鹽脅迫對(duì)鹽生杜氏藻生長(zhǎng)及葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊懀?/h1>
2015-10-16 03:43:28王帥，梁英
王 帥，梁 英
（1.中國(guó)海洋大學(xué)海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島266003；2.國(guó)家海洋局第一海洋研究所海洋生態(tài)研究中心，山東 青島266061；3.中國(guó)海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院，山東 青島266003）
鹽度是影響海洋微藻生長(zhǎng)的重要環(huán)境因子，鹽度的高低必然會(huì)促進(jìn)或抑制海洋微藻的生長(zhǎng)，直接或間接影響其光合作用和呼吸作用。大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明［1－4］，鹽度會(huì)通過(guò)多條途徑來(lái)影響植物光合作用，例如：離子脅迫和滲透脅迫，高鹽條件下還會(huì)造成水分平衡的紊亂、影響光合電子傳遞效率和CO2同化作用。傳統(tǒng)方法確定微藻生存鹽度和最適生長(zhǎng)鹽度范圍是通過(guò)比較微藻在不同鹽度條件下的細(xì)胞密度，耗時(shí)較多［5］。為了解決這一問(wèn)題，國(guó)外某些學(xué)者利用植物體內(nèi)葉綠素作為天然探針，在黑暗環(huán)境中適應(yīng)數(shù)分鐘，然后置于適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)光下，通過(guò)檢測(cè)植物發(fā)出的隨時(shí)間變化的微弱熒光信號(hào)（Kautsky效應(yīng)）來(lái)測(cè)定微藻對(duì)鹽度的適應(yīng)范圍［6］。
利用葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)可對(duì)植物進(jìn)行活體測(cè)定和診斷，這一方法具有快速、準(zhǔn)確和需要樣品量少等優(yōu)點(diǎn)，目前，采用葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)研究不同鹽度對(duì)高等植物光合作用影響的報(bào)道相對(duì)較多，但由于實(shí)驗(yàn)材料、生長(zhǎng)階段和處理時(shí)間等因素的不同，研究結(jié)果不太一致。Singh等［7］研究結(jié)果表明鹽脅迫能促進(jìn)PSII的功能；而Allakhverdiev等［8］研究發(fā)現(xiàn)鹽脅迫會(huì)抑制PSII的功能；Qia等［9］報(bào)道鹽脅迫對(duì)PSII的功能沒(méi)有造成明顯的影響。迄今為止，有關(guān)鹽脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒馓匦杂绊懸延休^多的報(bào)道［10－14］，但目前還未見(jiàn)鹽脅迫對(duì)高耐鹽藻株—鹽生杜氏藻葉綠素?zé)晒馓匦杂绊懙膱?bào)道。
鹽生杜氏藻是綠藻門(mén)中唯一一種無(wú)細(xì)胞壁的單細(xì)胞海洋微藻，是高鹽環(huán)境中常見(jiàn)藻株，具有很強(qiáng)的耐鹽性，因其富含胡蘿卜素和甘油而逐漸受到重視，近年來(lái)已被國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用于環(huán)境脅迫的研究［15］。本文采用Water－PAM葉綠素?zé)晒鈨x研究不同鹽濃度對(duì)1株具有很好的耐受高鹽脅迫特性的鹽生杜氏藻生長(zhǎng)及葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊?，以期為篩選耐鹽微藻藻株提供重要的方法，并為揭示鹽生杜氏藻光合作用抵抗鹽脅迫時(shí)的響應(yīng)機(jī)制提供參考依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 藻種
實(shí)驗(yàn)所用鹽生杜氏藻（Dunaliella salina）（代號(hào)MACC／C43）藻種來(lái)源于中國(guó)海洋大學(xué)藻種庫(kù)。
1.2 微藻培養(yǎng)及鹽脅迫處理
培養(yǎng)采用f／2培養(yǎng)基［16］，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為（20±1）℃，光照強(qiáng)度為100μmol·m－2·s－1，采用連續(xù)光照進(jìn)行培養(yǎng)。
在250mL的錐形瓶中進(jìn)行鹽脅迫實(shí)驗(yàn)，將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的鹽生杜氏藻離心洗滌后，以2.08×104個(gè)／mL的接種量分別培養(yǎng)在不同鹽度的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液鹽度設(shè)定為5，10，20，30，40，50，60，70，80，90，100，110，120，130等梯度，每個(gè)鹽度3個(gè)平行組。培養(yǎng)過(guò)程中隨機(jī)調(diào)換錐形瓶并搖動(dòng)3次／d。在接種12、24和48h后取樣，測(cè)定鹽生杜氏藻的葉綠素?zé)晒鈪?shù)、細(xì)胞密度和葉綠素含量。
1.3 葉綠素?zé)晒鈪?shù)、葉綠素含量的測(cè)定及數(shù)據(jù)處理
按照王帥等［13］的方法，采用 Water－PAM 葉綠素?zé)晒鈨x進(jìn)行熒光參數(shù)和葉綠素含量的測(cè)定。
采用Origin Pro8.0軟件進(jìn)行作圖。采用SPSS11.0軟件進(jìn)行多因子方差分析（鹽度、脅迫時(shí)間以及二者的交互作用（鹽度×?xí)r間））和相關(guān)性分析。
2 結(jié)果
2.1 鹽度對(duì)鹽生杜氏藻葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響
圖1和表1給出了鹽度和脅迫時(shí)間對(duì)鹽生杜氏藻葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響。表1（a）的多因子方差分析結(jié)果表明，在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，鹽度和脅迫時(shí)間對(duì)鹽生杜氏藻的熒光參數(shù) Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo、rETR、qP 和NPQ均有顯著影響（P＜0.001），其中鹽度對(duì)參數(shù)Fv／Fm、Fv／Fo和 qP 的 影 響 更 顯 著，而 脅 迫 時(shí) 間 對(duì)rETR和NPQ的影響更顯著。表1（b）給出的多重比較結(jié)果表明，F(xiàn)v／Fm、ΦPSII和Fv／Fo值在鹽度100時(shí)最高，但在鹽度20～110范圍內(nèi)無(wú)顯著性差異；rETR值在鹽度為60時(shí)達(dá)到最高；qP值在鹽度為5時(shí)最高；NPQ值則在鹽度為90時(shí)最高。脅迫時(shí)間對(duì)該藻的上述6個(gè)熒光參數(shù)值均有顯著影響，各參數(shù)值均隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高。
鹽生杜氏藻的熒光參數(shù)與鹽度之間的相關(guān)性見(jiàn)表2，鹽度在5～70之間的范圍內(nèi)，脅迫12和48h后，鹽生杜氏藻的Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR與鹽度呈極顯著的正相關(guān)關(guān)系，脅迫48h后qP與鹽度呈顯著的正相關(guān)關(guān)系。NPQ在脅迫12h時(shí)與鹽度無(wú)明顯的相關(guān)性，在脅迫24和48h時(shí)，該參數(shù)與鹽度呈極顯著正相關(guān)；鹽度在70～130范圍內(nèi)時(shí)，熒光參數(shù)Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo、rETR 以及qP均與鹽度呈極顯著的負(fù)相關(guān)性；脅迫12h后，NPQ與鹽度呈顯著的負(fù)相關(guān)；脅迫24h后，NPQ與鹽度呈極顯著的負(fù)相關(guān)；脅迫48h后與鹽度無(wú)明顯的相關(guān)性。
圖1 鹽度對(duì)鹽生杜氏藻熒光參數(shù)、細(xì)胞密度和葉綠素含量的影響Fig.1 Effects of salinity on the fluorescence parameters，cell density and chlorophyll content of D.salina
?
