任 靜，楊金榮，許煜靜

（天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070）

格列齊特（gliclazide）為第二代口服磺酰脲類降血糖藥，能降低血小板黏附力，降低血糖黏度，用于成年型糖尿病或伴有血管病變者。法國施維雅公司率先研制出了格列齊特緩釋制劑，規(guī)格為每片30 mg，2003年在中國上市，商品名為達(dá)美康。我國有多個廠家生產(chǎn)格列齊特緩釋片，其處方工藝差別大[1]。在多種pH溶出介質(zhì)中溶出曲線的測定是先進(jìn)國家藥物審評機(jī)構(gòu)評價口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段，該試驗(yàn)可用于評估不同來源的同一制劑內(nèi)在質(zhì)量差異[2-3]。本試驗(yàn)對6個市售廠家格列齊特緩釋片在3種不同釋放介質(zhì)中的體外釋放進(jìn)行研究，并與達(dá)美康緩釋片進(jìn)行比較，為評價國內(nèi)格列齊特緩釋片的質(zhì)量情況提供依據(jù)，從而為藥品的安全性、有效性和穩(wěn)定性提供保障。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 儀器 ZRS-8智能溶出儀（天津大學(xué)無線電廠），安捷倫1200系列高效液相色譜儀，BSA124S萬分之一電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.1.2 試劑 格列齊特對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號100269-201004）；格列齊特緩釋片（以下簡稱達(dá)美康，批號2001769）；其余6個廠家的格列齊特緩釋片分別為A-1（北京某藥廠，批號21311020），A-2（北京某藥廠，批號 21312029），B-1（山東某藥廠，批號131102），B-2（山東某藥廠，批號140501），C（深圳某藥廠，批號 1402064），D（山東某藥廠，批號 140306），E（海南某藥廠，批號 20131002），F(xiàn)（天津某藥廠，批號20130603）。甲醇(色譜純，天津基準(zhǔn)化學(xué)試劑有限公司)，乙腈（色譜純，J&KSCIENTIFIC TLD），三氟乙酸(色譜純，J&K SCIENTIFIC TLD)，三乙胺（色譜純，J&K SCIENTIFICTLD）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外觀檢查 觀察各廠家藥片是否完整光潔，色澤均勻，有適宜的硬度。

1.2.2 色譜條件 色譜柱：AgilentC8色譜柱（5μm，150mm× 4.6mm）；流動相：乙腈-水-三乙胺-三氟乙酸（48∶52∶0.1∶0.1）；檢測波長：228 nm；進(jìn)樣量：20 μL；柱溫：35 ℃；流速：1.0mL·min-1。

1.2.3 儲備液的配制 精密稱取格列齊特對照品約30mg，置100mL量瓶中，加甲醇5mL溶解，加pH 7.4磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋至刻度(濃度為300 μg·mL-1)，搖勻，作為儲備液。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備方法 精密量取上述儲備液 0.5、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 、6.0mL，分別置 50 mL量瓶中，加入pH 7.4 PBS稀釋至刻度，制成系列對照品溶液。在上述色譜條件下，分別量取上述溶液20μL進(jìn)樣，測定峰面積。

1.2.5 對照品溶液的配制 精密稱取格列齊特對照品約33mg，置100mL量瓶中，加甲醇5mL溶解，加 pH 7.4 PBS 稀釋至刻度(濃度為 330 μg·mL-1)，搖勻，精密量取上述儲備此液5.0mL置50mL量瓶中，加入pH 7.4 PBS稀釋至刻度，制成對照品溶液。在上述色譜條件下，分別量取上述溶液20μL進(jìn)樣，測定峰面積。

1.2.6 釋放度測定方法[4]取樣品6片，采用ChP2010年版釋放度測定法第一法裝置，以脫氣處理的pH 7.4PBS900mL為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度(37±0.5)℃，依法操作。分別在 1、2、4、6、8、10、12、24 h取溶液5mL，濾過，并及時補(bǔ)充同溫度介質(zhì)5mL，取續(xù)濾液20μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。以外標(biāo)法計算每片在不同時間的累積釋放百分率。

1.2.7 樣品在不同介質(zhì)中的釋放度測定 照1.2.6的方法，分別以pH 7.4 PBS、pH 4.5 PBS和蒸餾水作為釋放介質(zhì)，分別在 1、2、4、6、8、10、12 、24 h 取樣，考察樣品在不同介質(zhì)中的釋放情況。

