傅天嘯，張　愷，王彬達，傅永清

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州　310053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州　310006）

大鼠足三里穴位注射參附注射液防治術(shù)后早期炎性腸梗阻的實驗研究

傅天嘯1，張愷1，王彬達1，傅永清2

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江 杭州310053；2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，浙江 杭州310006）

［目的］觀察參附注射液足三里穴位注射對大鼠術(shù)后早期炎性腸梗阻的防治效果。［方法］將45只大鼠隨機分成3組，每組各15只，采用腸管表面反復(fù)擦拭法建立炎性腸梗阻模型，參附組予以參附注射液足三里穴位注射，生理鹽水組予生理鹽水足三里穴位注射，對照組造模成功后不做任何處理。觀察干預(yù)后各組大鼠生命體征變化，測定血清炎癥因子（IL-6，IL-8，TNF-α）水平變化和腸道傳輸功能。［結(jié)果］參附組IL-6，IL-8，TNF-α表達水平顯著低于對照組和生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。參附組腸道推進率顯著高于對照組和生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。［結(jié)論］參附注射液足三里穴位注射能降低炎癥因子水平，增強腸道蠕動能力，從而有效防治術(shù)后早期炎性腸梗阻。

術(shù)后早期炎性腸梗阻；參附注射液；穴位注射；大鼠；炎癥因子

術(shù)后早期炎性腸梗阻（early postoperative inflammatory bowel obstruction，EPIBO）是腹部外科手術(shù)后常見的并發(fā)癥，發(fā)生于腹部手術(shù)后早期，以2周之內(nèi)居多，約占20%［1］，與腹部手術(shù)造成的創(chuàng)傷及術(shù)后腹腔炎癥等因素導(dǎo)致的腸壁水腫和滲出有關(guān)。足三里為人體足陽明胃經(jīng)上的重要穴位，具有調(diào)理脾胃、提高機體免疫力、增強抗病能力、補中益氣、扶正祛邪的作用。參附注射液具有固陽扶正、恢復(fù)臟腑正常功能之功效。筆者通過實驗觀察足三里穴位注射參附注射液對大鼠術(shù)后早期炎性腸梗阻的防治效果，現(xiàn)報道如下。

1　實驗材料

1.1動物SPF（specific pathogen free，SPF）級雄性SD大鼠45只，體重200±20 g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：SCXK（浙）2008-0003號。

1.2實驗藥材與試劑戊巴比妥鈉（北京化學(xué)試劑公司，批號：090205）、參附注射液（雅安三九藥業(yè)有限公司，批號：Z20043116）、伊文氏藍溶液（Sigma公司，規(guī)格：E2129-50G）、9 g/L氯化鈉注射液（安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：1001021E）、IL-6（白細胞介素-6）、IL-8（白細胞介素-8）酶聯(lián)免疫試劑盒（購自上海森雄科技實業(yè)有限公司）。

1.3儀器大鼠手術(shù)器械套裝（北京拜安吉科技有限公司）、FA2004電子天平（上海精天天平廠）、80-2型臺式離心機［上海醫(yī)療器械（集團）有限公司手術(shù)器械廠］、Forma702型超低溫冰箱（美國熱電公司）。

2　方法

2.1動物分組將45只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，按大鼠體重從高到低排序，查隨機數(shù)字表，隨機分成3組。分別為空白對照組（簡稱對照組）、生理鹽水足三里穴位注射（簡稱生理鹽水組）及參附注射液足三里穴位注射組（簡稱參附組），每組15只。

2.2造模方法戊巴比妥鈉（50 mg/kg）腹腔注射麻醉，麻醉后四肢固定于手術(shù)臺上，腹部備皮，碘伏消毒皮膚，鋪巾以充分暴露手術(shù)部位。于下腹部正中線做一個長約3 cm的切口，依次切開皮膚、腹壁肌肉后進腹。輕輕取出全部小腸外置于兩層濕紗布之間，用鹽水濕棉球由小腸末端自下而上擦拭腸管至幽門環(huán)，反復(fù)6次左右，時間共約10 min，期間注意防止損傷腸系膜血管。然后將全部腸管放回腹腔，注意理順小腸防止扭轉(zhuǎn)。用1號絲線分層連續(xù)縫合肌肉及皮膚關(guān)腹［2］。

