李昆 樊云燕 閆學(xué)艷 周姣 張錦華

摘 要：本試驗?zāi)康脑谟谘芯慷喾N不同飼料添加劑類抗生素對產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌試驗，篩選出對產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌效果強(qiáng)的藥物，為飼料、養(yǎng)殖業(yè)臨床上控制產(chǎn)氣莢膜梭菌提供理論依據(jù)。試驗選用喹乙醇、4 %恩拉霉素、鹽霉素、硫酸黏霉素、15 %桿菌肽鋅、黃霉素、吉他霉素和鹽酸金霉素八種飼料常用抗生素添加劑，采用試管稀釋法對豬源產(chǎn)氣莢膜梭菌野毒株進(jìn)行抑菌試驗。

試驗結(jié)果表明：（1）恩拉霉素抑菌作用最強(qiáng)，其MIC為1.6 μg/mL；（2）喹乙醇和15 %桿菌肽鋅抑菌作用較強(qiáng)，它們的MIC分別為4 μg/mL和6 μg/mL；（3）黃霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用較弱，它們的MIC分別為40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；（4）鹽霉素及鹽酸金霉素對該產(chǎn)氣莢膜梭菌野毒株幾乎沒有抑菌作用。由以上八種抗生素對產(chǎn)氣莢膜梭菌的抑菌試驗結(jié)果得出，八種抗生素對該產(chǎn)氣莢膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，而恩拉霉素對產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌效果最強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：飼料添加劑類抗生素；豬源產(chǎn)氣莢膜梭菌野毒株；抑菌試驗；最低抑菌濃度（MIC）

中圖分類號：S852.61+6.3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1001-0769（2015）11-0046-02

產(chǎn)氣莢膜梭菌（Clostridium Perfringens）是一種革蘭氏陽性的專性厭氧桿菌，因其能形成芽孢的特性，故能夠存在于豬的生態(tài)系統(tǒng)中[1]。在自然界也分布極廣，可見于土壤、污水、飼料、食物、糞便以及動物腸道等中，也是動物腸道的正常菌群之一[2]。

產(chǎn)氣莢膜梭菌致病作用主要在于它所產(chǎn)生的毒素，目前依據(jù)該菌能產(chǎn)生四種不同的主要毒素，將其分為A、B、C、D和E五個型[3]。而引起豬氣性壞疽、腸毒血癥和壞死性腸炎，主要是A型或C型產(chǎn)氣莢膜梭菌[2]。A型產(chǎn)氣莢膜梭菌感染率非常高，Gloria等在2011年調(diào)查48個豬場中產(chǎn)氣莢膜梭菌流行情況中得出，87.5 %（42/48）的豬場存在A型產(chǎn)氣莢膜梭菌感染[4]。Abdolvahab等在研究46頭仔豬產(chǎn)氣莢膜梭菌后得出，A型產(chǎn)氣莢膜梭菌感染率100 %[5]。由于產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種條件性致病菌，一般情況下不發(fā)病，但在飼養(yǎng)管理不良、衛(wèi)生條件差等不利條件下，動物腸道內(nèi)環(huán)境菌群紊亂，很容易引起產(chǎn)氣莢膜梭菌的大量繁殖產(chǎn)生毒素，進(jìn)而導(dǎo)致產(chǎn)氣莢膜梭菌性疾病發(fā)生[6，7]。該菌導(dǎo)致的豬猝死癥發(fā)病急、病程短、死亡率高，為了減少產(chǎn)氣莢膜梭菌給養(yǎng)殖業(yè)帶來的損失，應(yīng)加強(qiáng)疾病預(yù)防。本實驗從江西萬年縣分離出一株產(chǎn)氣莢膜梭菌，針對性地對江西地區(qū)的產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行飼料添加劑的抑菌實驗，故選用了多種飼料添加劑類抗生素對產(chǎn)氣莢膜梭菌進(jìn)行抑菌效果比較，研究出抑菌效果比較好的抗生素飼料添加劑，為飼料、養(yǎng)殖業(yè)臨床應(yīng)用提供一些理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗菌株

