譚文華，陳圓

（廣東省陽(yáng)江市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東陽(yáng)江529500）

蜂蜜中微量鐵的兩種測(cè)定方法及比較

譚文華，陳圓*

（廣東省陽(yáng)江市質(zhì)量計(jì)量監(jiān)督檢測(cè)所，廣東陽(yáng)江529500）

探討了蜂蜜中微量鐵2種測(cè)定方法。在最佳條件下采用鄰二氮菲分光法測(cè)定蜂蜜試樣；為保證檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量，采用火焰原子吸收法對(duì)其結(jié)果進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)。結(jié)果表明：采用鄰二氮菲分光法和火焰原子吸收法測(cè)出某市售蜂蜜試樣中鐵含量分別為2.49、2.52 μg/g，兩者校準(zhǔn)曲線相關(guān)性均較好，檢出限分別為0.006 mg/L和0.01 mg/L，精密度RSD為0.79%和1.80%，加標(biāo)回收率均在96.8%～102.7%，2種方法的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異（t=0.617，P＜0.05）。

蜂蜜；微量鐵；測(cè)定方法；比較

蜂蜜是人類熟知的營(yíng)養(yǎng)食品及藥品添加劑，富含除人體所需的糖類、維生素外，還有鐵、鉀、鈉等幾十種維持人體健康的微量元素。在國(guó)內(nèi)外頻頻出現(xiàn)食品安全問(wèn)題的今天，蜂蜜的營(yíng)養(yǎng)成份也倍受人們的關(guān)注重視。鐵作為維持人體健康的微量元素、運(yùn)載體及生物體內(nèi)許多化學(xué)反應(yīng)必不可少的催化劑，攝取量不足容易引起人體貧血等，因此在營(yíng)養(yǎng)學(xué)及醫(yī)學(xué)上已被重點(diǎn)關(guān)注?；诖?，為確保人體健康、保障飲食安全，加強(qiáng)食品中微量元素的監(jiān)測(cè)十分必要；同時(shí)為保證檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量，實(shí)驗(yàn)室常使用不同方法進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)[1]。作者通過(guò)鄰二氮菲分光光度法和火焰原子吸收法（AAS）測(cè)定某市售蜂蜜中鐵的含量，并將2種方法進(jìn)行了比較，結(jié)果令人滿意[2-3]。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試驗(yàn)材料

市售蜂蜜；鹽酸羥胺：成都市科龍化工試劑廠；鄰二氮菲（1，10-二氮雜菲）：上海試劑廠；六水硫酸亞鐵銨：成都金山化工試劑廠；醋酸鈉：汕頭市西隴化工廠；鹽酸：株洲開(kāi)發(fā)區(qū)石英化玻有限責(zé)任公司；上述試劑均為分析純。

1.2 蜂蜜預(yù)處理

稱取蜂蜜10 g左右（精確至0.000 1 g）于瓷坩堝中，在電爐上加熱至不冒煙后，放入馬弗爐中550℃灰化2 h，冷卻后加入4 mL（1+1）HCL，加熱煮沸至近干，加少許蒸餾水，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶后，加鹽酸羥胺（10%）4 mL，鄰二氮菲（0.02%）4 mL，CH3COONa（1 mol/L）20 mL，加水稀釋至刻度，搖勻。

1.3 鄰二氮菲分光光度法測(cè)定

試驗(yàn)選用六水硫酸亞鐵銨配成標(biāo)液（基準(zhǔn)液），通過(guò)721型分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）10 mm吸收池測(cè)定不同濃度下鐵標(biāo)液的吸光度A，并繪制A和波長(zhǎng)λ吸收曲線圖，從而得出最佳測(cè)定波長(zhǎng)；再依次探尋測(cè)定溶液中鐵的最佳條件：pH、顯色劑用量、顯色反應(yīng)時(shí)間、鄰二氮菲與鐵的摩爾比。

