于 歡， 寧希鮮， 陳 泣， 熊絲絲， 龔千鋒*

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京　100102；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西　南昌　330004）

江枳殼炮制品揮發(fā)油的GC-MS分析

于 歡1，2， 寧希鮮2， 陳 泣2， 熊絲絲2， 龔千鋒2*

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京100102；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江西南昌330004）

目的 采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）聯(lián)用技術(shù)對江西產(chǎn)枳殼生品、清炒品、麩炒品、蜜麩炒品、蜜糠炒品揮發(fā)油成分進(jìn)行定性定量分析。方法 采用水蒸氣蒸餾法從枳殼中提取揮發(fā)油建立GC-MS分析方法，鑒定不同炮制品揮發(fā)油成分，并用峰面積歸一化法測定相對百分含有量。結(jié)果 從江枳殼炮制品中共鑒定出181個化合物。與生品相比，麩炒枳殼產(chǎn)生新化合物38種、蜜糠枳殼有48種、蜜麩炒枳殼有77種。結(jié)論 炮制輔料對枳殼部分揮發(fā)油成分產(chǎn)生了不同程度的升高和降低，還產(chǎn)生了新的化合物。

江枳殼；炮制品；揮發(fā)油；GC-MS

枳殼來源于蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種的干燥未成熟果實(shí)。枳殼味苦、辛、酸，性微寒，具有理氣寬中、行滯消脹的作用［1］，生品偏于行氣除脹，麩炒后作用較為緩和，偏于理氣健脾［2］，故臨床常用其炮制品。枳殼來源廣泛，江西產(chǎn)枳殼是市場上四大主流商品之一［3］。江西樟幫炮制法和建昌幫炮制法是我國重要的兩大傳統(tǒng)炮制幫派，其分別有用麥麩、蜜糠作為輔料來炮制飲片［4-6］?，F(xiàn)有很多枳殼麩炒和蜜麩炒的相關(guān)研究［7-9］，但枳殼蜜糠炒的相關(guān)研究較少，更沒有將枳殼麩炒、蜜麩炒、蜜糠炒和生枳殼進(jìn)行同時比較研究的報(bào)道，而這對于解釋枳殼炮制機(jī)理和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究具有積極指導(dǎo)意義。本實(shí)驗(yàn)針對江西產(chǎn)枳殼不同炮制方法揮發(fā)油類成分應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析技術(shù)，擬為枳殼炮制機(jī)理和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供科學(xué)依據(jù)。

1　儀器與藥材

1.1儀器 TN408LC型紅外測溫槍（上海儀迷杰光電技術(shù)有限公司），雙檔調(diào)溫炒鍋（廣東省湛江市家用電器工業(yè)公司），智能恒溫電熱套（鞏義市予華儀器責(zé)任有限公司），Agilent7890A GC-5975C MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，19091J-433（30 m× 0.25 mm×0.25μm）彈性石英毛細(xì)管柱。

1.2藥材 枳殼藥材購于江西樟樹天齊堂飲片公司，產(chǎn)地為江西，批號1307021。生枳殼飲片、麩枳殼、蜜麩枳殼、蜜糠枳殼飲片為本實(shí)驗(yàn)室自制。

2　實(shí)驗(yàn)方法與條件

2.1各種枳殼飲片的制備

2.1.1生品 將購買的枳殼藥材進(jìn)行去瓤、潤軟、切片、干燥得生枳殼飲片［9］。

2.1.2清炒品［10］取凈生枳殼飲片，用中火控制炒鍋溫度在240℃左右，隨即投入適量生枳殼，迅速翻動，炒至表面偶有焦斑，取出，放涼，備用。2.1.3 炮制品 取凈生枳殼飲片，照《中國藥典》2010年版一部麩炒法炒至色變深，具體操作是：先將炒鍋加熱，再投入相應(yīng)的輔料到鍋中至煙起，隨即加入適量生枳殼，迅速翻動，炒至表面呈亮黃色時，取出，篩去輔料，即分別得麩枳殼、蜜麩枳殼和蜜糠枳殼飲片。

2.2揮發(fā)油的提取 將枳殼飲片粉碎，用揮發(fā)油提取器按《中國藥典》2010年版一部附錄X D，用水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，用無水硫酸鈉干燥后備用。生品和清炒品所得揮發(fā)油為淡黃色透明油，麩炒、蜜麩炒、蜜糠炒枳殼飲片為深黃色透明油，具有特殊濃郁香氣。

