陳素峰，周永列，章燕青，夏 駿，陳永健，單志明，胡慶豐

( 1. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 310053； 2. 浙江省人民醫(yī)院，浙江 杭州310014；3. 溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)院，浙江 溫州 325035；4. 浙江省臨床檢驗(yàn)中心，浙江 杭州 310014)

老年心腦血管病患者M(jìn)THFR基因多態(tài)性與血清葉酸、HCY水平的關(guān)系

陳素峰1,2，周永列2@，章燕青3，夏 駿2，陳永健2，單志明4，胡慶豐2

( 1. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 310053； 2. 浙江省人民醫(yī)院，浙江 杭州310014；3. 溫州醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)院，浙江 溫州 325035；4. 浙江省臨床檢驗(yàn)中心，浙江 杭州 310014)

目的探討老年心腦血管病患者亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態(tài)性與血清同型半胱氨酸(HCY)、葉酸的關(guān)系。方法分析286例患者的MTHFRC667T基因多態(tài)性，葉酸、維生素B12、HCY水平和大血小板比例。結(jié)果老年心腦血管病患者中MTHFR667基因野生型(C/C型)、雜合突變型(C/T型)、純合突變型(T/T型)頻率分別為28.7%，41.2%，30.1%，且男女間無(wú)差異；血清HCY與葉酸、維生素B12呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，T/T型、C/T型的葉酸明顯低于C/C型 (P<0.05)，而比較3型的HCY差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；T/T型的MCV、大血小板比例、FPG、TG、TC、LDL-C明顯高于C/T型與C/C型(P<0.05)。結(jié)論老年心腦血管患者的MTHFR基因多態(tài)性與血清HCY無(wú)關(guān)，但與葉酸、維生素B12、血糖血脂和大血小板比例有關(guān)。

心腦血管??；MTHFR基因多態(tài)性；葉酸；同型半胱氨酸

Abstract: [Objective]To investigate the relationship between serum folate, homocysteine(HCY) and methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR) genepolym-orphism in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases. [Method]Examine MTHFR gene polymorphism, folate, vitaminB12, HCY and proportion of large platelet. [Result]The frequency of C/C type, C/T type and T/ T type was 28.7%, 41.2% and 30.1%; Homocysteine had negative correlations with vitamin B12 and folate(P<0.05), and folate was lower in C/T and T/T type(P<0.05), while homocysteine had no differences in three types. MCV, large platelet ratio, FPG, TC, TG and LDL-C in T/T type were higher than others(P<0.05). [Conclusion]MTHFR gene polymorphism in elderly patients with cardiovascular and cerebrovascular diseases showed no association with plasma homocysteine, but it was correlated with folate, vitamin B12, blood glucose, blood lipid and the proportion of large platelet.

Keywords: cardiovascular and cerebrovascular diseases; MTHFR gene polymorph- hism; folate; homocysteine

HCY升高和葉酸缺乏已被確定為心血管病的危險(xiǎn)因素。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是體內(nèi)葉酸代謝和同型半胱氨酸(HCY)甲基化的關(guān)鍵酶，MTHFR基因突變能提高HCY水平，也是心血管疾病的危險(xiǎn)因素[1]。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于MTHFRC677T基因多態(tài)性與老年心腦血管病患者的報(bào)道較少，本文將探討老年心腦血管患者M(jìn)THFR基因多態(tài)性與血清葉酸、HCY的關(guān)系。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象

選取2013年本院老年心腦血管病患者286例，年齡為(85.3±3.4)歲，男性167例，女性119例。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.2.1 MTHFR基因多態(tài)性檢測(cè)(基因芯片法) (1)基因組DNA提取?？崭轨o脈血2ml于EDTA抗凝管中，用DNA提取純化試劑盒提取基因組DNA；(2)PCR擴(kuò)增。向擴(kuò)增液中加入Taq酶、基因組DNA，反應(yīng)總體積為25μl，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；(3)雜交、顯色。用BaiOMTHFR基因型檢測(cè)芯片試劑盒進(jìn)行檢測(cè)；(4)檢測(cè)。圖像經(jīng)Array Doctor軟件分析結(jié)果。以上所用基因芯片、試劑、儀器設(shè)備均由上海百傲科技有限公司提供。