預(yù)處理后的蜂蜜試樣在步驟1.3得出的最佳條件下測(cè)定鐵的含量。

1.4 原子吸收法測(cè)定

采用AA-6800型火焰原子吸收分光光度計(jì)（日本島津）測(cè)定蜂蜜試樣中鐵的含量，測(cè)定前同步驟1.3用六水硫酸亞鐵銨溶液標(biāo)定。測(cè)定條件：室溫25℃，波長(zhǎng)248.3 nm，狹縫0.2 nm，燈電流3.0 mA，負(fù)高壓313.1 V，空氣5.5 L/min，乙炔0.6 L/min。

1.5 2測(cè)定方法回收率的比較

鄰二氮菲分光光度法測(cè)定蜂蜜試樣中鐵加標(biāo)回收試驗(yàn)：于3份蜂蜜試樣中分別加入鐵標(biāo)準(zhǔn)（液）相當(dāng)于1.00 mg/L進(jìn)行回收；原子吸收分光光度法測(cè)定蜂蜜試樣中總鐵（直接法）加標(biāo)回收試驗(yàn)：于3份蜂蜜試樣中分別加入鐵標(biāo)準(zhǔn)相當(dāng)于1.00 mg/L進(jìn)行回收[4]。

2 結(jié)果與討論

2.1 鄰二氮菲分光光度法最佳條件探尋結(jié)果

1）圖1為不同波長(zhǎng)下測(cè)定的鐵標(biāo)液吸光度曲線圖。

圖1 不同波長(zhǎng)下鐵標(biāo)液的吸光度曲線Fig.1 Iron absorbance at different wavelengths

由圖1可知，721型分光光度計(jì)測(cè)定微量鐵，在510 nm波長(zhǎng)處吸光度A值最大，為0.174，鐵標(biāo)液在此波長(zhǎng)下摩爾吸收系數(shù)ε值最大，靈敏度及精準(zhǔn)度較高。（2）圖2為以鄰二氮菲為顯色劑，不同顯色反應(yīng)時(shí)間的吸光度曲線圖?？芍猴@色反應(yīng)時(shí)間10 min，吸光度A值最大，但隨著反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，吸光度逐漸下降。可能原因：二價(jià)鐵與鄰二氮菲生成的絡(luò)合物隨放置時(shí)間延長(zhǎng)失穩(wěn)，二價(jià)鐵、鹽酸羥氨長(zhǎng)期暴露在空氣中逐漸發(fā)生變質(zhì)。

圖2 不同顯色時(shí)間的吸光度曲線Fig.2 Absorbance at different time

圖3為不同pH下鐵溶液的吸光度曲線。

圖3 不同pH鐵標(biāo)液吸光度曲線Fig.3 The iron absorbance at different pH

可以看出，溶液pH在4左右時(shí)，吸光度A達(dá)到最大；隨著pH的增高，吸光度急劇下降?？赡茉蚴牵弘S著pH逐漸增高，二價(jià)鐵與鹽酸羥胺不穩(wěn)定發(fā)證變質(zhì)，導(dǎo)致顯色反應(yīng)變緩。圖4為鄰二氮菲與鐵的摩爾比吸光度曲線圖。

圖4 鄰二氮菲與鐵的摩爾比吸光度曲線圖Fig.4 The absorbance at different ratio of Phenanthroline iron molar

由圖4可知，鄰二氮菲（10-3mol/L，6 mL）與鐵標(biāo)液（10-4mol/L，20 mL）比例為3時(shí)，吸光度A達(dá)到最大，隨著顯色劑鄰二氮菲與鐵的摩爾比增大吸光度基本保持恒定，其顯色反應(yīng)為：

Fe2++鄰二氮菲→[（鄰二氮菲）3Fe]2+（橙紅色配合物）。

2.2 2種測(cè)定方法校準(zhǔn)曲線與檢出限比較

表1為蜂蜜中微量鐵2種測(cè)定方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限。采用鄰二氮菲分光光度法，通過(guò)朗伯-比爾定律（建立在吸光質(zhì)點(diǎn)之間沒(méi)有相互作用的前提下，適用稀濃度）A=εbc計(jì)算，式中：b為液層厚度（cm），c為濃度（mg/L）。計(jì)算摩爾吸光系數(shù)ε=0.185 L/mg/cm。

表1 蜂蜜中微量鐵2種測(cè)定方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線及檢出限比較Table 1 The standard curve and detection limit comparison of two methods

