DINP可以通過(guò)皮膚接觸、進(jìn)食、飲水和空氣吸入等多種途徑進(jìn)入人體［1-2］，對(duì)于DINP毒性的研究已經(jīng)受到環(huán)境科學(xué)學(xué)者們的廣泛關(guān)注.Boberg等［3］研究發(fā)現(xiàn)DINP的劑量高于300mg/（kg·d）時(shí)對(duì)Wistar大鼠有抗雄性激素作用，具有生殖毒性.Kaufmann等［4］研究了DINP的致癌性，發(fā)現(xiàn)DINP在大鼠體內(nèi)能誘導(dǎo)過(guò)氧化物酶的生成，進(jìn)而誘導(dǎo)肝腫瘤的產(chǎn)生.Saillenfait等［5］對(duì)Sprague-Dawley大鼠進(jìn)行DINP的口服染毒實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)DINP能導(dǎo)致其胚胎發(fā)育毒性和產(chǎn)后畸形.2005年，歐盟規(guī)定兒童可放進(jìn)口中的玩具及兒童護(hù)理用品，其塑料所含的3類鄰苯二甲酸鹽（DINP、DIDP及DNOP），濃度不得超過(guò)0.1%［6］.有關(guān)鄰苯二甲酸酯類物質(zhì)的毒理學(xué)研究己有諸多報(bào)道，但有關(guān)DINP的毒性機(jī)理研究相對(duì)較少，國(guó)內(nèi)未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道.DINP在嚙齒類動(dòng)物和人體內(nèi)的吸收、分布、代謝和排泄已經(jīng)得到闡明［7］，但國(guó)內(nèi)外有關(guān)DINP氧化損傷的研究并不多見(jiàn)，大都是以研究人的體液（如尿液，乳汁，唾液，血清等）的氧化代謝物為主［8-9］.本研究以SPF級(jí)雄性昆明小鼠為實(shí)驗(yàn)材料，采用DINP體內(nèi)染毒方法，通過(guò)檢測(cè)其肝組織勻漿測(cè)定活性氧、還原型谷胱甘肽、丙二醛、8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷的含量，并以肝組織細(xì)胞測(cè)定DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)系數(shù)的變化以及通過(guò)肝組織切片觀察，探討DINP對(duì)小鼠肝細(xì)胞氧化損傷的機(jī)制，為全面探討DINP的毒性效應(yīng)及分子機(jī)制提供參考.

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 主要儀器與試劑 Power wave XS酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek儀器有限公司），F(xiàn)Lx 800熒光酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek儀器有限公司），F(xiàn)-4500型熒光分光光度計(jì)（日本日立公司），5415R低溫冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司），RM2245切片機(jī)（德國(guó)LEICA公司），HH-42三用電熱恒溫水箱（長(zhǎng)源實(shí)驗(yàn)儀器廠，北京）；DCFH-DA熒光染料（＞99.9%，Sigma公司），蛋白酶K（Sigma公司），小鼠8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷ELISA檢測(cè)試劑盒（濟(jì)南朋遠(yuǎn)生物技術(shù)有限公司，濟(jì)南），還原型谷胱甘肽試劑盒（南京建成生物工程研究所，南京），Hoechst33258熒光染料（Sigma公司），三羥基氨基甲烷鹽酸鹽（Tris-HCL，分析純，Amresco分裝）， 5，5′-二硫代二硝基苯甲酸（DTNB，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），硫代巴比妥酸（TBA，分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），鄰苯二甲酸二異壬酯（DINP，≥99.6%，Sigma公司）.