1.2.2 血小板參數(shù)測(cè)定 抽空腹靜脈血2ml于EDTA抗凝管中，全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀Sysmex XE-2100進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 葉酸、維生素B12、HCY及生化指標(biāo)測(cè)定 抽空腹靜脈血3ml，分離血清后，血糖、血脂、HCY在OLYPUS A5400生化分析儀上進(jìn)行檢測(cè)，HCY采用酶比色法測(cè)定，葉酸和維生素B12用雅培i2000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)分析用SPSS15.0軟件包完成。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料組間比較采用方差分析，直線相關(guān)分析比較相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTHFR各基因型及等位基因頻率分布情況

MTHFRC667T基因 C/C型占28.7%，C/T型占41.2%，T/T型占30.1%。等位基因C和T的頻率為49.3%，50.7%，且各基因型和等位基因頻率在男女間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表1。

表1 MTHFR各基因型頻率及等位基因頻率分布[例(%)]

2.2 不同MTHFR基因型中血清葉酸、維生素B12和HCY結(jié)果的比較

由表2可見(jiàn)，C/T型、T/T型的葉酸均明顯低于C/C型(P<0.05)；T/T型的維生素B12顯著低于C/T型(P<0.05)；而三型的HCY比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但血清HCY與葉酸、維生素B12均具有呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 不同MTHFR基因型中葉酸、維生素B12、HCY比較

注：a: 與C/C比較,，P< 0.05；b: 與C /T 比較，P< 0.05

表3 血漿HCY與葉酸、維生素B12的相關(guān)性比較

2.3 血小板參數(shù)在不同MTHFR基因型中的變化

T/T型的血小板數(shù)量較C/C型、C/T型降低(P<0.05)，T/T型的MPV、大血小板比例與C/C型、C/T型相比則明顯增加(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 不同MTHFR基因型的血小板相關(guān)指標(biāo)結(jié)果的比較

注：a: 與C/C比較，P< 0. 05；b: 與C /T 比較，P< 0. 05

2.4 不同MTHFR基因型中血脂、血糖結(jié)果的比較

C/T型、T/T型的FPG，TG，TC，LDL-C較CC型有上升的趨勢(shì)，以TT型增加最為明顯(P<0.05)。見(jiàn)表5。

表5 不同MTHFR基因型的血糖血脂結(jié)果的比較

注：a: 與C/C比較，P< 0. 05；b: 與C /T 比較，P< 0. 05

4 討論

心腦血管病是我國(guó)死亡率最高的疾病，一般認(rèn)為心腦血管疾病患者高HCY的形成除與葉酸、維生素B12缺乏相關(guān)，還與MTHFR基因C677T位點(diǎn)丙氨酸(C)突變?yōu)槔i氨酸(T)導(dǎo)致酶活性改變有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，MTHFR677基因C/T型和T/T型在健康老年中為46.0%，20.6%[2]，健康青年中為34.68%，20.68 %[3]。我們的研究結(jié)果中，老年心腦血管患者的MTHFR677基因C/T型占41.2%，T/T型占30.1%，較文獻(xiàn)報(bào)道的健康人群略高。中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管分會(huì)主委霍勇教授在2013年第七屆錢(qián)江國(guó)際心血管病會(huì)議上宣布，納入2萬(wàn)余人的中國(guó)人群中45% HCY>10μmol/L，MTHFR677 T/T基因型為25%，遠(yuǎn)高于西方人群，這種基因型表現(xiàn)為高HCY、低葉酸，腦卒中的發(fā)生率更高。提示MTHFRC677T基因多態(tài)性與老年心腦血管病發(fā)病有一定的關(guān)系，純合突變型的患者易發(fā)生心腦血管疾病。

