何衛(wèi)華

（解放軍第四醫(yī)院藥械科，青海　西寧　810007）

野生與栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨藥效學(xué)的比較研究

何衛(wèi)華

（解放軍第四醫(yī)院藥械科，青海西寧810007）

目的 研究野生和栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨的乙醇提取物對(duì)CC14致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法采用一次性腹腔注射四氯化碳花生油（0.12%）方法制造染毒小鼠模型，分別給其注射不同劑量的野生和不同劑量、不同地點(diǎn)的栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨對(duì)模型動(dòng)物進(jìn)行干預(yù)性保護(hù)，然后測(cè)定不同實(shí)驗(yàn)組小鼠的ALT和AST活性。結(jié)果 不同劑量的野生和不同劑量、不同地點(diǎn)的栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨均能降低四氯化碳導(dǎo)致的小鼠血清ALT和AST活性升高。結(jié)論 栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨完全可以代替野生種，同樣對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。

川西獐牙菜；橢圓葉花錨；四氯化碳；肝損傷

川西獐牙菜Swertia mussotii和橢圓葉花錨Halenia elliptica為龍膽科Gentianaceae兩種二年生多分枝草本植物，廣泛分布于青海省玉樹州及其他牧區(qū)的高山草甸、沼澤、灌叢、草地以及田埂中，主要生長(zhǎng)于海拔2 400 m以上的青藏高原地區(qū)。其性寒、味苦，有清肝利膽、清熱解毒、祛濕、消炎愈瘡的功效［1］。目前，對(duì)龍膽科植物藥理和化學(xué)性質(zhì)的研究已有較多報(bào)道［2］，已從獐牙菜屬和花錨屬的多種植物中分離出100多種不同類型的化合物，包括黃酮、苷類、萜類、內(nèi)酯、生物堿、有機(jī)酸等［3-7］，并對(duì)兩種植物的生物活性進(jìn)行了研究［8-11］。迄今為止，關(guān)于野生與栽培川西獐牙菜和橢葉花錨藥效學(xué)的比較研究國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)采用兩種藏藥的乙醇提取物對(duì)CC14致小鼠急性肝損傷模型的作用，闡述了野生與栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨的藥效學(xué)，旨在為栽培藏藥川西獐牙菜和橢圓葉花錨能否代替野生藏藥的研究提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種純系健康小白鼠，體質(zhì)量18～20 g，由蘭州生物制品廠提供，合格證號(hào)SCXK（蘭）2010-0008。

1.1.2藥品與試劑 四氯化碳分析純（廣東西隴化工廠，用花生油配成0.12%）；食用魯花花生油；吐溫80（萊陽市雙雙化工有限公司）；谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒（南京建成生物工程研究所）；谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.1.3儀器與設(shè)備 721分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；高速臺(tái)式離心機(jī)、高速冷凍離心機(jī)（上海安亭儀器廠）；電子分析天平；電熱鼓風(fēng)干燥箱（重慶實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）；電熱恒溫水浴鍋（北京科學(xué)儀器廠）；勻漿機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；低溫冰箱；微量加樣器100UI、250UI、500UI、1000UI（上海求精生化試劑儀器有限公司）。

1.2方法

1.2.1乙醇提取物 將藥材進(jìn)行粉碎，測(cè)定含水量后取1 kg干品，用90%乙醇以1∶8熱提2h，提后濾去上清液，濾出物以上述條件繼續(xù)提取，共提取4次，合并提取液，在60℃下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將乙醇揮發(fā)干凈（每1g川西獐牙菜和橢圓葉花錨分別相當(dāng)生藥材22.98g和19.69g），待用。

1.2.2小鼠處理 將308只雌雄各半小白鼠，隨機(jī)分組，口服給藥。各樣品藥物分4個(gè)劑量，分別為0、0.075、0.210、0.640g/kg的乙醇提取物。

1.2.3血清和肝組織樣品的制備 動(dòng)物斷頭采血，以3500r/min離心10～20min，取上清液低溫保存，待用；取0.1g肝組織，加1mL生理鹽水勻漿，以3500r/min離心10～20min，取上清液低溫保存，待用。