表2 鹽生杜氏藻熒光參數(shù)、細(xì)胞密度及葉綠素含量與鹽度的相關(guān)系數(shù)Table 2 The interrelated coefficients of fluorescence parameters，cell density and chlorophyll content with salinity of D.salina
2.2 鹽度對(duì)鹽生杜氏藻細(xì)胞密度和葉綠素含量的影響
圖1和表1給出了鹽度和脅迫時(shí)間對(duì)鹽生杜氏藻細(xì)胞密度和葉綠素含量的影響。表1（a）的多因子方差分析表明，在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，鹽度、脅迫時(shí)間及其交互作用對(duì)該藻的葉綠素含量和細(xì)胞密度均產(chǎn)生了顯著影響（P＜0.001），脅迫時(shí)間對(duì)上述2個(gè)參數(shù)的影響最為顯著。表1（b）給出的多重比較結(jié)果表明，鹽度在5～100之間的范圍內(nèi)，48h后隨著鹽度的升高，細(xì)胞密度和葉綠素含量的值明顯增加，且均在鹽度100時(shí)達(dá)到最大值；鹽度在100～130之間時(shí)，上述2個(gè)參數(shù)的值隨鹽度升高而逐漸降低。鹽生杜氏藻的細(xì)胞密度和葉綠素含量數(shù)值均隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加。
表3給出的鹽生杜氏藻的熒光參數(shù)與細(xì)胞密度之間的相關(guān)關(guān)系，由表3可見(jiàn)，鹽生杜氏藻的Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR與細(xì)胞密度呈極顯著的正相關(guān)；脅迫12和24h后，qP和NPQ與細(xì)胞密度的相關(guān)性較差，qP和NPQ在脅迫48h后與細(xì)胞密度呈顯著的正相關(guān)性。
表3 鹽生杜氏藻熒光參數(shù)及葉綠素含量與細(xì)胞密度的相關(guān)系數(shù)Table 3 The interrelated coefficient of fluorescence parameters and chlorophyll content with cell density of D.salina
3 討論
作為一種研究植物光合功能的新型植物活體檢測(cè)和診斷技術(shù)，葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)在測(cè)定植物光合作用的過(guò)程中，利用植物中葉綠素作為天然探針，在光能的吸收、傳遞、分配和耗散等方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，并且其快速、靈敏、不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷。國(guó)際上對(duì)葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)的研究已成為熱點(diǎn)，并針對(duì)耐寒性、耐熱性、耐強(qiáng)光性和耐鹽性等多種逆境生理?xiàng)l件進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)在研究植物逆境生理方面有許多優(yōu)勢(shì)［17－19］，但有關(guān)鹽脅迫對(duì)微藻光合作用影響的研究不多［12－13，20－22］。Fv／Fm比值是 PSII最大光化學(xué)量子產(chǎn)量，可以反映PSII的活性大小。正常生理狀態(tài)下參數(shù)Fv／Fm很穩(wěn)定，浮游植物Fv／Fm值保持在0.65左右［23］，該參數(shù)不具有種間特異性，但植物受到脅迫后，F(xiàn)v／Fm值會(huì)明顯降低。有研究結(jié)果表明，微藻在鹽脅迫條件下，其PSII的活性會(huì)降低，反映在Fv／Fm會(huì)隨鹽度的增加而下降。畢永紅等［20］研究發(fā)現(xiàn)，隨培養(yǎng)液中NaCl濃度的增加，發(fā)狀念珠藻（Nostoc flagelliforme）Fv／Fm比值逐漸降低，歐陽(yáng)葉新等［21］對(duì)魚(yú)腥藻（Anabaenasp.）的研究也得到了相似的結(jié)果。而陳蘭周等［22］的實(shí)驗(yàn)表明，爪哇偽枝藻（Scytonema javanicum）對(duì)鹽脅迫則很敏感，在0.1mol／L NaCl時(shí)Fv／Fm比值已下降至0.4左右。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽生杜氏藻有很強(qiáng)的耐鹽性，適宜鹽度范圍為20～110，在此鹽度范圍之間，F(xiàn)v／Fm比值無(wú)明顯降低，當(dāng)?shù)望}脅迫（鹽度＜20）和高鹽脅迫（鹽度＞110）條件下，F(xiàn)v／Fm比值才開(kāi)始逐漸降低。鹽脅迫條件下，鹽生杜氏藻的PSII熒光指標(biāo)Fv／Fo、rETR 與Fv／Fm具有相同 的 變 化 趨勢(shì)，可見(jiàn)鹽生杜氏藻自身光系統(tǒng)的轉(zhuǎn)換能力較強(qiáng)。ΦPSII的變化，反映的是藻細(xì)胞同化力（NADPH，ATP）的形成，即碳的固定與同化作用，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，在鹽度20～110之間，不影響鹽生杜氏藻對(duì)CO2的固定和同化。qP（光化學(xué)淬滅）的變化表明，吸收的光能用于電子傳遞，當(dāng)qP降低時(shí)表示進(jìn)行光合作用的電子正在減少，以熱的形式耗散的光能會(huì)逐漸增加，這與NPQ（非光化學(xué)淬滅）的變化是吻合的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫對(duì)熒光指標(biāo)（qP和NPQ）都造成了一定程度的抑制作用。