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供的SPF級(jí)雄性昆明小鼠30只（合格證號(hào):No. 42000600001226），體重為（33.15±1.15）g，飼養(yǎng)1周后實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK（鄂）2013-0071.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，小鼠飼養(yǎng)于無(wú)菌籠內(nèi)，保持溫度在20～25℃內(nèi)，籠內(nèi)相對(duì)濕度為50%～70%，以商業(yè)鼠糧飼養(yǎng)小鼠，及時(shí)補(bǔ)充飲用水，并避免其接觸其它干擾致病源，小鼠可自由進(jìn)食進(jìn)水.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組和染毒 國(guó)際所規(guī)范的DINP可接受的日攝入量（ADI）上限在0.02～0.14mg/kg之間.在ADI水平的基礎(chǔ)上，Lington等［10］研究表明，DINP的未觀察到有害效應(yīng)的水平（NOAEL）為15mg/kg，而Moore［11］的研究表明DINP的NOAEL可達(dá)88mg/kg.因此，考慮到DINP劑量的不確定性，模擬評(píng)估DINP最大的風(fēng)險(xiǎn)劑量，并參照Gray等［12］和McKee等［13］文中提及的500mg/kg作為本實(shí)驗(yàn)最高的染毒劑量， 0.5mg/kg作為本實(shí)驗(yàn)最低的染毒劑量.

30只昆明小鼠隨機(jī)分為5組，包括1個(gè)陰性對(duì)照組、4個(gè)DINP染毒組，每組6只.染毒組的染毒劑量分別為0.5，5，50，500mg/kg，以生理鹽水稀釋成0.05，0.5，5，50mg/mL4種濃度的使用液，稀釋過(guò)程中加與DINP等量的吐溫80助溶；因吐溫80只是作為DINP的助溶劑，量很小，對(duì)生物體無(wú)毒無(wú)副作用，所以陰性對(duì)照組只是給予生理鹽水.稀釋液現(xiàn)用現(xiàn)配，使用時(shí)在旋渦混懸儀上充分混勻.均經(jīng)口灌胃給予，灌胃量為10mL/kg，每天1次，連續(xù)染毒14d，分別于實(shí)驗(yàn)前稱小鼠體重.

1.2.2 肝組織切片的制備和觀察 染毒結(jié)束后用頸椎脫臼法處死小鼠，立即取肝組織，肝組織用4%的多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟切片，HE染色，普通光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織的病理組織學(xué)變化.

1.2.3 肝組織勻漿和懸液的制備 將肝組織在冰冷的PBS（pH7.5）中漂洗，濾紙拭干，分成2部分，一部分肝組織加PBS制成10%勻漿液，低溫離心后取上清，用于ROS、GSH、MDA和8-OHdG的檢測(cè).另一部分肝組織剪成糜狀，過(guò)濾后將濾液離心去上清，再用 PBS重懸細(xì)胞，用于DPC系數(shù)的檢測(cè).

1.2.4 ROS含量的測(cè)定 取上清液4μL，加入396μL PBS作100倍稀釋.取100μL稀釋液于酶標(biāo)板中排列，并加入100μL熒光染料DCFA染色，避光反應(yīng)5min，用熒光酶標(biāo)儀檢測(cè).

1.2.5 蛋白質(zhì)含量和GSH含量的測(cè)定 蛋白質(zhì)含量按照Folin酚法測(cè)定，GSH含量的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行.GSH含量（μmol/ gprot）=［（測(cè)定OD值-空白OD值）/（標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值）］×標(biāo)準(zhǔn)管濃度×樣本稀釋倍數(shù)÷待測(cè)勻漿蛋白濃度（gprot/L）.

1.2.6 MDA含量的測(cè)定 取500μL上清液于試管中，并加入2mL0.6%TBA，沸水浴15min.取上清1mL于EP管中，10000×g離心5min.取上清100μL于酶標(biāo)板中排列，用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀檢測(cè)，分別在450，532，600nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光值（以加PBS的為參照），按照公式計(jì)算MDA濃度（μmol/ L）=6.45（A532-A600）-0.56A450，式中:A為吸光度.

1.2.7 8-OHdG含量的測(cè)定 8-OHdG含量的測(cè)定嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明進(jìn)行.以0，3，6，12，24，48ng/mL等標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，450nm處OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)確定樣品中8-OHdG的含量.