1.2.4ALT活性測(cè)定 參照改良賴氏法測(cè)定［12］。首先用丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定樣品的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算ALT的活性。

1.2.5AST活性測(cè)定 參照改良賴氏法測(cè)定［12］。首先用丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后測(cè)定樣品的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算AST的活性。

1.3數(shù)據(jù)處理 采用t檢驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1川西獐牙菜對(duì)CC14致小鼠急性肝損傷的作用 與未處理組相比，CC14肝損傷組小鼠血清ALT和AST的活性均明顯升高，說明造模成功；不同劑量的野生與栽培川西獐牙菜的乙醇提取物均可使升高的血清ALT和AST活性顯著降低，只是降低程度有所不同（表1）。

表1　川西獐牙菜對(duì)CCI4致小鼠急性肝損傷的作用（±s）

表1　川西獐牙菜對(duì)CCI4致小鼠急性肝損傷的作用（±s）

注：與CC14處理組對(duì)照比較，*表示存在差異，**表示存在顯著差異，***表示存在極顯著差異

組別劑量鼠數(shù)/只ALT活性/（U·L-1）AST活性/（U·L-1）未處理—14113.86±27.48108.93±38.68 CC14—14676.98±326.52412.64±153.00川西獐牙菜（西寧）高14188.76±54.22***240.01±57.35***川西獐牙菜（西寧）中14206.61±55.67***230.54±34.93***川西獐牙菜（西寧）低14291.14±63.99***233.16±43.89***川西獐牙菜（玉樹）高14176.72±72.28***266.38±82.15***川西獐牙菜（玉樹）中14214.77±65.22***274.59±42.70***川西獐牙菜（玉樹）低14382.84±92.56**309.32±72.47**川西獐牙菜（野生）（西寧）高14150.25±47.29***208.75±42.48***川西獐牙菜（野生）（西寧）中14305.06±108.75***283.25±97.16**川西獐牙菜（野生）（西寧）低14495.84±292.13*346.50±152.70*川西獐牙菜（野生）（玉樹）高14158.64±67.83***296.45±72.89***川西獐牙菜（野生）（玉樹）中14298.46±78.02***314.29±45.67***川西獐牙菜（野生）（玉樹）低14432.18±89.65**389.64±78.65**

2.2橢圓葉花錨對(duì)CC14致小鼠急性肝損傷的作用 與未處理組相比，CC14肝損傷組小鼠血清ALT和AST的活性均明顯升高，說明造模成功；不同劑量的野生與栽培橢圓葉花錨的乙醇提取物均可使升高的血清ALT和AST活性顯著降低，同川西獐牙菜類似，也是降低幅度有所不同（表2）。

表2　橢圓葉花錨對(duì)CCI4致小鼠急性肝損傷的作用（±s）

表2　橢圓葉花錨對(duì)CCI4致小鼠急性肝損傷的作用（±s）

注：與CC14處理組對(duì)照比較，**表示存在顯著差異，***表示存在極顯著差異

組別劑量鼠數(shù)/只ALT活性/（U·L-1）AST活性/（U·L-1）未處理—14113.86±27.48108.93±38.68 CC14—14676.98±326.52412.64±153.00橢圓葉花錨（西寧）高14154.68±61.35***180.37±58.48***橢圓葉花錨（西寧）中14172.70±75.56***169.76±35.09***橢圓葉花錨（西寧）低14192.86±48.84***253.94±54.31***橢圓葉花錨（玉樹）高14147.40±44.23***178.37±44.27***橢圓葉花錨（玉樹）中14160.74±33.25***193.70±39.99***橢圓葉花錨（玉樹）低14164.44±45.00**229.12±61.42**橢圓葉花錨（野生）（西寧）高14151.76±44.26***187.03±52.33***橢圓葉花錨（野生）（西寧）中14198.74±56.12***227.85±62.61***橢圓葉花錨（野生）（西寧）低14206.78±55.67***287.03±51.89***橢圓葉花錨（野生）（玉樹）高14133.87±38.96***189.65±48.31***橢圓葉花錨（野生）（玉樹）中14189.65±43.18***298.82±44.59***橢圓葉花錨（野生）（玉樹）低14175.66±56.13**307.08±59.24**