有關(guān)微藻耐鹽機(jī)制的研究，主要集中在光合色素和蛋白含量等方面。Rafiqul［24］等研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)藻（Spirulina fusiformis）葉綠素a含量隨著NaCl濃度的增加而降低。藍(lán)藻（S.fusiformis）在較低NaCl濃度條件下，類胡蘿卜素含量降低；而在較高NaCl濃度條件下，其類胡蘿卜素含量增加。耐鹽藍(lán)藻（Anabaena doliolum）的葉綠素含量則隨著NaCl濃度的增加而增加［7］。鹽脅迫下，藻藍(lán)蛋白（PC）含量的變化結(jié)果較為一致，集胞藻（Synechocystis sp.）PCC6803在鹽處理下，PC含量明顯降低［25］；藍(lán)藻（S.fusiformis）的 PC含量隨鹽濃度的增加而降低［24］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在鹽度為20～110條件下，鹽脅迫不僅不會(huì)對(duì)耐鹽的鹽生杜氏藻造成損傷，反而會(huì)促進(jìn)其生長(zhǎng)，48h后隨著鹽度的升高，細(xì)胞密度和葉綠素含量逐漸增加，鹽度為100時(shí)，二者均達(dá)到最大值。但超過(guò)一定鹽度范圍（＞110）后，高鹽脅迫對(duì)鹽生杜氏藻的PSII會(huì)產(chǎn)生傷害，主要表現(xiàn)在加速了藻體中葉綠素含量的降低（見(jiàn)圖1），可能高鹽（＞110）會(huì)影響類囊體膜的穩(wěn)定性，加速葉綠素的分解，從而降低PSII反應(yīng)中心的光合速率。目前對(duì)于微藻耐鹽機(jī)制的研究還不是十分清楚，僅從某一方面研究其耐鹽性還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，這有待于進(jìn)行深入研究。
鹽生杜氏藻屬于水產(chǎn)動(dòng)物的優(yōu)質(zhì)餌料之一，但可能由于微藻藻株、培養(yǎng)條件等因素的不同，目前對(duì)鹽生杜氏藻適鹽范圍的報(bào)道并不一致。吳春［26］報(bào)道鹽生杜氏藻（D.salina）的最適鹽度范圍為20～30。而呂愛(ài)玲等［27］對(duì)中國(guó)渤海灣灘涂的綠色杜氏藻進(jìn)行鹽度馴化實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為綠色杜氏藻可在9～320的鹽度范圍生長(zhǎng)，能耐受接近飽和的鹽度條件。本文的研究結(jié)果表明，鹽生杜氏藻對(duì)鹽度的適應(yīng)范圍很廣，在鹽度20～110時(shí)，F(xiàn)v／Fm值無(wú)顯著性差異，這表明鹽度20～110均適于鹽生杜氏藻的生長(zhǎng)，與之前利用葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)對(duì)塔胞藻［13］的研究結(jié)果相比，本研究篩選得到的這株鹽生杜氏藻（D.salina）具有更好的耐鹽性，在高鹽條件下更有利于對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)。即使鹽度在5～20之間的低鹽脅迫條件下，F(xiàn)v／Fm、ΦPSII、Fv／Fo、rETR、細(xì)胞密度和葉綠素含量等一系列指標(biāo)均在逐漸增加（見(jiàn)圖1），這也是該藻株對(duì)鹽度較強(qiáng)適應(yīng)性的一種表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鹽生杜氏藻在鹽度5～110之間均能生長(zhǎng)，最適鹽度為100。本文的結(jié)果表明，鹽生杜氏藻PSII的熒光指標(biāo)（Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR）與細(xì)胞密度均呈極顯著的正相關(guān)性，而且細(xì)胞密度也與葉綠素含量呈極顯著的正相關(guān)性，因此，在一定范圍內(nèi)，可通過(guò)該藻PSII熒光指標(biāo)的變化反映其細(xì)胞密度及葉綠素含量對(duì)鹽脅迫的耐受性。與計(jì)數(shù)細(xì)胞密度的傳統(tǒng)方法相比，葉綠素?zé)晒夥治龇椒ǜ涌焖?、靈敏和準(zhǔn)確，并且不會(huì)對(duì)藻細(xì)胞造成損傷［28－29］。
現(xiàn)已證明，PSII的熒光指標(biāo)更能反映植物的內(nèi)在性特點(diǎn)，因此，葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)已成為篩選高等植物（擬南芥、枸杞，特別是小麥等）耐鹽品種的一種理想手段［1，4，14］。本文的結(jié)果表明，篩選得到的鹽生杜氏藻其耐鹽性很好，該藻 PSII的熒光指標(biāo)（Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR）與細(xì)胞密度具有良好的正相關(guān)關(guān)系，可用于該藻鹽脅迫耐受性的評(píng)價(jià)依據(jù)，但目前對(duì)這方面研究的微藻品種還較少，PSII的熒光指標(biāo)作為篩選耐鹽微藻的參考指標(biāo)是否可行，有待針對(duì)不同的微藻品種和品系進(jìn)行全面的實(shí)驗(yàn)研究，以確定該方法的適應(yīng)范圍及可靠性。
［1］ 趙昕，吳雨霞，趙敏桂，等.NaCl脅迫對(duì)鹽芥和擬南芥光合作用的影響 ［J］.植物學(xué)通報(bào)，2007，24（2）：154－160.
［2］ 周麗，孟祥紅，劉成圣.滲透脅迫對(duì)杜氏鹽藻胞內(nèi)甘油含量及相關(guān)酶活性影響 ［J］.植物學(xué)通報(bào)，2006，23（2）：145－151.
［3］ Rosarlo V E，Bronwyn J B，Liliana G R，et al.Salt stress in Thellungiella halopila activates Na＋transport mechanisms required for salinity tolerance［J］.Plant Physiol，2005，139：1507－1517.
［4］ 惠紅霞，許興，李前榮.NaCl脅迫對(duì)枸杞葉片甜菜堿、葉綠素?zé)晒饧叭~綠素含量的影響 ［J］.干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究，2004，22（3）：109－114.
［5］ 馮力霞.環(huán)境脅迫對(duì)4株微藻葉綠素?zé)晒馓匦缘难芯?［D］.青島：中國(guó)海洋大學(xué)，2006：1－85.
［6］ 馮永軍，史寶勝，董桂敏，等.葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)在植物抗逆性及水果保鮮中的應(yīng)用 ［J］.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26：89－92.
