郝永娟+霍建飛+高葦+劉春艷+王萬立

摘 要： 為了明確天津地區(qū)番茄灰霉病菌的抗藥性現(xiàn)狀，采用菌絲生長速率法檢測了天津地區(qū)21個(gè)菌株對6種殺菌劑的敏感性。結(jié)果表明，所測菌株對多菌靈的抗性頻率為76.19%，高抗菌株抗性頻率達(dá)19.05%；對嘧霉胺的抗性頻率為71.42%，高抗菌株頻率達(dá)2.85%；對乙霉威的抗性頻率為42.86%，高抗菌株抗性頻率為28.57%；對異菌脲的抗性頻率為80.95%，無高抗菌株；對腐霉利的抗性頻率為80.95%，高抗菌株抗性頻率為19.05%，對咪鮮胺均表現(xiàn)敏感。42.86%的菌株對5種殺菌劑產(chǎn)生抗性，61.90%的菌株對4種以上藥劑產(chǎn)生抗性。因此，6種新型殺菌劑中啶菌惡唑、苯醚甲環(huán)唑及咯菌腈對抗性菌株的抑菌活性較高，可供生產(chǎn)上選擇使用。

關(guān)鍵詞：番茄；灰霉病菌；抗藥性檢測

中圖分類號：S436.412.1+3 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.10.020

Abstract： To investigate the resistance status of Botrytis cinerea on tomato in Tianjin， 21 B. cinerea strains were isolated from the diseased tomato fruits or leaves in different regions of Tianjin，and subjected to the mycelia growth inhibition assay of six frequently-used fungicides （carbendazim， pyrimethanil， diethofencarb， iprodione， procymidone， and prochloraz）. The results showed that the resistance frequency of these strains to carbendazim was 76.19%， and the highly-resistant frequency was 19.05%； the resistance frequency to Pyrimethanil was 71.42%， and the highly-resistant frequency was 2.85%； the resistance frequency to Diethofencarb was 42.86%， and the highly-resistant frequency was 28.57%； the resistance frequency to Iprodione was 80.95%， but no highly-resistant stain was detected； the resistance frequency to Procymidone was 80.95%， the highly-resistant frequency was 19.05%； all isolates were sensitive to Prochloraz. Among these detected 21 isolates， 42.86% strains had resistance to five kinds of fungicides， 61.90% isolates had resistance to four kinds of fungicides. Taken together， among these six frequently-used fungicides in Tianjin， SYP-Z048，Difenoconazole and Fludioxonil of six new kind fungicides could be recommended for the management of B. cinerea owing to their good inhibitory effect to all detected strains even to resistance stains.

Key words： tomato； Botrytis cinerea； resistance detection

番茄灰霉?。˙otrytis cinerea Pers）是保護(hù)地番茄生產(chǎn)中的一種重要低溫高濕病害。隨著保護(hù)地栽培面積不斷擴(kuò)大，灰霉病的發(fā)生日益嚴(yán)重，一般造成產(chǎn)量損失15%～ 30% ， 局部減產(chǎn)70% 以上甚至絕收。生產(chǎn)上以化學(xué)藥劑防治為主，常用的殺菌劑主要包括苯并咪唑類的多菌靈， 二甲酰亞胺類的腐霉利和N-苯氨基甲酸酯類的乙霉威等[1] 。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[2-4]， 在田間都發(fā)現(xiàn)了這幾類藥劑的單抗或多抗菌株，灰霉病菌有寄主范圍廣、繁殖快和遺傳變異頻繁等特點(diǎn)，使其極易對殺菌劑產(chǎn)生抗性，這為灰霉病的有效防治提出了更高的要求。為了解天津地區(qū)番茄灰霉病菌的抗藥情況，筆者測定了天津地區(qū)番茄灰霉病菌對當(dāng)前一些常用殺菌劑的敏感性，了解灰葡萄孢菌對這些化學(xué)殺菌劑的抗性頻率和水平變化，并且不斷篩選新的替代殺菌劑，滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的需要，以指導(dǎo)天津不同區(qū)縣的番茄種植基地科學(xué)有效地防治灰霉病，延長殺菌劑的使用壽命，減少殺菌劑的盲目使用，減輕對環(huán)境的污染。