由本實驗室在江西萬年縣于2015年，從1～7日齡腹瀉仔豬分離、鑒定和保存的A型產(chǎn)氣莢膜梭菌。

1.1.2 培養(yǎng)基

液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（FTG）、胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸（TSC）瓊脂，均購置南昌萬特科技有限公司。

1.1.3 試驗藥物（表1）

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗藥物的處理

根據(jù)獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對上述4 %恩拉霉素等八種藥物進(jìn)行處理，對藥物進(jìn)行溶解后于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 產(chǎn)氣莢膜梭菌的準(zhǔn)備

將保存的菌于TSC瓊脂劃線復(fù)蘇，挑單個黑色菌落至10 mL FTG液體培養(yǎng)基中，37 ℃厭氧培養(yǎng)10 h后，用滅菌FTG培養(yǎng)基稀釋到0.5麥?zhǔn)媳葷峁埽?×106 CFU/mL）濃度，待用。

1.2.3 采用試管稀釋法測定八種藥物的最低抑菌濃度

預(yù)實驗確定各種藥物最低抑菌濃度（MIC）范圍，將處理好的藥物用滅菌水進(jìn)行倍比稀釋，與A型產(chǎn)氣莢膜梭菌分別加入FTG液體培養(yǎng)基中，使各種藥物在試管中的終濃度如表2，將試驗試管于37 ℃中培養(yǎng)24 h，通過肉眼觀察細(xì)菌生長情況。試驗結(jié)束后，如試管中的溶液澄清透明，說明沒有細(xì)菌生長；如試管中有絮狀細(xì)菌或混濁，說明有細(xì)菌生長。通過細(xì)菌是否生長來判定藥物的MIC。

2 結(jié)果

（1） 4 %恩拉霉素對A型產(chǎn)氣夾膜梭菌的抑菌試驗結(jié)果如圖1。

從圖1可以看出1～3號試管中的溶液澄清透明，說明沒有細(xì)菌生長；5號試管中的溶液有絮狀物，6～7號試管渾濁，說明有細(xì)菌生長。因此，本試驗中恩拉霉素對產(chǎn)氣莢膜梭菌最小抑菌濃度（MIC）為1.6 μg/mL。

（2） 八種藥物對A型產(chǎn)氣莢膜梭菌野毒株的抑菌結(jié)果見表3。

3 結(jié)論

豬產(chǎn)氣莢膜梭菌病主要是由A或C型產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的一種傳染病，該病主要發(fā)生在1～7日齡新生仔豬，引起仔豬腹瀉，發(fā)病急、病程短、死亡率高[8]。產(chǎn)氣莢膜梭菌是一種條件性致病菌，鑒于產(chǎn)氣莢膜梭菌的高感染率，實驗選取八種常用飼料添加劑類抗生素，對其進(jìn)行抑菌試驗得出MIC，為預(yù)防產(chǎn)氣莢膜梭菌性疾病提供參考依據(jù)，并減少養(yǎng)殖業(yè)損失。

由本試驗結(jié)果得出，八種抗生素對A型產(chǎn)氣莢膜梭菌野毒株均有不同程度的抑菌作用，其中以恩拉霉素抑菌作用最強(qiáng)，其MIC為1.6 μg/mL；其次為喹乙醇和15 %桿菌肽鋅，他們的 MIC分別為4 μg/mL和6 μg/mL；最后黃霉素、硫酸黏霉素、吉他霉素抑菌作用較弱，他們的MIC分別為40 μg/mL、200 μg/mL、300 μg/mL；而鹽霉素和鹽酸金霉素對該A型產(chǎn)氣莢膜梭菌野毒株幾乎沒有抑制作用。鄒君彪[9]曾做過不同抗生素對產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌試驗研究，其結(jié)果也表明恩拉霉素對產(chǎn)氣莢膜梭菌抑菌效果最強(qiáng)。

恩拉霉素在腸道內(nèi)不被降解，能夠保持原有的抗菌活性，且具有毒性低和優(yōu)良的促生長及改善飼料利用率的作用[10]，在臨床上預(yù)防產(chǎn)氣莢膜梭菌病性疾病中具有參考意義。

參考文獻(xiàn)：（10篇，略）