［7］ Singh D P，Kshatriya K.NaCl－induced oxidative damage in the cyanobacterium Anabaena doliolum ［J］.Curr Microbiol，2002，44（6）：411－417.
［8］ Allakhverdiev S I，Klimov V V，Hagemenn M.Cellular energization protects the photosynthetic machinery against salt－induced inactivation in Synechococcus ［J］.Biochim Biophys Acta，2005，1708：201－208.
［9］ Qia N W，Lu Q T，Lu C M.Photosynthesis，photosystem II efficiency and the xanthophyll cycle in the salt－adapted halophyte Atri－plex centralasiatica［J］.New Phytol，2003，159：479－486.
［10］ Lu C，Qiu N，Lu Q，et al.Does salt stress lead to increased susceptibility of photosystem Ⅱ to photoinhibition and changes in photosynthetic pigment composition in halophyte Suaeda salsa grown outdoors？［J］.Plant Sci，2002，163：1063－1068.
［11］ Netondo G W，Onyango J C，Beck E.Sorghum and salinity：Ⅱ.Gas exchange and chlorophyll fluorescence of Sorghum under salt stress［J］.Crop Sci，2004，44（3）：806－811.
［12］ Lu C M，Vonshak A.Effects of salinity stress on photosystem II function in cyanobacterial Spirulina platensis cells［J］.Physiol Plant，2002，114：405－413.
［13］ 梁 英，馮力霞，田傳遠(yuǎn)，等.鹽脅迫對(duì)塔胞藻生長(zhǎng)及葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)的影響 ［J］.中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，36（5）：726－732.
［14］ 黃有總，張國(guó)平.葉綠素?zé)晒鉁y(cè)定技術(shù)在麥類作物耐鹽性鑒定中的應(yīng)用 ［J］.麥類作物學(xué)報(bào)，2004，24（3）：114－116.
［15］ 耿德貴，韓燕，王義琴，等.杜氏鹽藻的耐鹽機(jī)制研究進(jìn)展和基因工程研究的展望 ［J］.植物學(xué)通報(bào)，2002，19（3）：290－295.
［16］ Guillard R R，Ryther J H.Studies of marine planktonic diatoms.I.Cyclotella nana （Hustedt）and Detonula confervacea （Cleve）Gran［J］.Can J Microbiol，1962，8：229－239.
［17］ Annick M，Elisabeth P，Gerard T.Osmotic adjustment，gas exchanges and chlorophyll fluorescence of a bexaploid triticale and its parental species under salt stress ［J］.Plant Physiol，2004，1619（1）：25－33.
［18］ Bhargava S，Paranjpe S.Genotypic variation in the photosynthetic competence of Sorghum bicolor seedlings subjected to polyethylene glycol－mediated drought stress［J］.Plant Physiol，2004，161（1）：125－129.
［19］ Lavaud J，Rousseau B，Gorkom H J van，et al.Influence of the diadinoxanthin pool size on photoprotection in the marine planktonic diatom Phaeodactylum tricornutum ［J］.Plant Physiol，2002，129（3）：1398－1406.
［20］ 畢永紅，鄧中洋，胡征宇，等.發(fā)狀念珠藻對(duì)鹽脅迫的響應(yīng) ［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2005，29（2）：125－129.
［21］ 歐陽(yáng)葉新，施定基，黃開(kāi)耀，等.魚(yú)腥藻7120響應(yīng)NaCl脅迫的光合特性 ［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2003，27（1）：74－77.
［22］ 陳蘭周，劉永定，李敦海.鹽脅迫對(duì)爪哇偽枝藻生理生化特性的影響 ［J］.中國(guó)沙漠，2003，23（3）：285－288.
［23］ SeppalaJ.fluorescence properties of Baltic sea phytoplankton［D］.Helsinki：University of Helsinki，2009：1－43.
［24］ Rafiqul I M，Hassan A，Sulebele G，et al.Salt stress culture of blue－green algae Spirulina fusiformis ［J］.Pakistan Biological Sci，2003，6（7）：648－650.
［25］ Marin K，Kanesaki Y，Los D A，et al.Gene expression profiling reflects physiological processes in salt acclimation of Synechocystis sp.Strain PCC 6803［J］.Plant Physiol，2004，136：3290－3300.
［26］ 吳春，段舜山.鹽生杜氏藻對(duì)鹽度改變的生理響應(yīng) ［J］.生態(tài)科學(xué)，2006，25（2）：135－138.
［27］ 呂愛(ài)玲，張福，馬若欣，等.中國(guó)渤海灣灘涂極端嗜鹽綠色杜氏藻生物學(xué)特性研究（二）［J］.海湖鹽與化工，2004，34（3）：19－25.
［28］ 梁英，馮力霞，尹翠玲.葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)在微藻環(huán)境脅迫研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀及前景 ［J］.海洋科學(xué)，2007，31（1）：71－76.
［29］ 王帥，梁英，馮力霞，等.重金屬脅迫對(duì)杜氏鹽藻生長(zhǎng)及葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)的影響 ［J］.海洋科學(xué)，2010，34（10）：38－48.