2.3氣相色譜分析條件 進(jìn)樣口溫度260℃，傳輸線溫度250℃，載氣為氦氣，柱體積流量為1.0 mL/min，分流比30∶1；進(jìn)樣量2μL；升溫程序?yàn)橹鶞?0℃，以2℃/min升至150℃，再6℃/min升至186℃，再以60℃/min升至280℃，保持1 min。

2.4質(zhì)譜條件 電離方式為EI，電子轟擊能量是70 eV，離子源溫度是230℃，加速電壓為34.6 V，分辨率是2 500，倍增器電壓是1 388 V，四極桿溫度為150℃，掃描范圍是40～350 amu，掃描次數(shù)為4.45次/s。所得質(zhì)譜圖經(jīng)計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理及NST-11L和WILEY-275標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫檢索鑒定各種化學(xué)成分，并用峰面積歸一化法測定樣品中各組分的相對含有量。記錄總離子流圖，江枳殼生品、清炒品、麩炒品、蜜麩品、蜜糠品揮發(fā)油總離子流圖分別見圖1。

圖1　枳殼揮發(fā)油GC-MS總離子色譜圖Fig.1 GC-MS total ion chrom atogram s of Citrus aurantium L.volatile oil

3　結(jié)果與討論

3.1由于麩、蜜糠、蜜麩的用量較小，無法單獨(dú)提取揮發(fā)油成分進(jìn)行比較，因此本研究以清炒品為參照，對不同炮制方法、不同炮制輔料對枳殼的揮發(fā)油成分影響進(jìn)行了綜合比較。根據(jù)表1枳殼揮發(fā)油測定結(jié)果，分析不同炮制輔料對枳殼化學(xué)成分的影響，可發(fā)現(xiàn)：與枳殼生品相比，除部分揮發(fā)油成分產(chǎn)生了不同程度的升高、降低，還產(chǎn)生了新的化合物，如麩炒枳殼產(chǎn)生新化合物38種、蜜糠枳殼產(chǎn)生新化合物48種、蜜麩炒枳殼產(chǎn)生新化合物77種。變化較大的成分包括枳殼主要揮發(fā)油成分檸檬烯、γ-萜品烯、β-月桂烯、α-松油醇、3，7-二甲基-1，6-辛二烯-3-醇、（-）-斯巴醇等。這些化合物將作為重要結(jié)果，幫助我們進(jìn)一步討論炮制對枳殼質(zhì)量乃至藥理作用的影響，對指導(dǎo)臨床應(yīng)用具有深遠(yuǎn)影響。引入?yún)⒄掌返膶Ρ劝l(fā)現(xiàn)，炮制輔料帶來的轉(zhuǎn)化，不只是單純的引入輔料成分，更可能與加熱作用一起導(dǎo)致原藥材部分成分的分解和轉(zhuǎn)化。需要我們進(jìn)行更有針對性的進(jìn)一步具體研究確認(rèn)。

表1　枳殼飲片揮發(fā)油成分及質(zhì)量分?jǐn)?shù)Tab.1 Citrus aurantium L.volatile oil composition and quality score

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

續(xù)表1

3.2樟幫炮制法和建昌幫炮制法作為我國兩大重要的傳統(tǒng)炮制幫派，他們不僅在炮制方法上各具特色，炮制輔料也各有特點(diǎn)，其中麥麩、谷糠就分別是樟幫、建昌幫炮制法常用固體輔料中的一種。麥麩為禾本科植物小麥麥粒結(jié)構(gòu)中的外種皮和糊粉層，谷糠為稻谷的外殼，有研究表明這兩者本身含少量揮發(fā)油成分，且可以吸油，即在與藥物共同加熱下可以帶走中藥中含有的一些油性成分［11］。蜂蜜是中藥炮制中常用的液體輔料，李成斌等［12］對8種不同蜂蜜揮發(fā)性成分進(jìn)行了比較研究，發(fā)現(xiàn)蜂蜜中含有較多的揮發(fā)性成分，且不同種類蜂蜜中成分含有量相差較大。蜜麩、蜜糠是麥麩或谷糠與一定量蜂蜜和水拌勻之后于炒鍋中用文火炒干而得，因此用麥麩、蜜麩、蜜糠作為輔料來炮制枳殼對其揮發(fā)性成分變化產(chǎn)生了一定的影響。