1.2.8 DPC系數(shù)的測(cè)定 DPC采用KCl-SDS沉淀法進(jìn)行檢測(cè)［14］.首先向樣品中加入SDS，使之與DPC及蛋白質(zhì)結(jié)合，然后加入KCl溶液使DPC和蛋白質(zhì)沉淀，而游離的DNA留在上清液中.將上清液轉(zhuǎn)移后，再向沉淀中加入蛋白酶K除去蛋白質(zhì)，使DPC中的DNA游離出來(lái)，用熒光法測(cè)定此DNA的含量A（交聯(lián)DNA）以及原液中DNA的含量B（游離DNA），計(jì)算DPC系數(shù)η［η= A/（A+B）］.

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 小鼠體重和肝組織的臟器系數(shù)

小鼠體重和肝組織的臟器系數(shù)見(jiàn)表1，與對(duì)照組比較，各劑量組小鼠體重和臟器系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞ 0.05）.

表1 DINP染毒小鼠的體重和臟器系數(shù)（n=6，± s）

表1 DINP染毒小鼠的體重和臟器系數(shù)（n=6，± s）

組別 染毒前 染毒后 臟器系數(shù)對(duì)照組 33.77±0.563 35.25±0.655 0.053±0.001 0.5mg/kg DINP 35.91±0.683 37.38±0.791 0.054±0.002 5mg/kg DINP 34.21±0.631 36.81±0.538 0.052±0.001 50mg/kg DINP 34.43±0.831 35.61±1.385 0.052±0.002 500mg/kg DINP 34.83±0.839 35.11±1.453 0.051±0.003

2.2 小鼠肝組織形態(tài)的光鏡觀察結(jié)果

從圖1可看出，空白對(duì)照組肝組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài)正常，中央靜脈及周圍放射狀肝細(xì)胞索清晰，肝索和肝竇比例正常.0.5mg/kg劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝索和肝竇比例較正常.5mg/kg劑量組肝竇變窄，肝索增寬；肝細(xì)胞輕度水腫，體積增大、胞漿疏松化.50mg/kg劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)有所紊亂，肝竇寬窄不一，肝索擁擠、扭曲、變形；肝細(xì)胞損傷明顯，可見(jiàn)病理性核分裂像.500mg/kg劑量組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂；肝索、肝竇結(jié)構(gòu)不清；肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，壞死明顯.結(jié)果表明，隨著染毒劑量的加大，小鼠肝細(xì)胞的病理?yè)p傷越嚴(yán)重.

圖1 不同DINP處理組肝組織切片圖（10×40， HE染色）Fig.1 Liver slices of different DINP groups （10×40， HE dyed）

2.3 小鼠肝組織ROS含量的變化

ROS含量是反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平的指標(biāo)，由圖2可以看出，隨著染毒劑量的升高，ROS含量逐漸上升，呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系.與對(duì)照組比較，0.5，5mg/kg劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，50，500mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）.較高劑量的DINP能造成ROS含量的上升.

圖2 不同DINP處理組小鼠肝臟ROS含量Fig.2 ROS content in mouse liver of different DINP groups

2.4 小鼠肝組織GSH含量的變化

圖3 不同DINP處理組小鼠肝臟GSH含量Fig.3 GSH content in mouse liver of different DINP groups

GSH是GPx（谷胱甘肽過(guò)氧化物酶）催化過(guò)氧化物還原的必需底物，可反映機(jī)體抗氧化應(yīng)激的水平，由圖3可以看出，隨著DINP染毒劑量的升高，GSH含量逐漸下降，呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系.與對(duì)照組比較，0.5，5mg/kg劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，50，500mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05， P＜0.01）.在較高劑量的DINP作用下，小鼠肝的GSH含量下降明顯.

2.5 小鼠肝組織MDA含量的變化

由圖4可見(jiàn)，與對(duì)照組比較，不同劑量的DINP均能使小鼠肝MDA含量有不同程度的升高.0.5，5，50mg/kg劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，500mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.01），這表明小鼠肝組織的脂膜已受到損傷.