猜你喜歡
代食品運(yùn)動(dòng)中微藻的科研與生產(chǎn)古今農(nóng)業(yè)(2022年1期)2022-05-05 06:58:42 中國(guó)鹽生植物分布與鹽堿地類型的關(guān)系齊魯工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(2021年2期)2021-04-23 06:37:04 絮凝法采收生物燃料微藻的研究進(jìn)展環(huán)境保護(hù)與循環(huán)經(jīng)濟(jì)(2017年3期)2017-09-26 11:42:30 鹽度和pH對(duì)細(xì)角螺耗氧率和排氨率的影響廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(2015年3期)2015-12-22 10:05:30 鹽度脅迫對(duì)入侵生物福壽螺的急性毒性效應(yīng)華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(2015年5期)2015-12-04 03:04:38 適用于高鹽度和致密巖層驅(qū)油的表面活性劑中國(guó)洗滌用品工業(yè)(2015年5期)2015-02-28 19:02:26 微藻對(duì)低溫響應(yīng)的Ca2+信號(hào)傳導(dǎo)途徑研究進(jìn)展食品工業(yè)科技(2014年23期)2014-03-11 18:19:31 膠州灣夏季鹽度長(zhǎng)期輸運(yùn)機(jī)制分析中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)(2014年6期)2014-02-28 12:20:57 鹽生海蘆筍內(nèi)生真菌Salicorn35的分離鑒定與抗氧化發(fā)酵條件優(yōu)化食品科學(xué)(2013年19期)2013-03-11 18:27:32 一株不產(chǎn)生孢子的鹽生海蘆筍內(nèi)生真菌鑒定食品科學(xué)(2013年17期)2013-03-11 18:26:55
王 帥，梁 英
（1.中國(guó)海洋大學(xué)海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島266003；2.國(guó)家海洋局第一海洋研究所海洋生態(tài)研究中心，山東 青島266061；3.中國(guó)海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院，山東 青島266003）
鹽度是影響海洋微藻生長(zhǎng)的重要環(huán)境因子，鹽度的高低必然會(huì)促進(jìn)或抑制海洋微藻的生長(zhǎng)，直接或間接影響其光合作用和呼吸作用。大量實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明［1－4］，鹽度會(huì)通過(guò)多條途徑來(lái)影響植物光合作用，例如：離子脅迫和滲透脅迫，高鹽條件下還會(huì)造成水分平衡的紊亂、影響光合電子傳遞效率和CO2同化作用。傳統(tǒng)方法確定微藻生存鹽度和最適生長(zhǎng)鹽度范圍是通過(guò)比較微藻在不同鹽度條件下的細(xì)胞密度，耗時(shí)較多［5］。為了解決這一問(wèn)題，國(guó)外某些學(xué)者利用植物體內(nèi)葉綠素作為天然探針，在黑暗環(huán)境中適應(yīng)數(shù)分鐘，然后置于適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)光下，通過(guò)檢測(cè)植物發(fā)出的隨時(shí)間變化的微弱熒光信號(hào)（Kautsky效應(yīng)）來(lái)測(cè)定微藻對(duì)鹽度的適應(yīng)范圍［6］。
利用葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)可對(duì)植物進(jìn)行活體測(cè)定和診斷，這一方法具有快速、準(zhǔn)確和需要樣品量少等優(yōu)點(diǎn)，目前，采用葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)研究不同鹽度對(duì)高等植物光合作用影響的報(bào)道相對(duì)較多，但由于實(shí)驗(yàn)材料、生長(zhǎng)階段和處理時(shí)間等因素的不同，研究結(jié)果不太一致。Singh等［7］研究結(jié)果表明鹽脅迫能促進(jìn)PSII的功能；而Allakhverdiev等［8］研究發(fā)現(xiàn)鹽脅迫會(huì)抑制PSII的功能；Qia等［9］報(bào)道鹽脅迫對(duì)PSII的功能沒(méi)有造成明顯的影響。迄今為止，有關(guān)鹽脅迫對(duì)植物葉綠素?zé)晒馓匦杂绊懸延休^多的報(bào)道［10－14］，但目前還未見(jiàn)鹽脅迫對(duì)高耐鹽藻株—鹽生杜氏藻葉綠素?zé)晒馓匦杂绊懙膱?bào)道。
鹽生杜氏藻是綠藻門(mén)中唯一一種無(wú)細(xì)胞壁的單細(xì)胞海洋微藻，是高鹽環(huán)境中常見(jiàn)藻株，具有很強(qiáng)的耐鹽性，因其富含胡蘿卜素和甘油而逐漸受到重視，近年來(lái)已被國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用于環(huán)境脅迫的研究［15］。本文采用Water－PAM葉綠素?zé)晒鈨x研究不同鹽濃度對(duì)1株具有很好的耐受高鹽脅迫特性的鹽生杜氏藻生長(zhǎng)及葉綠素?zé)晒馓匦缘挠绊?，以期為篩選耐鹽微藻藻株提供重要的方法，并為揭示鹽生杜氏藻光合作用抵抗鹽脅迫時(shí)的響應(yīng)機(jī)制提供參考依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 藻種
實(shí)驗(yàn)所用鹽生杜氏藻（Dunaliella salina）（代號(hào)MACC／C43）藻種來(lái)源于中國(guó)海洋大學(xué)藻種庫(kù)。
1.2 微藻培養(yǎng)及鹽脅迫處理
培養(yǎng)采用f／2培養(yǎng)基［16］，培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為（20±1）℃，光照強(qiáng)度為100μmol·m－2·s－1，采用連續(xù)光照進(jìn)行培養(yǎng)。
在250mL的錐形瓶中進(jìn)行鹽脅迫實(shí)驗(yàn)，將處于指數(shù)生長(zhǎng)期的鹽生杜氏藻離心洗滌后，以2.08×104個(gè)／mL的接種量分別培養(yǎng)在不同鹽度的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)液鹽度設(shè)定為5，10，20，30，40，50，60，70，80，90，100，110，120，130等梯度，每個(gè)鹽度3個(gè)平行組。培養(yǎng)過(guò)程中隨機(jī)調(diào)換錐形瓶并搖動(dòng)3次／d。在接種12、24和48h后取樣，測(cè)定鹽生杜氏藻的葉綠素?zé)晒鈪?shù)、細(xì)胞密度和葉綠素含量。
1.3 葉綠素?zé)晒鈪?shù)、葉綠素含量的測(cè)定及數(shù)據(jù)處理
按照王帥等［13］的方法，采用 Water－PAM 葉綠素?zé)晒鈨x進(jìn)行熒光參數(shù)和葉綠素含量的測(cè)定。
采用Origin Pro8.0軟件進(jìn)行作圖。采用SPSS11.0軟件進(jìn)行多因子方差分析（鹽度、脅迫時(shí)間以及二者的交互作用（鹽度×?xí)r間））和相關(guān)性分析。
2 結(jié)果
2.1 鹽度對(duì)鹽生杜氏藻葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響
圖1和表1給出了鹽度和脅迫時(shí)間對(duì)鹽生杜氏藻葉綠素?zé)晒鈪?shù)的影響。表1（a）的多因子方差分析結(jié)果表明，在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，鹽度和脅迫時(shí)間對(duì)鹽生杜氏藻的熒光參數(shù) Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo、rETR、qP 和NPQ均有顯著影響（P＜0.001），其中鹽度對(duì)參數(shù)Fv／Fm、Fv／Fo和 qP 的 影 響 更 顯 著，而 脅 迫 時(shí) 間 對(duì)rETR和NPQ的影響更顯著。表1（b）給出的多重比較結(jié)果表明，F(xiàn)v／Fm、ΦPSII和Fv／Fo值在鹽度100時(shí)最高，但在鹽度20～110范圍內(nèi)無(wú)顯著性差異；rETR值在鹽度為60時(shí)達(dá)到最高；qP值在鹽度為5時(shí)最高；NPQ值則在鹽度為90時(shí)最高。脅迫時(shí)間對(duì)該藻的上述6個(gè)熒光參數(shù)值均有顯著影響，各參數(shù)值均隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高。
鹽生杜氏藻的熒光參數(shù)與鹽度之間的相關(guān)性見(jiàn)表2，鹽度在5～70之間的范圍內(nèi)，脅迫12和48h后，鹽生杜氏藻的Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR與鹽度呈極顯著的正相關(guān)關(guān)系，脅迫48h后qP與鹽度呈顯著的正相關(guān)關(guān)系。NPQ在脅迫12h時(shí)與鹽度無(wú)明顯的相關(guān)性，在脅迫24和48h時(shí)，該參數(shù)與鹽度呈極顯著正相關(guān)；鹽度在70～130范圍內(nèi)時(shí)，熒光參數(shù)Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo、rETR 以及qP均與鹽度呈極顯著的負(fù)相關(guān)性；脅迫12h后，NPQ與鹽度呈顯著的負(fù)相關(guān)；脅迫24h后，NPQ與鹽度呈極顯著的負(fù)相關(guān)；脅迫48h后與鹽度無(wú)明顯的相關(guān)性。
圖1 鹽度對(duì)鹽生杜氏藻熒光參數(shù)、細(xì)胞密度和葉綠素含量的影響Fig.1 Effects of salinity on the fluorescence parameters，cell density and chlorophyll content of D.salina
?