1 材料和方法

1.1 病菌來源

2010—2013年在天津蔬菜主產(chǎn)區(qū)日光溫室或塑料大棚內(nèi)分離純化得到21個(gè)番茄灰霉病單孢菌株，見表1。

1.2 供試藥劑

95%多菌靈、96%嘧霉胺，天津施普樂農(nóng)藥技術(shù)發(fā)展有限公司產(chǎn)品；99.5%腐霉利、90%乙霉威、96.7%異菌脲均由農(nóng)藥部藥檢所提供；97%咪鮮胺，江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司產(chǎn)品；96.8%苯醚甲環(huán)唑，浙江禾本農(nóng)化有限公司；98.6%嘧菌酯，利民化工有限公司；91.7%啶酰菌胺，巴斯夫中國有限公司；90%啶菌噁唑，沈陽化工研究院；98%嘧菌環(huán)胺，北京燕化永樂農(nóng)藥有限公司；95%咯菌腈，北京燕化永樂農(nóng)藥有限公司提供。

1.3 含藥培養(yǎng)基的制備

將腐霉利、乙霉威、嘧霉胺、異菌脲、咪鮮胺、嘧菌酯、啶酰菌胺、啶菌噁唑、嘧菌環(huán)胺、苯醚甲環(huán)唑及咯菌腈原藥用少量丙酮或二甲基甲酰胺溶解（溶劑的最終含量<0.5%），再用含0.05%吐溫80的無菌水稀釋成10 000 μg·mL-1的母液，依次稀釋成系列濃度；多菌靈原藥則用1% 鹽酸溶液溶解， 配制成10 000 μg·mL-1的母液，再用無菌水稀釋至系列濃度。按培養(yǎng)基與藥液1：9 混合均勻后倒入直徑9 cm 培養(yǎng)皿中， 每皿10 mL，配成系列濃度的含藥培養(yǎng)基。

1.4 抗藥性檢測

抗藥性用菌落生長測定法進(jìn)行測定[3]。將以上培養(yǎng)的菌株用直徑的打孔器沿菌落邊緣打取菌塊， 分別接種到含系列濃度的多菌靈、腐霉利、乙霉威、異菌脲、腐霉利及咪鮮胺的培養(yǎng)基平板上， 每平板測定2個(gè)菌株， 重復(fù)4次。置于23.5 ℃下培養(yǎng)48 h量取菌落直徑， 將試驗(yàn)結(jié)果用DPS數(shù)據(jù)軟件進(jìn)行處理，計(jì)算不同藥劑的毒力回歸方程、相關(guān)系數(shù)、致死中濃度EC50值等。對4種以上殺菌劑產(chǎn)生不同程度抗性的菌株，再測定對近幾年應(yīng)用的新型殺菌劑嘧菌酯、啶酰菌胺、啶菌噁唑、嘧菌環(huán)胺、苯醚甲環(huán)唑及咯菌腈的敏感性。

1.5 抗藥性程度劃分標(biāo)準(zhǔn)

參考國內(nèi)外資料并略作調(diào)整，多菌靈、腐霉利、乙霉威的抗性標(biāo)準(zhǔn)參考張從宇等[5-9]；嘧霉胺的抗性標(biāo)準(zhǔn)參考李興紅等[10]；異菌脲的抗性標(biāo)準(zhǔn)參考張傳清[1]；咪鮮胺參考奉代力等 [11]，具體見表2。

2 結(jié)果與分析

表3、表4的檢測結(jié)果顯示，同一種藥劑對不同地區(qū)的菌株抑菌活性差異很大。檢測天津地區(qū)番茄灰霉病菌對多菌靈的抗性頻率為76.19%，高抗菌株抗性頻率已達(dá)19.05%，對多菌靈高抗的菌株EC50值最高達(dá)857.80 μg·mL-1；對嘧霉胺的抗性頻率為71.42%，高抗菌株頻率達(dá)2.85%，對嘧霉胺高抗的菌株EC50值最高達(dá)24 505.03 μg·mL-1；對乙霉威的抗性頻率為42.86%，高抗菌株抗性頻率為28.57%，對乙霉威高抗的菌株EC50值最高達(dá)29 814.30 μg·mL-1；對異菌脲的抗性頻率為80.95%，無高抗菌株；對異菌脲高抗的菌株EC50值最高達(dá)18.64 μg·mL-1；對腐霉利的抗性頻率為80.95%，高抗菌株抗性頻率為19.05%，對腐霉利高抗的菌株EC50值最高達(dá)191.28 μg·mL-1；所測菌株對咪鮮胺均表現(xiàn)敏感。