3.3通過對江西產(chǎn)枳殼不同炮制方法揮發(fā)油類成分的分析，可以為枳殼飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供依據(jù)，再結(jié)合指紋圖譜研究和相關(guān)藥效學(xué)研究，為闡明枳殼飲片的炮制機(jī)理提供更科學(xué)合理的理論依據(jù)，同時對各炮制品之間的比較可以為臨床應(yīng)用枳殼飲片提供參考。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：2010年版一部［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：229-230

［2］ 龔千鋒.中藥炮制學(xué)［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012：162.

［3］ 羅小泉，楊武亮，周至明，等.中藥枳殼藥材的研究概況［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，18（2）：45-47.

［4］ 龔千鋒.樟樹中藥炮制全書［M］.南昌：江西科學(xué)技術(shù)出版社，1990：238.

［5］ 胡志方.旴江醫(yī)學(xué)縱橫［M］.江西：人民衛(wèi)生出版社，2012：160.

［6］ 江西省食品藥品監(jiān)督管理局.江西省中藥飲片炮制規(guī)范［M］.2008年版.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2009：575.

［7］ 曹 君，龔千鋒，王少軍，等.多指標(biāo)正交優(yōu)選枳殼麩炒工藝［J］.中成藥，2005，27（3）：294-296.

［8］ 張金蓮，何 敏，謝一輝，等.正交法優(yōu)選蜜麩炒樟幫枳殼炮制工藝［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（10）：8-10.

［9］ 龔千鋒，鐘凌云，曹 君，等.不同產(chǎn)地枳殼飲片炮制前后揮發(fā)油GC-MS分析［J］.中成藥，2007，29（11）：1639-1644

［10］ 盛菲亞，盧君蓉，彭 偉，等.香附炮制前后揮發(fā)油的GC-MS指紋圖譜對比研究［J］.中草藥，2013，44（23）：3321-3327

［11］ 劉艷菊，曾 敏，陳雯雯，等.氣-質(zhì)聯(lián)用法分析蒼術(shù)、麩炒蒼術(shù)及其輔料麥麩的揮發(fā)性成分［J］.中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2012，32（11）：847-449.

［12］ 李成斌，林 瑜，鄧國賓，等.八種蜂蜜揮發(fā)性成分分析［J］.精細(xì)化工，2006，23（11）：1082-1088.

Analysis of volatile oil in processed Aurantii Fructus from Jiangxi Province by GC-MS

YU Huan1，2， NING Xi-xian2， CHEN Qi2， XIONG Si-si2， GONG Qian-feng2*
（1.Beijing Uniυersity of TCM，Beijing 100102，China；2.Jiangxi Uniυersity of TCM，Nanchang 330004，China）

AIM To analyze the chemical components of the volatile oil in raw Jiangxi Aurantii Fructus and processed with，stir-frying with bran，stir-frying with bran-and-honey pieces and stir-frying with chaff-and-honey pieces by GC-MS.METHODS The volatile oilwere obtained from PPFA by steam distillation.The amounts of the components from the volatile oilwere determined by area normalization method.The separated componentswere identified by GC-MS.RESULTS One hundred and eighty-one componentswere separated and identified from the processed Jiangxi Aurantii Fructus.Compared with raw product，new components produced in the processing，thirty-eight for stir-frying with bran，forty-eight for stir-frying with chaff-and-honey，and seventy-seven for stir-frying with bran-and-honey.CONCLUSION All of the used processed adjuvantmaterialsmake some contents of Aurantii Fructus increase or decrease，and produce new chemical constituents.

Jiangxi Aurantii Fructus；processed；volatile oil；GC-MS

R284.1

A

1001-1528（2015）03-0592-07

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.03.029

2014-04-17

國家中醫(yī)藥行業(yè)專項(xiàng)“中藥飲片調(diào)劑規(guī)范化研究”（201007011）

于 歡（1986—），女，博士生。E-mail：yuhuanhebei@163.com

龔千鋒（1952—），男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥炮制研究。E-mail：gongqf2002@163.com