表2 鹽生杜氏藻熒光參數(shù)、細(xì)胞密度及葉綠素含量與鹽度的相關(guān)系數(shù)Table 2 The interrelated coefficients of fluorescence parameters，cell density and chlorophyll content with salinity of D.salina
2.2 鹽度對(duì)鹽生杜氏藻細(xì)胞密度和葉綠素含量的影響
圖1和表1給出了鹽度和脅迫時(shí)間對(duì)鹽生杜氏藻細(xì)胞密度和葉綠素含量的影響。表1（a）的多因子方差分析表明，在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，鹽度、脅迫時(shí)間及其交互作用對(duì)該藻的葉綠素含量和細(xì)胞密度均產(chǎn)生了顯著影響（P＜0.001），脅迫時(shí)間對(duì)上述2個(gè)參數(shù)的影響最為顯著。表1（b）給出的多重比較結(jié)果表明，鹽度在5～100之間的范圍內(nèi)，48h后隨著鹽度的升高，細(xì)胞密度和葉綠素含量的值明顯增加，且均在鹽度100時(shí)達(dá)到最大值；鹽度在100～130之間時(shí)，上述2個(gè)參數(shù)的值隨鹽度升高而逐漸降低。鹽生杜氏藻的細(xì)胞密度和葉綠素含量數(shù)值均隨脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加。
表3給出的鹽生杜氏藻的熒光參數(shù)與細(xì)胞密度之間的相關(guān)關(guān)系，由表3可見(jiàn)，鹽生杜氏藻的Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR與細(xì)胞密度呈極顯著的正相關(guān)；脅迫12和24h后，qP和NPQ與細(xì)胞密度的相關(guān)性較差，qP和NPQ在脅迫48h后與細(xì)胞密度呈顯著的正相關(guān)性。
表3 鹽生杜氏藻熒光參數(shù)及葉綠素含量與細(xì)胞密度的相關(guān)系數(shù)Table 3 The interrelated coefficient of fluorescence parameters and chlorophyll content with cell density of D.salina
3 討論
作為一種研究植物光合功能的新型植物活體檢測(cè)和診斷技術(shù)，葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)在測(cè)定植物光合作用的過(guò)程中，利用植物中葉綠素作為天然探針，在光能的吸收、傳遞、分配和耗散等方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，并且其快速、靈敏、不會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷。國(guó)際上對(duì)葉綠素?zé)晒夥治黾夹g(shù)的研究已成為熱點(diǎn)，并針對(duì)耐寒性、耐熱性、耐強(qiáng)光性和耐鹽性等多種逆境生理?xiàng)l件進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)在研究植物逆境生理方面有許多優(yōu)勢(shì)［17－19］，但有關(guān)鹽脅迫對(duì)微藻光合作用影響的研究不多［12－13，20－22］。Fv／Fm比值是 PSII最大光化學(xué)量子產(chǎn)量，可以反映PSII的活性大小。正常生理狀態(tài)下參數(shù)Fv／Fm很穩(wěn)定，浮游植物Fv／Fm值保持在0.65左右［23］，該參數(shù)不具有種間特異性，但植物受到脅迫后，F(xiàn)v／Fm值會(huì)明顯降低。有研究結(jié)果表明，微藻在鹽脅迫條件下，其PSII的活性會(huì)降低，反映在Fv／Fm會(huì)隨鹽度的增加而下降。畢永紅等［20］研究發(fā)現(xiàn)，隨培養(yǎng)液中NaCl濃度的增加，發(fā)狀念珠藻（Nostoc flagelliforme）Fv／Fm比值逐漸降低，歐陽(yáng)葉新等［21］對(duì)魚(yú)腥藻（Anabaenasp.）的研究也得到了相似的結(jié)果。而陳蘭周等［22］的實(shí)驗(yàn)表明，爪哇偽枝藻（Scytonema javanicum）對(duì)鹽脅迫則很敏感，在0.1mol／L NaCl時(shí)Fv／Fm比值已下降至0.4左右。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鹽生杜氏藻有很強(qiáng)的耐鹽性，適宜鹽度范圍為20～110，在此鹽度范圍之間，F(xiàn)v／Fm比值無(wú)明顯降低，當(dāng)?shù)望}脅迫（鹽度＜20）和高鹽脅迫（鹽度＞110）條件下，F(xiàn)v／Fm比值才開(kāi)始逐漸降低。鹽脅迫條件下，鹽生杜氏藻的PSII熒光指標(biāo)Fv／Fo、rETR 與Fv／Fm具有相同 的 變 化 趨勢(shì)，可見(jiàn)鹽生杜氏藻自身光系統(tǒng)的轉(zhuǎn)換能力較強(qiáng)。ΦPSII的變化，反映的是藻細(xì)胞同化力（NADPH，ATP）的形成，即碳的固定與同化作用，本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，在鹽度20～110之間，不影響鹽生杜氏藻對(duì)CO2的固定和同化。qP（光化學(xué)淬滅）的變化表明，吸收的光能用于電子傳遞，當(dāng)qP降低時(shí)表示進(jìn)行光合作用的電子正在減少，以熱的形式耗散的光能會(huì)逐漸增加，這與NPQ（非光化學(xué)淬滅）的變化是吻合的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鹽脅迫對(duì)熒光指標(biāo)（qP和NPQ）都造成了一定程度的抑制作用。