1.2.8 結(jié)果判定方法

1.2.8.1 藥品標(biāo)準(zhǔn)[4]：格列齊特緩釋片在2、4、12 h的格列齊特釋放量應(yīng)分別為標(biāo)示量的17%～31%、35%～55%、75%以上。

1.2.8.2 相似因子[1，5]：將各廠家樣品釋放曲線分別與達(dá)美康釋放曲線進(jìn)行比較，計算相似因子。相似因子計算公式為 f2=50×lg{100×[1+1/n×∑(Rt-Tt)2]-0.5}，Rt與Tt分別代表參比和受試制劑第t時間點(diǎn)的平均累積釋放百分率，n為測試點(diǎn)數(shù)，若受試與參比制劑的溶出曲線間的f2值不小于50，則認(rèn)為兩者相似。

1.2.9 模型擬合 將釋藥曲線進(jìn)行零級方程、一級方程和Higuchi方程的釋藥模型擬合[6-8，10]，比較擬合參數(shù)。

1.2.10 釋放機(jī)制[10]將釋藥曲線進(jìn)行Ritger-Peppas方程釋藥模型擬合，提取參數(shù)k，確定釋藥機(jī)制。根據(jù)Ritger-Peppas方程式：Mt/M∞=ktn，對于圓柱型制劑，時間項t的指數(shù)的意義為：（1）當(dāng)n≤0.49，藥物釋放機(jī)制為Fickian擴(kuò)散；（2）0.49

1.3 參數(shù)提取與比較 將釋藥曲線以威布爾方程進(jìn)行擬合，對所得的威布爾參數(shù)m，T50，Td分別與達(dá)美康進(jìn)行比較（t檢驗(yàn)），比較 A-1，A-2 的 T50，Td（t檢驗(yàn)）[6]。

2 結(jié)果

2.1 外觀檢查 B-1廠家藥片中有邊緣不整，有明顯的吸潮膨脹現(xiàn)象，硬度小，外觀檢查不合格；其余廠家樣品外觀均合格。

2.2 格列齊特標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍 分別以峰面積作為縱坐標(biāo)，以對照品溶液濃度作為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程y=53.203x+25.967，相關(guān)系數(shù)r=0.999 6，結(jié)果表明格列齊特在 2.95～35.41μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.3 釋放度結(jié)果 不同廠家格列齊特緩釋片在不同釋放介質(zhì)中平均累積釋放百分率數(shù)據(jù)見表1～3。

2.3 結(jié)果判定

2.3.1 藥品標(biāo)準(zhǔn) 從表1中看出各廠家樣品在pH 7.4PBS中2、4、12h的釋放度數(shù)據(jù)均符合要求。

2.3.2 相似因子 各廠家樣品釋放曲線與達(dá)美康溶出曲線的相似因子見表4。從表4中可以看出在pH 7.4 PBS中，只有E廠家樣品與達(dá)美康的相似因子小于50，與達(dá)美康不相似，其余廠家樣品均與達(dá)美康相似；在pH 4.5 PBS中，只有D和E廠家樣品與達(dá)美康的相似因子大于50，其余廠家樣品均不相似；在蒸餾水中只有A-1廠家樣品與達(dá)美康的相似因子小于50，不相似，其余均相似。綜上，只有D廠家樣品在pH 7.4 PBS、pH 4.5 PBS和蒸餾水中與達(dá)美康相似。

表1 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 7.4 PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6Tab1 Accumulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentmanufacturers in phosphate buffered saline(pH 7.4)(%)(n=6

表1 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 7.4 PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6Tab1 Accumulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentmanufacturers in phosphate buffered saline(pH 7.4)(%)(n=6

時間 達(dá)美康 A-1 A-2 B-2 C D E F 1 h 8.75±0.44 9.83±0.13 9.95±0.25 16.81±2.28 12.02± 1.11 9.92±0.70 13.11±1.62 12.86±0.67 2 h 21.31±1.00 21.72±1.57 21.83±0.83 23.96±0.96 20.93± 2.38 19.43±0.92 21.29±2.12 23.91±1.09 4 h 48.62±2.20 43.60±0.41 43.68±1.84 48.85±2.58 40.80± 6.66 40.09±2.21 38.15±2.23 45.33±2.25 6 h 70.81±2.34 63.11±0.67 62.62±1.67 68.64±2.24 58.63±10.94 59.27±2.98 51.46±2.55 62.86±2.97 8 h 82.53±2.51 79.22±1.24 78.43±1.71 86.25±0.79 72.42±11.93 75.95±3.4 65.12±5.27 76.67±3.48 10 h 89.79±2.77 91.2±1.78 90.10±2.02 94.40±3.55 81.52± 9.45 89.28±1.79 76.23±4.86 84.77±3.13 12 h 95.46±3.79 96.54±1.29 95.05±1.38 93.85±4.39 85.98± 8.25 96.25±1.50 84.39±4.95 91.49±3.47 24 h 99.58±1.82 96.15±1.22 94.57±3.36 92.75±4.50 97.25± 4.60 100.77±2.64 99.58±2.21 99.46±3.74