目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于MTHFRC677T基因多態(tài)性與高HCY間是否存在相關(guān)性存在分歧[4]。我們發(fā)現(xiàn)，老年心腦血管病患者的血漿HCY水平均高于本實(shí)驗(yàn)室一般人群的參考范圍(10.00±5.10)，印證了HCY升高是心腦血管病發(fā)病的危險(xiǎn)因素的觀點(diǎn)。但我們的結(jié)果顯示，老年心腦血管患者的HCY水平在3種基因型間沒(méi)有變化，這與張廣森[5]等的研究結(jié)果有所不同，血漿HCY的水平還可能受遺傳及環(huán)境等多種因素的多重影響。對(duì)不同MTHFR基因型的血清葉酸、維生素B12與HCY關(guān)系研究中，我們發(fā)現(xiàn)T/T型、C/T型的葉酸明顯低于C/C型，且HCY與葉酸、維生素B12負(fù)相關(guān)，以上研究結(jié)果提示，老年心腦血管病患者血漿HCY水平明顯升高，且與MTHFRC667T基因多態(tài)性沒(méi)有顯著性關(guān)聯(lián)，但MTHFRC667T基因突變時(shí)葉酸水平明顯下降，提示C/T型和T/T型的患者更應(yīng)注重補(bǔ)充葉酸。

大血小板是由巨核細(xì)胞剛生成的血小板，聚集和粘附功能較強(qiáng)，其比例的增加會(huì)提高血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。國(guó)內(nèi)外研究表明，血栓和中風(fēng)患者的MTHFRC667T基因純合突變率增加[6]，本研究發(fā)現(xiàn)MPV、大血小板比例在MTHFR667基因T/T型中明顯高于C/C型和C/T型，提示MTHFRC667T基因純合突變能增加老年心腦血管病患者血栓形成和誘導(dǎo)腦卒中的風(fēng)險(xiǎn)，MTHFR C667T基因純合突變與大血小板比例增加的關(guān)系尚不清楚，二者是獨(dú)立因素的疊加還是因果關(guān)系尚需要進(jìn)一步的研究。

高血糖和高血脂是心腦血管疾病的高危因素。本研究結(jié)果顯示，MTHFRC667T基因T/T型的FPG，TG，LDL-C明顯高于C/C和C/T組，說(shuō)明MTHFRC667T基因純合突變患者患心腦血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)更高。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)也報(bào)導(dǎo)MTHFRC667T基因純合突變與糖尿病、高脂血癥和冠狀動(dòng)脈硬化癥的發(fā)生相關(guān)[7]。然而MTHFRC667T基因純合突變與高血糖、高血脂因果關(guān)系尚需研究。

綜上所述，老年心腦血管患者的血清HCY水平與MTHFRC667T基因多態(tài)性沒(méi)有關(guān)聯(lián)，但MTHFRC667T基因純合突變和雜合突變型的葉酸水平明顯低于野生型，更應(yīng)注重補(bǔ)充葉酸。MTHFRC667T基因純合突變血糖、血脂和大血小板比例明顯高于雜合突變型和野生型，因此，更應(yīng)注重血糖和血指的控制以及抗血小板的治療。

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Relationshipbetweenserumfolate,homocysteineandmethylenetetrahydrofolatereductasegenepolymorphisminelderlypatientswithcardiovascularandcerebrovasculardisease

CHENSufeng1, 2,ZHOUYonglie2@,ZHANGYanqing3,XIAJun2,CHENYongjian,SHANZhiming4,HUQingfeng2

(1. School of Medical Technology, Zhejiang Chinese Medical University, Hangzhou 310053,China; 2. Clinical Laboratory Center, Zhejiang Provincial People’s Hospital, Hangzhou 310014,China; 3. School of Laboratory Medicine and Life Science, Wenzhou Medical University, Zhejiang 325033,China; 4. Zhejiang Center for Clinical Laboratories, Hangzhou 310014,China)

R54

B

1672-0024(2015)01-0043-04

陳素峰(1989-)，女，浙江湖州人，碩士研究生，主管檢驗(yàn)師。研究方向：生物化學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科學(xué)研究基金項(xiàng)目(編號(hào)：2012KYB009)

@

周永列 lab_zyl@126.com