有關(guān)微藻耐鹽機(jī)制的研究，主要集中在光合色素和蛋白含量等方面。Rafiqul［24］等研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)藻（Spirulina fusiformis）葉綠素a含量隨著NaCl濃度的增加而降低。藍(lán)藻（S.fusiformis）在較低NaCl濃度條件下，類胡蘿卜素含量降低；而在較高NaCl濃度條件下，其類胡蘿卜素含量增加。耐鹽藍(lán)藻（Anabaena doliolum）的葉綠素含量則隨著NaCl濃度的增加而增加［7］。鹽脅迫下，藻藍(lán)蛋白（PC）含量的變化結(jié)果較為一致，集胞藻（Synechocystis sp.）PCC6803在鹽處理下，PC含量明顯降低［25］；藍(lán)藻（S.fusiformis）的 PC含量隨鹽濃度的增加而降低［24］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在鹽度為20～110條件下，鹽脅迫不僅不會(huì)對(duì)耐鹽的鹽生杜氏藻造成損傷，反而會(huì)促進(jìn)其生長(zhǎng)，48h后隨著鹽度的升高，細(xì)胞密度和葉綠素含量逐漸增加，鹽度為100時(shí)，二者均達(dá)到最大值。但超過(guò)一定鹽度范圍（＞110）后，高鹽脅迫對(duì)鹽生杜氏藻的PSII會(huì)產(chǎn)生傷害，主要表現(xiàn)在加速了藻體中葉綠素含量的降低（見(jiàn)圖1），可能高鹽（＞110）會(huì)影響類囊體膜的穩(wěn)定性，加速葉綠素的分解，從而降低PSII反應(yīng)中心的光合速率。目前對(duì)于微藻耐鹽機(jī)制的研究還不是十分清楚，僅從某一方面研究其耐鹽性還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠，這有待于進(jìn)行深入研究。
鹽生杜氏藻屬于水產(chǎn)動(dòng)物的優(yōu)質(zhì)餌料之一，但可能由于微藻藻株、培養(yǎng)條件等因素的不同，目前對(duì)鹽生杜氏藻適鹽范圍的報(bào)道并不一致。吳春［26］報(bào)道鹽生杜氏藻（D.salina）的最適鹽度范圍為20～30。而呂愛(ài)玲等［27］對(duì)中國(guó)渤海灣灘涂的綠色杜氏藻進(jìn)行鹽度馴化實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為綠色杜氏藻可在9～320的鹽度范圍生長(zhǎng)，能耐受接近飽和的鹽度條件。本文的研究結(jié)果表明，鹽生杜氏藻對(duì)鹽度的適應(yīng)范圍很廣，在鹽度20～110時(shí)，F(xiàn)v／Fm值無(wú)顯著性差異，這表明鹽度20～110均適于鹽生杜氏藻的生長(zhǎng)，與之前利用葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)對(duì)塔胞藻［13］的研究結(jié)果相比，本研究篩選得到的這株鹽生杜氏藻（D.salina）具有更好的耐鹽性，在高鹽條件下更有利于對(duì)其進(jìn)行培養(yǎng)。即使鹽度在5～20之間的低鹽脅迫條件下，F(xiàn)v／Fm、ΦPSII、Fv／Fo、rETR、細(xì)胞密度和葉綠素含量等一系列指標(biāo)均在逐漸增加（見(jiàn)圖1），這也是該藻株對(duì)鹽度較強(qiáng)適應(yīng)性的一種表現(xiàn)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，鹽生杜氏藻在鹽度5～110之間均能生長(zhǎng)，最適鹽度為100。本文的結(jié)果表明，鹽生杜氏藻PSII的熒光指標(biāo)（Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR）與細(xì)胞密度均呈極顯著的正相關(guān)性，而且細(xì)胞密度也與葉綠素含量呈極顯著的正相關(guān)性，因此，在一定范圍內(nèi)，可通過(guò)該藻PSII熒光指標(biāo)的變化反映其細(xì)胞密度及葉綠素含量對(duì)鹽脅迫的耐受性。與計(jì)數(shù)細(xì)胞密度的傳統(tǒng)方法相比，葉綠素?zé)晒夥治龇椒ǜ涌焖?、靈敏和準(zhǔn)確，并且不會(huì)對(duì)藻細(xì)胞造成損傷［28－29］。
現(xiàn)已證明，PSII的熒光指標(biāo)更能反映植物的內(nèi)在性特點(diǎn)，因此，葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)已成為篩選高等植物（擬南芥、枸杞，特別是小麥等）耐鹽品種的一種理想手段［1，4，14］。本文的結(jié)果表明，篩選得到的鹽生杜氏藻其耐鹽性很好，該藻 PSII的熒光指標(biāo)（Fv／Fm、ΦPSII、Fv／Fo和rETR）與細(xì)胞密度具有良好的正相關(guān)關(guān)系，可用于該藻鹽脅迫耐受性的評(píng)價(jià)依據(jù)，但目前對(duì)這方面研究的微藻品種還較少，PSII的熒光指標(biāo)作為篩選耐鹽微藻的參考指標(biāo)是否可行，有待針對(duì)不同的微藻品種和品系進(jìn)行全面的實(shí)驗(yàn)研究，以確定該方法的適應(yīng)范圍及可靠性。
［1］ 趙昕，吳雨霞，趙敏桂，等.NaCl脅迫對(duì)鹽芥和擬南芥光合作用的影響 ［J］.植物學(xué)通報(bào)，2007，24（2）：154－160.
［2］ 周麗，孟祥紅，劉成圣.滲透脅迫對(duì)杜氏鹽藻胞內(nèi)甘油含量及相關(guān)酶活性影響 ［J］.植物學(xué)通報(bào)，2006，23（2）：145－151.
［3］ Rosarlo V E，Bronwyn J B，Liliana G R，et al.Salt stress in Thellungiella halopila activates Na＋transport mechanisms required for salinity tolerance［J］.Plant Physiol，2005，139：1507－1517.
［4］ 惠紅霞，許興，李前榮.NaCl脅迫對(duì)枸杞葉片甜菜堿、葉綠素?zé)晒饧叭~綠素含量的影響 ［J］.干旱地區(qū)農(nóng)業(yè)研究，2004，22（3）：109－114.