檢測的21個(gè)菌株其中有60.90%菌株對常見4種以上殺菌劑產(chǎn)生不同程度抗性。其中42.86%的菌株對多菌靈、嘧霉胺、乙霉威、異菌脲及腐霉利產(chǎn)生抗性（CRBRDRIRPR型），并且抗性水平較高，19.05%的菌株對上述5種殺菌劑的4種產(chǎn)生抗性（CRBRDSIRPR型及CRBRDRISPR型），抗性水平以中抗及高抗為主。13個(gè)菌株對幾種新型殺菌劑的敏感性見表5。參試的6種不同類型的殺菌劑對13株抗性菌表現(xiàn)不同程度的抑菌活性，所有菌株對啶菌惡唑的EC50值均小于1 μg·mL-1，參試菌株對咯菌腈的EC50值也均小于1 μg·mL-1，苯醚甲環(huán)唑?qū)颐共【脖憩F(xiàn)很好的抑菌活性，啶酰菌胺、嘧菌環(huán)胺及嘧菌酯對不同菌株的抑菌活性差異較大，有可能是近幾年這些新藥在一些地區(qū)推廣，頻繁應(yīng)用也產(chǎn)生了一定的抗性。

不同地區(qū)來源的菌株對不同殺菌劑抗性表現(xiàn)不同。天津農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物中心番茄育種棚的3個(gè)菌株對嘧霉胺均表現(xiàn)高抗，生產(chǎn)上應(yīng)避免使用同類藥劑；薊縣侯家營鎮(zhèn)為新發(fā)展蔬菜基地，2個(gè)菌株對嘧霉胺、異菌脲及腐霉利已表現(xiàn)中高抗，應(yīng)減少使用；武清區(qū)大良鎮(zhèn)后趕地區(qū)早春種植番茄20余年，菌株對嘧霉胺、乙霉威及腐霉利均高抗；天津植保所試驗(yàn)溫室每年2茬番茄，以推廣示范新型殺菌劑為主，參試5個(gè)菌株以敏感和低抗為主；寧河運(yùn)河蔬菜基地菌株對多菌靈及嘧霉胺高抗；農(nóng)業(yè)科學(xué)院設(shè)施所菌株表現(xiàn)敏感；寶坻新開口鎮(zhèn)蔬菜基地菌株無高抗；靜?？h良王莊菌株以中抗為主，西釣臺(tái)菌株對乙霉威表現(xiàn)高抗；北辰區(qū)雙街鎮(zhèn)菌株以敏感為主，對多菌靈及嘧霉胺中抗；西青區(qū)木廠、水高莊及當(dāng)城菌株均產(chǎn)生不同程度抗性，青凝侯菌株對多菌靈高抗。

3 討 論

番茄灰霉病已成為早春及冬季番茄生產(chǎn)的制約因素，生產(chǎn)上以化學(xué)藥劑為主，灰霉病菌對殺菌劑極易產(chǎn)生抗藥性，通過菌絲生長抑制法測定了天津地區(qū)主要蔬菜產(chǎn)區(qū)的番茄灰霉病菌對常規(guī)殺菌劑苯并咪唑類（多菌靈）、苯氨基嘧啶類（嘧霉胺）、N-苯氨基甲酸酯類（乙霉威）、二甲酰亞胺類（異菌脲、腐霉利）及咪鮮胺（咪唑類）的抗性情況，除咪鮮胺表現(xiàn)敏感外，其余均產(chǎn)生不同程度的多重抗性。一般情況下，高抗菌株占總菌株的20%以上，該藥劑就失去了使用價(jià)值，本試驗(yàn)檢測乙霉威的高抗菌株達(dá)28.57%，生產(chǎn)上已不適宜使用；多菌靈及腐霉利的高抗菌株均達(dá)19.05%，應(yīng)限制使用次數(shù)和劑量，降低田間的選擇壓力；嘧霉胺以中高抗為主，灰霉病菌對嘧霉胺的抗性是由單個(gè)質(zhì)量基因控制的，高抗菌株非常容易產(chǎn)生[7]，EC50值最高達(dá)24 505.03 μg·mL-1；異菌脲無高抗菌株，以低抗為主，與報(bào)道一致，說明這類藥劑的田間抗性風(fēng)險(xiǎn)比較低[8]；所有菌株對咪鮮胺敏感，可以與其他藥劑交替使用。隨著常規(guī)藥劑多重抗藥性的產(chǎn)生，通過篩選對多重抗藥性菌株具有較高活性的新型殺菌劑為治理番茄灰霉病的抗性起到指導(dǎo)作用[12-13]，啶菌惡唑、苯醚甲環(huán)唑及咯菌腈等生產(chǎn)上應(yīng)注意保護(hù)性使用，一個(gè)生長季限制使用次數(shù)，或與其它藥劑混合使用，降低使用劑量。

