張曉云 宋增華 趙春林 鄭潔 郭建霞 周海成

結腸癌是胃腸道較為常見的惡性腫瘤之一，臨床上能夠采用多種治療方法進行治療，例如手術、化療等綜合治療方法，然而，其發(fā)病率和病死率仍具惡性腫瘤前列，其發(fā)病趨勢呈逐年上升趨勢，癌組織的侵襲和轉(zhuǎn)移為患者死亡的主要原因［1］。結腸癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移的相關機制尚未完全清楚，主要認為其與多種癌基因及腺瘤轉(zhuǎn)化為腺癌與抗癌基因平衡失調(diào)有密切的關聯(lián)，這是一個長時間、多因素和多步驟的復雜變化過程［2］。因此，對結腸癌做出早期的診斷對疾病的治療和預后有關鍵的意義，本研究針對近年來就診于我院的結腸癌患者進行Sox2 和Oct4 兩種轉(zhuǎn)錄因子表達的觀察和探討，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 入選2012 年1 月至2014 年1 月就診于我院的結腸癌患者48 例作為研究觀察對象，其中男26 例，女22 例;年齡27 ～75 歲，平均年齡(58±12)歲。入選患者均經(jīng)病理組織學診斷為結腸腺癌，其中高分化組18 例，中分化組17 例，低分化組13 例。采用奧美生物技術公司提供的結腸癌組織芯片，提取入選患者結腸腺癌和臨近癌旁組織。

1.2 方法

1.2.1 試劑選擇:選用美國ABGENT 公司提供的鼠抗人Sox2 單克隆抗體，ABCAM 公司提供的鼠抗人Oct4 單克隆抗體，Signa 公司提供的鼠抗β-actin 單克隆抗體以及SP 二抗體試劑盒，同時選用HyClone 公司提供的RPMI1640 培養(yǎng)液和胚牛血清和蛋白裂解液，Pierce 公司提供的化學發(fā)光試劑盒。

1.2.2 細胞系培養(yǎng):將人結腸癌細胞株SW480、SW620、Lovo 和永生化結腸上皮細胞HIEC 進行保存?zhèn)溆?，培養(yǎng)溫度保持在37℃，在5%二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(RPMI1640，、胚牛血清)，實驗細胞采用對數(shù)生長期的細胞。

1.2.3 免疫組化實驗:采用免疫組化SP 法進行組織芯片檢測，陽性對照采用陽性肺部鱗癌組織切片，陰性對照采用小鼠血清。每張切片觀察到3 個以上高倍視野，抗原染色表達評價分別為染色強度和細胞數(shù)兩項，切片按照陽性細胞數(shù)進行評價，陽性細胞數(shù)為0%評分為0 分，陽性細胞＜25%評分為1 分，陽性細胞25%～50%評分為2 分，陽性細胞51%～75%評分為3 分，陽性細胞＞75%評分為4 分。陽性細胞數(shù)取各視野計數(shù)的平均數(shù)。將染色強度分級記錄，其中無著色為0 級，弱著色為1 級，中強度著色為2 級，強著色為3 級。組織學評分為陽性細胞評分x 染色強度分級，總分分級:0 分為陰性(－)，1 ～4 分為陽性(+)，5～8 分為陽性(++)，9 ～12 分為陽性(+++)，陽性表達率=陽性(++)+陽性(+++)/總數(shù)×100%。1.3 觀察指標 觀察和研究兩種轉(zhuǎn)錄因子免疫組化情況及兩種轉(zhuǎn)錄因子表達的關系。

1.4 統(tǒng)計學分析應用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料以百分比表示，采用χ2檢驗，相關性采用回歸分析，P ＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 免疫組化情況 兩種轉(zhuǎn)錄因子在結腸癌中均表現(xiàn)為高表達，陽性產(chǎn)物均呈棕黃色顆粒，其中Oct4 主要在腺體細胞核表達，Sox2 主要在腺體細胞漿表達，Oct4 在結腸癌中陽性表達率為81.25%，明顯高于癌旁組織50%(P ＜0.05);Sox2 在結腸癌中陽性表達率為77.08%，明顯高于癌旁組織20.83%(P ＜0.05)。見表1、2，圖1、2。

表1 Oct4 在結腸癌及癌旁組織中的表達 n=48，例

圖1 Oct4 在結腸癌和癌旁組織中的表達(免疫組化×400)

表2 Sox2 在結腸癌及癌旁組織中的表達 n=48，例

圖2 Sox2 在結腸癌和癌旁組織中的表達(免疫組化×400)

2.2 兩種轉(zhuǎn)錄因子表達的關系對Oct4 和Sox2 兩種轉(zhuǎn)錄因子表達關系進行相關性研究，Oct4 陽性表達率隨著Sox2 陽性表達率升高而升高，呈正相關關系(r=0.4143，P ＜0.05)。見表3。