圖4 不同DINP處理組小鼠肝臟MDA含量Fig.4 MDA content in mouse liver of different DINP groups

2.6 小鼠肝組織8-OHdG含量的變化

圖5 不同DINP處理組小鼠肝臟8-OHdG含量Fig.5 8-OHdG content in mouse liver of different DINP groups

由圖5可見(jiàn)， 與對(duì)照組比較，不同劑量的DINP能使小鼠肝8-OHdG含量有不同程度的升高.0.5，5mg/kg劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，50，500mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05， P＜0.01），在較高劑量的DINP作用下，小鼠肝臟的8-OHdG含量升高明顯.

2.7 小鼠肝臟DPC系數(shù)的變化

用KCl-SDS沉淀法檢測(cè)DPC系數(shù)，如圖6所示，隨著DINP染毒劑量的升高，DPC系數(shù)逐漸上升，呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系.0.5，5mg/kg劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，50，500mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05， P＜ 0.01）.

圖6 不同DINP處理組小鼠肝臟DPC系數(shù)Fig.6 DPC coefficients in mouse liver of different DINP groups

3 討論

細(xì)胞中ROS含量是反映細(xì)胞內(nèi)氧自由基水平的主要指標(biāo)［15］.ROS在機(jī)體正常代謝狀態(tài)下含量很低，在胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的氧化還原調(diào)控中起重要作用［16］；但過(guò)量活性氧物質(zhì)（主要是ROS）的產(chǎn)生會(huì)破壞細(xì)胞內(nèi)氧化和抗氧化之間的平衡，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激作用，氧化應(yīng)激是許多疾病的重要發(fā)病機(jī)制［17-18］.還原型的GSH可以和ROS結(jié)合形成硫代半縮醛，并通過(guò)抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)生成具更強(qiáng)抗氧化作用的抗壞血酸［19］.還原型的GSH是ROS的主要清除劑，它的消耗能反應(yīng)機(jī)體的受氧化損傷程度［20-21］，在評(píng)價(jià)氧化損傷中具有重要意義.本研究中，隨著DINP染毒劑量的升高，ROS含量逐漸上升，GSH含量逐漸下降.與對(duì)照組比較，50，500mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）.說(shuō)明在較高劑量DINP誘導(dǎo)之下小鼠肝組織細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生了過(guò)量的ROS，受到ROS攻擊，細(xì)胞的抗氧化能力下降.

過(guò)量的ROS還可使脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)，改變細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)，使膜成分之間形成交聯(lián)和聚合，影響膜受體、膜蛋白酶和離子通道的功能，甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡.脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的主要代謝產(chǎn)物是MDA，其水平的高低代表脂質(zhì)過(guò)氧化的強(qiáng)度［22-23］.在本研究中，500mg/kg劑量組MDA含量與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p ＜ 0.01），這表明小鼠肝組織的脂膜已受到損傷.

8-OHdG是活性氧自由基攻擊DNA 分子中的鳥(niǎo)嘌呤第8位碳原子而產(chǎn)生的一種氧化性加合物，它是活性氧基團(tuán)引起的DNA 氧化損傷修飾產(chǎn)物之一.8-OHdG在體內(nèi)穩(wěn)定存在，為代謝終產(chǎn)物，且只能通過(guò)DNA 氧化損傷途徑形成，是目前國(guó)際上公認(rèn)的一種新型評(píng)價(jià)DNA氧化損傷和氧化應(yīng)激狀態(tài)敏感的生物標(biāo)志物，測(cè)定機(jī)體8-OHdG含量對(duì)評(píng)估體內(nèi)氧化損傷和修復(fù)程度有重要意義［24-25］.ROS對(duì)細(xì)胞的氧化損傷作用還會(huì)引起DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)，DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)難以修復(fù)，對(duì)參與DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和修復(fù)的蛋白質(zhì)活動(dòng)起阻礙作用，增加了染色體畸變和姊妹染色單體交換［26］.本研究中，不同劑量的DINP能使小鼠肝8-OHdG含量和DPC系數(shù)有不同程度的升高，與對(duì)照組比較，50，500mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05， P＜0.01），說(shuō)明較高劑量的DINP能使小鼠肝8-OHdG的形成以及DNA和蛋白質(zhì)交聯(lián)的增多，造成肝組織的DNA損傷.