表2 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 4.5PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6)Tab2 Accum ulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentm anufactures in phosphate bu ffered saline(pH 4.5)(%)(n=6

表2 不同廠家格列齊特緩釋片在pH 4.5PBS中的平均累積釋放百分率(%)(n=6)Tab2 Accum ulate dissolution percentage of dlam icronm r and gliclazide sustained-release tablets of differentm anufactures in phosphate bu ffered saline(pH 4.5)(%)(n=6

時間 達(dá)美康 A-1 A-2 B-2 C D E F 1 h 2.39±0.11 7.04±0.92 6.45±0.48 5.42±0.57 7.3±1.27 7.07± 0.39 4.50±1.29 4.67±0.44 2 h 6.79±0.39 16.10±2.45 14.40±1.27 14.03±1.26 17.16±2.42 12.55± 0.53 10.45±2.47 11.57±1.26 4 h 18.14±0.39 34.70±4.68 31.24±3.27 30.68±1.84 35.32±2.60 23.67±11.05 23.73±5.79 27.55±4.47 6 h 28.55±1.77 51.97±5.78 46.79±5.29 47.67±4.74 50.56±3.83 36.13± 1.63 36.34±7.94 37.56±4.95 8 h 36.46±1.85 62.55±5.71 59.43±5.53 54.97±3.27 63.76±4.97 47.70± 3.25 46.88±8.45 51.38±4.67 10 h 42.08±1.88 70.88±5.54 69.59±6.46 62.05±5.89 74.09±2.36 54.78± 3.28 54.63±8.33 60.13±4.79 12 h 46.15±1.99 75.72±5.90 75.39±6.99 64.86±7.32 78.83±1.51 59.94± 2.98 60.10±7.93 66.27±5.50 24 h 60.79±3.92 83.31±3.95 83.66±6.28 70.86±6.80 84.92±1.51 77.57± 4.25 73.61±5.54 77.16±4.55

表3 不同廠家格列齊特緩釋片在蒸餾水中的平均累積百分率(%)(n=6)Tab3 Accumu late dissolution percentageof dlam icronm r and gliclazid sustained-release tabletsof differentmanufactures in water(%)(n=6

表3 不同廠家格列齊特緩釋片在蒸餾水中的平均累積百分率(%)(n=6)Tab3 Accumu late dissolution percentageof dlam icronm r and gliclazid sustained-release tabletsof differentmanufactures in water(%)(n=6

時間 達(dá)美康 A-1 A-2 B-2 C D E F 1 h 5.31±0.42 11.04±1.14 8.70±1.00 7.14±0.44 7.78±0.73 7.42±0.56 8.32±1.68 6.47± 0.37 2 h 14.35±1.62 24.79±2.42 20.35±2.25 18.20±1.15 18.09±1.53 16.75±1.05 18.31±3.67 15.89± 0.62 4 h 39.43±4.71 54.47±4.69 43.88±4.26 38.45±1.88 41.83±4.25 40.48±3.90 41.52±5.84 38.58±11.43 6 h 57.94±6.38 77.40±2,51 67.26±5.80 56.38±1.82 62.24±3.94 64.25±4.29 60.99±6.66 59.20± 1.99 8 h 72.26±7.92 90.61±3.11 83.71±5.72 67.09±1.58 75.64±3.65 77.64±3.92 71.97±6.56 73.70± 2.28 10 h 80.89±6.74 96.47±1.43 90.75±4.91 72.54±1.62 85.21±2.74 84.15±2.96 79.63±4.19 84.45± 2.49 12 h 87.99±3.40 97.49±1.00 92.52±4.37 74.90±2.31 88.99±2.14 86.76±1.63 82.52±3.01 90.32± 1.90 24 h 94.03±2.97 96.85±0.69 97.28±1.50 82.24±2.51 93.72±1.8 87.95±1.76 83.83±1.68 94.90± 1.05