表3 兩種轉(zhuǎn)錄因子在結腸癌中表達的關系 例

3 討論

結腸癌是臨床常見的消化內(nèi)科惡性腫瘤之一，隨著人民生活水平的不斷提高，人們的生活方式和飲食結構發(fā)生了巨大的變化，結腸癌的發(fā)病率也逐年升高，病死率也呈現(xiàn)隨之升高的趨勢，腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤主要生物學特征，同時也是患者發(fā)生死亡的主要原因［3］。全球范圍內(nèi)每年有接近60 萬人因結腸癌發(fā)生死亡，在較發(fā)達的歐美國家，結腸癌的發(fā)病率更高，部分國家的患病率高達60/10 萬人，已經(jīng)成為惡性腫瘤死亡的第四大病因，嚴重威脅全球人類生命健康安全［4］。近年來，我國結腸癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，多數(shù)患者一經(jīng)發(fā)現(xiàn)已經(jīng)是疾病晚期，目前針對晚期結腸癌治療的效果不甚理想［5］，所以積極探尋治療結腸癌的有效方法仍然是臨床亟待解決的問題，具有較為深刻的臨床意義［6］。Oct4 和Sox2 兩種轉(zhuǎn)錄因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲惡變有密切的關系，既能通過獨立的途徑發(fā)揮作用，也能互相關聯(lián)，且受到其他多種因子的影響和制約，除了表達方式較為相似意外，兩者還有共同的結合點，協(xié)同調(diào)控大多數(shù)的靶基因表達。

結腸癌的患病機制是逐步演變的進程，相關因素錯綜復雜，可能與自身免疫、年齡、遺傳和環(huán)境因素有密切的關系［7］。目前認為結腸癌多來源于結腸腺瘤，經(jīng)過復雜地，多階段、多步驟的癌變過程發(fā)展為結腸癌，從早期腺瘤性增生逐年發(fā)生癌變具有較為經(jīng)典的信號通路變化，經(jīng)過惡性轉(zhuǎn)化和惡性演進兩個過程逐漸加重，其中KRAS 突變具有較為突出的代表性［8］。多能誘導干細胞針對四個核心轉(zhuǎn)錄因子在細胞重編程和維持細胞干細胞特性中發(fā)揮著重要的作用，然而其是否能夠在結腸癌發(fā)病過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用還不是十分明確。轉(zhuǎn)錄因子Oct4 是含POU 結構域轉(zhuǎn)錄因子家族的組成部分，具有持續(xù)干細胞多向分化潛能、自我更新功能，而且還與多種腫瘤干細胞具有相關性，不但在胚胎干細胞、胚胎生殖細胞、胚胎和生殖腫瘤細胞中有所表達，同時也在成人組織原發(fā)腫瘤細胞中有所表達;Sox2 在前腸發(fā)育過程中發(fā)揮著關鍵的作用，主要在前腸內(nèi)胚層中表達［9］，Sox2 是SOX 基因家族中的組成部分，表達的是317 個氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，其與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展有明確的關系。二者共同協(xié)同作用，能夠維持胚胎干細胞自我更新過程中發(fā)揮重要的作用，是維持膠質(zhì)瘤祖細胞增值和遺傳特征的關鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子［10］。

本研究入選近年來就診于我院的結腸癌患者作為研究觀察對象，采用免疫組化SP 法進行Sox2 和Oct4兩種轉(zhuǎn)錄因子的檢測，觀察其在匹配的癌旁組織中的表達，探尋其再結腸癌發(fā)生發(fā)展中的相互關系和作用。研究結果顯示，兩種轉(zhuǎn)錄因子在結腸癌中均表現(xiàn)為高表達，陽性產(chǎn)物均呈棕黃色顆粒，其中Oct4 主要在腺體細胞核表達，Sox2 主要在腺體細胞漿表達，Oct4 和Sox2 在結腸癌中陽性表達率明顯高于癌旁組織;Oct4陽性表達率隨著Sox2 陽性表達率升高而升高，呈正相關關系。本研究提示，Sox2 和Oct4 兩種轉(zhuǎn)錄因子在結腸癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，其表達呈正相關，兩種轉(zhuǎn)錄因子在結腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用。本研究結果與目前臨床研究結果基本一致，但本研究樣本含量少，尚需高質(zhì)量研究進一步驗證。

1 Kim JC，Kim SK，Roh SA，et al.Gene expressio n profiling:canonical molecular changes and clinicopathological features in sporadic colorectal cancers.World J Gastroenterol，2008，14:6662-6672.

2 張念華，宋立兵，丁婭，等.結腸癌組織中Bmi-1 表達變化及意義.山東醫(yī)藥，2013，53:30-33.

3 李文思，陳學軍，蘇雷，等.MMP-3，TIMP-3 在人結腸癌組織中的表達及其相關性研究.醫(yī)學與哲學，2012，33:42-51.

4 伍雯.膳食結構改變與結腸癌風險相關性的研究進展.腸外與腸內(nèi)營養(yǎng)，2014，21:55-59.

5 汪建平.中國《結直腸癌診療規(guī)范(2010 版)》解讀.中華胃腸外科雜志，2011，14:1-4.

6 溫機智，韓曉燕，魏波，等.PSF 1 在結腸癌組織中的表達及其對結腸癌細胞增殖的影響.中華胃腸外科雜志，2013，16:70-74.

7 Vargas AJ，Thompson PA.Diet and nutrient factors in colorectal caneer risk.Nutrition in Clinical Practice，2012，27:613-623.

8 劉清，帖君，薛增福，等.轉(zhuǎn)錄因子Oct4、Sox2 在結腸癌中的表達及意義.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2011，19:201-204.

9 Que J，Okubo T，Goldenring JR，et al.MulliPle dose-dependent roles for Sox2 in th patterming and differentiation of anterior foregut endodem.Development，2007，134:2521-2531.

10 Remenyi A，Lins K，Nissen LJ，et al.Crystal structure of a POU/HMG/DNA ternary complex suggests differential assembly of Oct4 and Sox2 on two enhancers.Genes Dev，2003，17:2048-2059.