3　討論

川西獐牙菜和橢圓葉花錨是兩種較典型的高山植物，齊墩果酸、龍膽苦苷、芒果苷、當(dāng)藥黃素和酮類為其重要有效成分，尤其酮類化合物應(yīng)是其含有量較高的有效成分。目前，已從川西獐牙菜中得到8種酮，藏茵陳酮是新近發(fā)現(xiàn)的一種成分。丁莉等［8］和羅桂花等［13］的研究分別表明，玉樹獐牙菜和川西獐牙菜的醇提物均可以明顯降低CC14引起的小鼠血清ALT和AST活性增高，并且具有一定的量效關(guān)系，認(rèn)為其有效成分在一定程度上具有保護(hù)肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的功能，我們的研究結(jié)果與其基本一致，從而進(jìn)一步驗(yàn)證了前人的研究。本研究發(fā)現(xiàn)，CC14處理后，小鼠血清中ALT和AST活性明顯高于空白對(duì)照組的，說明CC14對(duì)小鼠肝組織具有損傷作用。CC14是一種典型的肝臟毒物，經(jīng)肝臟微粒體細(xì)胞色素P-450激活后，發(fā)生均裂產(chǎn)生自由基（CC13·）。這樣，一方面CC13·可攻擊細(xì)胞膜上的磷脂分子，引起脂質(zhì)過氧化，并與膜蛋白結(jié)合，破壞膜的結(jié)構(gòu)和功能；另一方面CC14還可抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的鈣離子泵，使鈣離子升高，從而激活肝細(xì)胞膜上的磷酸化酶，引起脂質(zhì)過氧化，導(dǎo)致肝細(xì)胞膜損傷［14］。當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí)，由于肝細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)氨酶的濃度比血清中的高，胞漿內(nèi)的ALT和AST因濃度差釋放入血，造成高血清ALT和AST，故血清中的ALT和AST的活性是反映肝受損的敏感指標(biāo)，也能反映肝細(xì)胞損傷的程度。CC14可引起化學(xué)性肝損傷，導(dǎo)致肝細(xì)胞變性、壞死、間質(zhì)細(xì)胞浸潤(rùn)，也能引起肝纖維化，其中成纖維細(xì)胞在肝纖維化中起著主要作用［14］。不同劑量和不同地點(diǎn)野生和栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨的醇提物均能明顯降低CC14引起的大鼠血清ALT和AST活性增高，這不僅表明川西獐牙菜和橢圓葉花錨有效成分在一定程度保護(hù)肝細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，減少自由基的攻擊而減輕肝細(xì)胞的損傷，從而對(duì)急性肝損傷具有較好的降酶、保護(hù)肝細(xì)胞和治療作用；而且，還說明栽培和野生川西獐牙菜和橢圓葉花錨對(duì)小鼠急性肝損傷均有保護(hù)作用，只是略有不同，因此本研究結(jié)果初步可以說明栽培川西獐牙菜和橢圓葉花錨可代替野生川西獐牙菜和橢圓葉花錨，從而進(jìn)一步表明采用人工栽培可以解決野生川西獐牙菜和橢圓葉花錨的資源供給問題，滿足生產(chǎn)需要，同時(shí)有利于保護(hù)珍稀野生川西獐牙菜和橢圓葉花錨植物資源，為野生川西獐牙菜和橢圓葉花錨的保護(hù)和合理開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

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R285.5

B

1001-1528（2015）01-0204-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.045

2013-10-10

教育部“春暉計(jì)劃”合作科研項(xiàng)目（Z2010078）；青海省高原作物種質(zhì)資源創(chuàng)新與利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地開放課題資助項(xiàng)目（2013-01）

何衛(wèi)華（1977—），男，學(xué)士，主管藥師，主要從事藥劑學(xué)方面的研究。Te1：18697105279，E-mai1：HeweihuaS10@ sohu.com