［5］ 馮力霞.環(huán)境脅迫對(duì)4株微藻葉綠素?zé)晒馓匦缘难芯?［D］.青島：中國(guó)海洋大學(xué)，2006：1－85.
［6］ 馮永軍，史寶勝，董桂敏，等.葉綠素?zé)晒庹T導(dǎo)動(dòng)力學(xué)在植物抗逆性及水果保鮮中的應(yīng)用 ［J］.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，26：89－92.
［7］ Singh D P，Kshatriya K.NaCl－induced oxidative damage in the cyanobacterium Anabaena doliolum ［J］.Curr Microbiol，2002，44（6）：411－417.
［8］ Allakhverdiev S I，Klimov V V，Hagemenn M.Cellular energization protects the photosynthetic machinery against salt－induced inactivation in Synechococcus ［J］.Biochim Biophys Acta，2005，1708：201－208.
［9］ Qia N W，Lu Q T，Lu C M.Photosynthesis，photosystem II efficiency and the xanthophyll cycle in the salt－adapted halophyte Atri－plex centralasiatica［J］.New Phytol，2003，159：479－486.
［10］ Lu C，Qiu N，Lu Q，et al.Does salt stress lead to increased susceptibility of photosystem Ⅱ to photoinhibition and changes in photosynthetic pigment composition in halophyte Suaeda salsa grown outdoors？［J］.Plant Sci，2002，163：1063－1068.
［11］ Netondo G W，Onyango J C，Beck E.Sorghum and salinity：Ⅱ.Gas exchange and chlorophyll fluorescence of Sorghum under salt stress［J］.Crop Sci，2004，44（3）：806－811.
［12］ Lu C M，Vonshak A.Effects of salinity stress on photosystem II function in cyanobacterial Spirulina platensis cells［J］.Physiol Plant，2002，114：405－413.
［13］ 梁 英，馮力霞，田傳遠(yuǎn)，等.鹽脅迫對(duì)塔胞藻生長(zhǎng)及葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)的影響 ［J］.中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2006，36（5）：726－732.
［14］ 黃有總，張國(guó)平.葉綠素?zé)晒鉁y(cè)定技術(shù)在麥類作物耐鹽性鑒定中的應(yīng)用 ［J］.麥類作物學(xué)報(bào)，2004，24（3）：114－116.
［15］ 耿德貴，韓燕，王義琴，等.杜氏鹽藻的耐鹽機(jī)制研究進(jìn)展和基因工程研究的展望 ［J］.植物學(xué)通報(bào)，2002，19（3）：290－295.
［16］ Guillard R R，Ryther J H.Studies of marine planktonic diatoms.I.Cyclotella nana （Hustedt）and Detonula confervacea （Cleve）Gran［J］.Can J Microbiol，1962，8：229－239.
［17］ Annick M，Elisabeth P，Gerard T.Osmotic adjustment，gas exchanges and chlorophyll fluorescence of a bexaploid triticale and its parental species under salt stress ［J］.Plant Physiol，2004，1619（1）：25－33.
［18］ Bhargava S，Paranjpe S.Genotypic variation in the photosynthetic competence of Sorghum bicolor seedlings subjected to polyethylene glycol－mediated drought stress［J］.Plant Physiol，2004，161（1）：125－129.
［19］ Lavaud J，Rousseau B，Gorkom H J van，et al.Influence of the diadinoxanthin pool size on photoprotection in the marine planktonic diatom Phaeodactylum tricornutum ［J］.Plant Physiol，2002，129（3）：1398－1406.
［20］ 畢永紅，鄧中洋，胡征宇，等.發(fā)狀念珠藻對(duì)鹽脅迫的響應(yīng) ［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2005，29（2）：125－129.
［21］ 歐陽(yáng)葉新，施定基，黃開(kāi)耀，等.魚(yú)腥藻7120響應(yīng)NaCl脅迫的光合特性 ［J］.水生生物學(xué)報(bào)，2003，27（1）：74－77.
［22］ 陳蘭周，劉永定，李敦海.鹽脅迫對(duì)爪哇偽枝藻生理生化特性的影響 ［J］.中國(guó)沙漠，2003，23（3）：285－288.
［23］ SeppalaJ.fluorescence properties of Baltic sea phytoplankton［D］.Helsinki：University of Helsinki，2009：1－43.
［24］ Rafiqul I M，Hassan A，Sulebele G，et al.Salt stress culture of blue－green algae Spirulina fusiformis ［J］.Pakistan Biological Sci，2003，6（7）：648－650.
［25］ Marin K，Kanesaki Y，Los D A，et al.Gene expression profiling reflects physiological processes in salt acclimation of Synechocystis sp.Strain PCC 6803［J］.Plant Physiol，2004，136：3290－3300.
［26］ 吳春，段舜山.鹽生杜氏藻對(duì)鹽度改變的生理響應(yīng) ［J］.生態(tài)科學(xué)，2006，25（2）：135－138.
［27］ 呂愛(ài)玲，張福，馬若欣，等.中國(guó)渤海灣灘涂極端嗜鹽綠色杜氏藻生物學(xué)特性研究（二）［J］.海湖鹽與化工，2004，34（3）：19－25.
［28］ 梁英，馮力霞，尹翠玲.葉綠素?zé)晒饧夹g(shù)在微藻環(huán)境脅迫研究中的應(yīng)用現(xiàn)狀及前景 ［J］.海洋科學(xué)，2007，31（1）：71－76.
［29］ 王帥，梁英，馮力霞，等.重金屬脅迫對(duì)杜氏鹽藻生長(zhǎng)及葉綠素?zé)晒鈩?dòng)力學(xué)的影響 ［J］.海洋科學(xué)，2010，34（10）：38－48.
猜你喜歡
古今農(nóng)業(yè)(2022年1期)2022-05-05 06:58:42
齊魯工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(2021年2期)2021-04-23 06:37:04
環(huán)境保護(hù)與循環(huán)經(jīng)濟(jì)(2017年3期)2017-09-26 11:42:30
廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(2015年3期)2015-12-22 10:05:30
華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(2015年5期)2015-12-04 03:04:38
中國(guó)洗滌用品工業(yè)(2015年5期)2015-02-28 19:02:26
食品工業(yè)科技(2014年23期)2014-03-11 18:19:31
中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)(2014年6期)2014-02-28 12:20:57
食品科學(xué)(2013年19期)2013-03-11 18:27:32
食品科學(xué)(2013年17期)2013-03-11 18:26:55