表4 不同廠家格列齊特緩釋片與達(dá)美康釋放曲線的相似因子Tab4 f2 factor of gliclazid sustained-release tablets of 6 manufactures

A廠家兩批產(chǎn)品A-1與A-2在pH 7.4 PBS、pH4.5 PBS中，相似因子差異很小，但在蒸餾水釋放介質(zhì)中，相似因子差異大。

2.3.3 模型擬合 根據(jù)上述釋放度測定結(jié)果，對達(dá)美康及6個不同廠家產(chǎn)品進(jìn)行釋藥模型擬合，在pH 7.4PBS中，達(dá)美康一級方程擬合度的相關(guān)系數(shù)較高，為0.995 5，其余廠家產(chǎn)品Higuchi方程擬合的相關(guān)系數(shù)較高，均大于等于0.984。在pH 4.5 PBS和蒸餾水中，所有廠家產(chǎn)品一級方程擬合度的相關(guān)系數(shù)較高。

2.3.4 釋藥機(jī)制比較 將不同釋放介質(zhì)中的平均累積釋放百分?jǐn)?shù)帶入Ritger-Peppas方程Mt/M∞=ktn,提取參數(shù) n（表 5）。

從表5可以看出，達(dá)美康在3種介質(zhì)中均為骨架溶蝕機(jī)制。市售樣品在pH 7.4 PBS中，只有E廠產(chǎn)品的釋放機(jī)制為擴(kuò)散與骨架溶蝕機(jī)制相結(jié)合(0.49

表5 不同廠家格列齊特緩釋片在不同介質(zhì)中的Ritger-Peppas方程參數(shù)nTab5 Param eters n in Ritger-Peppas equation for gliclazid sustained-release tablets of 6 m anu factures in different dissolutionmedium s

2.3.5 威布爾方程擬合參數(shù)比較 不同釋放介質(zhì)中的平均累積釋放百分?jǐn)?shù)帶入威布爾（Weibull）概率分布函數(shù)表達(dá)式提取參數(shù)m（形態(tài)參數(shù)）、T50（釋放50%所需的時間）、Td（釋放 63.2%所需的時間），結(jié)果見表7。對所得參數(shù)T50、Td分別與達(dá)美康進(jìn)行t檢驗(yàn)。

從表7中可以看出，在pH 7.4 PBS中，B-2廠家產(chǎn)品與達(dá)美康T50、Td有顯著差異（P<0.01），其余無明顯差異（P>0.05）；在pH 4.5 PBS中，所有廠家產(chǎn)品與達(dá)美康T50、Td的P均小于0.05，有差異；在蒸餾水中，B-2、E和F廠家與達(dá)美康T50、Td無明顯差異（P>0.05），其余廠家有明顯差異（P<0.01）。綜上，D、E和F廠家產(chǎn)品與達(dá)美康T50，Td差異較小。

A廠家兩批產(chǎn)品A-1與A-2在pH 7.4 PBS和pH 4.5 PBS中，T50、Td與達(dá)美康無明顯差異（P>0.05），在蒸餾水中有顯著差異（P<0.01）。

表6 6個不同廠家格列齊特緩釋片在不同介質(zhì)中的溶出參數(shù)(%)(n=6，)Tab6 Dissolution degreesparametersofgliclazid sustained-release tabletsof6manufacturesin 3 differentdissolutionmedium s(%)(n=6)

表6 6個不同廠家格列齊特緩釋片在不同介質(zhì)中的溶出參數(shù)(%)(n=6，)Tab6 Dissolution degreesparametersofgliclazid sustained-release tabletsof6manufacturesin 3 differentdissolutionmedium s(%)(n=6)