結(jié)合菌株來源可以看出，菌株抗性與某一個(gè)地區(qū)的用藥歷史及用藥水平相關(guān)[14]，抗性菌株的產(chǎn)生與該地區(qū)長期使用相同類型藥劑有關(guān)。

灰霉病菌的抗性治理是田間防治工作中一個(gè)迫切需要解決的問題，不僅可以降低無效的防治成本，而且可以減輕農(nóng)藥對環(huán)境的污染。對于一種高效藥劑應(yīng)盡量延緩其抗藥性的產(chǎn)生，延長藥劑的使用年限。加強(qiáng)不同地區(qū)的抗性監(jiān)測，保護(hù)性用藥，在不同抗性水平地區(qū)采取生物防治或生物菌劑與化學(xué)藥劑協(xié)同應(yīng)用[15]、調(diào)整栽培制度、加大通風(fēng)降濕等生態(tài)防治的綜合防控措施是解決抗性問題的有效途徑。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張傳清，張雅，魏方林，等. 設(shè)施蔬菜灰霉病菌對不同類型殺菌劑的抗性檢測[J]. 農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào) 2006， 8（ 3）： 245-249.

[2] 張從宇，張子學(xué)，崔廣榮，等.安徽省番茄灰霉菌抗藥性測定和治理[J].植物保護(hù)，2006，32（3）：32-34.

[3] 朱桂寧，黃福新，蔡健和，等.廣西番茄灰霉病菌的多重抗藥性檢測[J].中國蔬菜，2003（4）：14—16.

[4] 喬廣行，林秀敏，黃金寶，等. 8種殺菌劑對番茄灰霉病菌多重抗藥性菌株生物活性測定[J].農(nóng)藥，2013，52（1）：57-59.

[5] 劉波， 葉鐘音， 劉經(jīng)芬，等. 對多菌靈、速克靈具有多重抗性的灰霉病菌菌株性質(zhì)的研究[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1993，16（3）：50-54.

[6] BEEVER R E， LARACY E P， PAK H A. St rain of Botrytis cinerea resist ant t o dicarboximide and benzimidaole fungicides in New Zealand Vineyards [J]. Plant Pathology， 1989， 38：427- 437.

[7] YARDEN O， KATAN T. Mutations leading to substitutions at amino acids 198 and 200 of beta- tubulin that correlat e with benomyl- resistance phenotypes of field strains of Botrytis cinerea [J]. Phyto Pathology，1993，83：1478-1483.

[8] NORTHOVER J. Presist ence of dicarboximide resist ant Botrytis cinerea in Onario vineyards [J]. Canadian Journal of Plant Pathology， 1988，10： 123-132.

[9] 丁中， 劉峰， 王會(huì)利，等.番茄灰霉菌的多重抗藥性研究[J].山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版， 2001， 32（4）：452-456.

[10] 李興紅，喬廣行，黃金寶， 等.北京地區(qū)番茄灰霉病菌對嘧霉胺的抗藥性檢測[J].植物保護(hù)，2012，38（4）：141-143.

[11] 奉代力，王強(qiáng)，鄭紀(jì)慈，等. 幾種殺菌劑對番茄灰霉病菌的抑菌效果對比研究[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)， 2013，25（1）：119-123.

[12] 紀(jì)軍建，張小鳳，韓秀英，等. 8種殺菌劑對番茄灰霉病菌的毒力及田間番茄灰霉病菌對咯菌腈的敏感性[J].植物保護(hù)，2012，38（63）：144-146.

[13] 陳治芳，王文橋，韓秀英，等. 新殺菌劑對番茄灰霉病菌的室內(nèi)毒力及田間防效[J]. 植物保護(hù)，2011， 37（5）： 193-195.

[14] ROSSLENBROICH H J， STUEBLER D. Botrytis cinerea history of chemical control and novel fungicides for its management [J].Crop Protection， 2000， 19： 557-561.

[15] 王芊.番茄灰霉病菌抗藥性及抗藥性控制研究[D].哈爾濱： 東北林業(yè)大學(xué)，2007.

[16] 單麗萍，王昌祿，李貞景，等.鏈霉菌TD-1對番茄灰霉病菌的抑制及防御酶活性的影響[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2015（2）：100-103.