2.3 方法精密度和準(zhǔn)確度的比較

表2為采用鄰二氮菲分光光度法和火焰原子吸收法測(cè)定鐵標(biāo)樣和蜂蜜試樣，并進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

表2 蜂蜜中微量鐵2種測(cè)定方法的精密度、準(zhǔn)確度比較Table 2 The accuracy and precision comparison of two methods

由表2可知，同一種試驗(yàn)法分別取3次平行樣（n=6），鄰二氮菲分光光度法和火焰原子吸收法測(cè)定某蜂蜜中鐵含量分別為：2.49、2.52 μg/g；2種測(cè)定方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.79%和1.80%，精密度及準(zhǔn)確度都較好，加標(biāo)回收率均在96.8%～102.7%之間。對(duì)6份蜂蜜試樣的2種方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)[5]，t=0.617，給定α=0.05，查表得t0.05（5）=2.571，因0.617＜2.571，P＞0.05，故2種測(cè)定結(jié)果之間無(wú)顯著性差異。

3 結(jié)論

1）鄰二氮菲分光光度法測(cè)定蜂蜜中微量鐵，吸收波長(zhǎng)510 nm，pH在4左右，顯色反應(yīng)時(shí)間10 min，鄰二氮菲/鐵的摩爾比為3時(shí)，測(cè)定效果最佳。

2）通過(guò)鄰二氮菲分光光度法和火焰原子吸收法測(cè)定蜂蜜試樣中鐵的含量，結(jié)果分別為：2.49、2.52μg/g。兩種方法的校準(zhǔn)曲線的相關(guān)性均較好，R2＞0.999，檢出限分別為0.006、0.01 mg/L；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.79%和1.80%，精密度及準(zhǔn)確度都較好，加標(biāo)回收率在96.8%～102.7%之間；6份蜂蜜試樣的2種方法測(cè)定結(jié)果經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異（t=0.617，P＜0.05）。

3）鄰二氮菲分光法和火焰原子吸收法測(cè)定蜂蜜中微量鐵，精密度及準(zhǔn)確度都較好，前者成本低，但操作繁瑣且易受其它離子干擾；原子吸收法無(wú)需確定最佳測(cè)試條件，簡(jiǎn)便、快速、實(shí)用性強(qiáng)，但儀器價(jià)格昂貴。

[1]吳春妍,張洪濤.水中總鐵兩種測(cè)定方法的比較[J].污染防治技術(shù),2011,24(5):39-40

[2]陸瑩,王志偉.火焰原子吸收法測(cè)定蜂蜜中的鐵[J].光譜實(shí)驗(yàn)室, 2000,17(1):107-108

[3]白茹.原子吸收與可見(jiàn)分光光度法測(cè)定總鐵的比對(duì)試驗(yàn)[J].中國(guó)高新技術(shù)企業(yè),2010(7):14-15

[4]林慶光.原子吸收分光光度法與二氮雜菲分光光度法測(cè)水中鐵的比較[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2008,8(6):1034-1036

[5]《環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證手冊(cè)》中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè)總站編寫(xiě)組.環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證手冊(cè)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,1994:264-297

Comparison of Two Methods for Trace Iron Determination in Honey

TAN Wen-hua，CHEN Yuan*
（GuangDong YangJiang Supervision Testing Institute of Quality&Metrology，Yangjiang 529500，Guangdong，China）

The trace iron concentration in honey has been determined by phenanthroline spectrophotometry and flame atomic absorption spectrometry for quality reliability assurance.The results of two methods showed that the iron contents in honey samples were 2.49 μg/g and 2.52 μg/g，the correlation of calibration curve were both preferably，the detection limits were 0.006 mg/L and 0.01 mg/L，the precision RSDs were 0.79%and 1.80%，and the standardized recovery rates were 96.8%～102.7%.The results of these two methods had no significant difference by t-test（t=0.617，P＜0.05）.

honey；trace iron；determination method；comparison

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.08.023

譚文華（1968—），男（漢），工程師，本科，主要從事五金產(chǎn)品及食品化工的檢測(cè)研究。

*通信作者：陳圓（1987—），女（漢），工程師，碩士。

2013-10-11