與達(dá)美康比較**0.01

參數(shù) 達(dá)美康 A-1 A-2 B-2 C D E F PBSpH7.4 m 1.42±0.04 1.34±0.03 1.33±0.02 1.29±0.09 1.20±0.10 1.21±0.03 1.04±0.05 1.15±0.04 T50/h 4.17±0.18 4.32±0.10 4.32±0.19 3.87±0.16***4.87±0.98 4.68±0.26 4.98±1.06 4.32±0.27 Td/h 5.41±0.26 5.67±0.15 5.69±0.27 5.15±0.19***6.73±1.60 6.51±0.36 7.18±1.38 5.95±0.43 m 1.51±0.07 1.14±0.04 1.44±0.05 1.05±0.04 1.39±0.03 1.43±0.04 1.26±0.05 1.45±0.05蒸餾水 T50/h 5.36±0.62 3.56±0.30*** 4.31±0.46*** 6.38±0.21 4.79±0.35*** 4.90±0.38*** 5.17±0.67 5.09±0.18 Td/h 6.84±0.86 4.57±0.41*** 5.57±0.64*** 9.05±0.32 6.24±0.47** 6.37±0.53** 6.91±0.84 6.55±0.27 PBSpH4.5 m 1.32±0.04 1.22±0.05 1.25±0.05 1.21±0.10 1.23±0.09 1.05±0.07 1.24±0.02 1.26±0.05 T50/h 10.81±0.48 6.22±0.78*** 6.22±0.7*** 7.02±1.11***5.95±0.38*** 9.11±0.57*** 9.08±1.67** 7.94±0.89***Td/h 14.13±0.73 8.40±1.10*** 8.90±1.02*** 9.47±1.73***8.03±0.56*** 12.94±1.05*** 12.22±2.23*** 10.61±1.25***

3 討論

本研究的6個廠家產(chǎn)品雖均從市場流通環(huán)節(jié)獲得，但仍不能排除因生產(chǎn)規(guī)模和生產(chǎn)工藝而造成的固體制劑的內(nèi)在品質(zhì)存在的差異。研究結(jié)果顯示在pH 7.4 PBS和蒸餾水中，不同廠家的格列齊特緩釋片釋放曲線與達(dá)美康基本相似，而在pH 4.5 PBS中，各廠家樣品的釋放曲線與達(dá)美康體現(xiàn)出明顯的差異。

釋放曲線相似因子和釋藥機(jī)制的綜合比較顯示，在3種不同釋放介質(zhì)中，由于原研藥達(dá)美康的釋藥機(jī)制為骨架溶蝕且n值大于1，市售產(chǎn)品的n值較小，越接近或小于0.84時，就可能表現(xiàn)出擴(kuò)散與骨架溶蝕機(jī)制相結(jié)合的釋藥機(jī)制，與達(dá)美康差異越大，相似因子就會偏低，甚至小于50。綜合比較，只有D廠家與原研藥達(dá)美康在3種不同釋放介質(zhì)中與達(dá)美康釋放機(jī)制相似且相似因子均大于50。6個廠家產(chǎn)品在pH 4.5 PBS差異體現(xiàn)最為明顯。釋放程度偏大是所有廠家產(chǎn)品共同的問題。威布爾函數(shù)參數(shù)的綜合比較顯示，D、E和F廠家與原研藥達(dá)美康在3種不同釋放介質(zhì)中溶出參數(shù)與達(dá)美康差異較小。

B-1廠家藥片外觀檢查不合格，判斷可能是由于包裝材料不合格造成的。A廠家兩批產(chǎn)品相似因子、溶出參數(shù)、釋藥機(jī)制參數(shù)的比較均顯示在pH7.4 PBS和pH4.5 PBS中無明顯差異，在蒸餾水中有顯著差異，說明A廠家產(chǎn)品批間存在差異。

溶出度是評價口服固體藥物制劑內(nèi)在品質(zhì)優(yōu)劣的核心技術(shù)所在，由于與生物利用度密切相關(guān)，故提高溶出度要求，可大大提高在各種人群體內(nèi)的生物利用度，從而促進(jìn)制藥企業(yè)在科研、技術(shù)人員上的投入，使得安全、有效、技術(shù)含量高的產(chǎn)品充分占領(lǐng)市場。日本、美國已先后推出日本參比制劑目錄、固體制劑溶出曲線數(shù)據(jù)庫來提高仿制藥的內(nèi)在品質(zhì)，使仿制藥具有與原創(chuàng)藥相同的生物等效性。因此通過國家藥品審評部門加大對溶出度試驗(yàn)的審評力度并逐步提高標(biāo)準(zhǔn)，與國際接軌，可促進(jìn)我國藥品生產(chǎn)工藝的提高，推動藥品生產(chǎn)企業(yè)對制劑工藝的深入研究，帶動藥學(xué)高等教育的發(fā)展，同時拉動我國藥用輔料行業(yè)、制藥機(jī)械設(shè)備等行業(yè)的發(fā)展和進(jìn)步，并對藥品研發(fā)公司的整合、企業(yè)兼并的市場行為也必將具有積極的促進(jìn)作用。

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