4 結(jié)論

4.1 通過(guò)對(duì)肝組織進(jìn)行病理學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，隨著DINP染毒劑量的升高，小鼠肝細(xì)胞的病理?yè)p傷越嚴(yán)重.染毒劑量為50mg/kg時(shí)，肝小葉結(jié)構(gòu)有所紊亂，肝竇寬窄不一，肝索扭曲和變形；肝細(xì)胞損傷明顯，可見(jiàn)病理性核分裂像.染毒劑量為500mg/kg時(shí)，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂；肝索、肝竇結(jié)構(gòu)不清；肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，壞死明顯.

4.2 在較高劑量DINP誘導(dǎo)之下小鼠肝組織細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生了過(guò)量的ROS，破壞了自身的氧化與抗氧化平衡，使細(xì)胞的抗氧化能力下降，間接引起了小鼠肝組織的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)和8-OHdG的形成，以及DNA和蛋白質(zhì)交聯(lián)的增多，造成肝組織的氧化損傷和病理?yè)p傷.

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Oxidative damage of mouse liver tissue induced by diisononyl phthalate.

LU Jie1， DAI Yuan-yuan1， LUO Hui1，GONG Jin-feng1， WANG Xu-yang1， WU Yang1，2， YANG Xu2， MA Ping1，2*（1.College of Basic Medical， Hubei University of Science and Technology， Xianning 437100，China；2.Laboratory of Environment Biomedicine， School of Life Science，Central China Normal University， Wuhan 430079， China）. China Environmental Science， 2015，35（1）：285～290

To investigate the oxidative damages of diisononyl phthalate on mouse liver cells， Kunming mice were randomly grouped into five groups and orally administered with drugs daily for fourteen days； the groups included one solvent control group， four diisononyl phthalate groups. The exposure doses of diisononyl phthalate groups were 0.5， 5， 50 and 500mg/kg respectively. Some liver tissues were then made into homogenates for the measurement of ROS （reactive oxygen species），GSH （glutathione）， 8-hydroxy-2-deoxyguanosine （8-OHdG） and MDA （Malondialdehyde） contents. Meanwhile， DPC（DNA-protein Crosslink） coefficients were detected from liver cell suspension. The liver contents of ROS， MDA， 8-OHdG and DPC coefficients increased gradually in a dose-dependent manner， whereas GSH content decreased accordingly. In the exposure group with the dose of 50mg/kg， ROS， GSH， 8-OHdG contents and DPC coefficients were significantly higher than those of the control group （P＜0.05， P＜ 0.01）； There were significant differences in levels of each biomarker between 500mg/kg group and control group （P＜ 0.05，P＜ 0.01）. Meanwhile liver tissues were sliced for physiological observation，the results showed that tissue injury were severed gradually with the increase of exposure concentration. diisononyl phthalate at certain doses （≥50mg/kg） can induce oxidative stress in mice liver.

reactive oxygen species；glutathione；malondialdehyde；8-hydroxy-2-deoxyguanosine；DNA-protein crosslinks；oxidative stress

X503.22

A

1000-6923（2015）01-0285-06

陸 杰（1992-），男，湖北咸寧人，湖北科技學(xué)院本科生，主要從事環(huán)境毒理學(xué)研究.

2014-04-07

湖北省大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（201310927010）；湖北省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2014CFB284）；國(guó)家自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目（51136002）

* 責(zé)任作者， 教授， mping68@126.com