2.3給藥生理鹽水組于造模1 h后進行第1次干預(yù)，即生理鹽水雙側(cè)足三里穴位注射（大鼠足三里穴位于后腿前，膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，在腓骨小頭下5 mm靠脛骨外側(cè)處）［3］，每次劑量為0.8 ml/kg，之后每12 h注射1次；參附組于造模1 h后進行第1次干預(yù)，即參附注射液雙側(cè)足三里穴位注射，每次劑量為0.8 ml/kg，之后每12 h注射1次。以5天為實驗干預(yù)療程，實驗期間動物自由飲水。對照組采用上述方法造模，造模前后不作處理，予以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。

2.4血清IL-6，IL-8，TNF-α（腫瘤壞死因子-α）水平測定5天干預(yù)結(jié)束后，各組大鼠眼眶取靜脈血5 ml，3 000 r/min離心5 min，離心后取上清液，置－20℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清中IL-6，IL-8，TNF-α水平，具體步驟嚴格參照試劑盒說明書操作。

2.5腸道推進率測定5天干預(yù)結(jié)束后，用灌胃針從大鼠口灌入0.15 ml伊文氏藍溶液，1 h后頸椎脫臼法處死大鼠，立即剖腹取出全小腸（幽門環(huán)至小腸末端），無張力狀態(tài)下測量藍染腸管長度及小腸總長度，并計算出腸道推進率（胃腸推進率=藍染腸道長度/全小腸長度×100%），最后計算每組的平均值。

2.6一般情況觀察觀察大鼠的一般狀態(tài)，包括活動、精神狀況、食欲、腹脹、肛門排便等，實驗前實驗中用體溫計測肛溫。

2.7統(tǒng)計學(xué)方法實驗數(shù)據(jù)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，多組樣本間比較采用單因素方差分析，進一步的組間兩兩比較采用LSD法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3　結(jié)果

3.1一般情況參附組大鼠靈活好動、精力充沛、飲食正常、皮毛光滑、無腹脹、排便無特殊、肛溫正常范圍內(nèi)。生理鹽水組出現(xiàn)不同程度的活動度下降、精神萎靡、飲食量少、皮毛欠光澤、腹脹、排便量少、肛溫升高。對照組大鼠的一般狀態(tài)程度明顯差于生理鹽水組，精神萎靡、性情溫順、不喜動、不飲食、皮毛凌亂、腹脹明顯、無排便或量極少、肛溫高。各組大鼠開腹取出的小腸腸壁出現(xiàn)不同程度的充血水腫，腹腔內(nèi)均有粘連。以對照組水腫程度最盛，粘連顯著；生理鹽水組次之；參附組充血及粘連情況不明顯。

3.2各組血清IL-6，IL-8，TNF-α水平比較與對照組和生理鹽水組相比，參附組的IL-6，IL-8，TNF-α表達水平均顯著降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。說明參附注射液能有效抑制EPIBO的關(guān)鍵炎癥因子，再結(jié)合一般情況的觀察，分析得出參附注射液對EPIBO有確切的治療效果。見表1。

表1　各組大鼠血清IL-6，IL-8，TNF-α表達水平測定結(jié)果　（pg/ml，±s）

表1　各組大鼠血清IL-6，IL-8，TNF-α表達水平測定結(jié)果?。╬g/ml，±s）

注：與參附組比較，①P＜0.05

組別　n　IL-6　IL-8　TNF-α參附組　15　192.34±6.26　293.57±6.93　120.50±4.67生理鹽水組　15　255.89±3.26①　313.29±8.30①　139.48±7.52①對照組　15　254.78±5.33①　314.71±9.27①　143.08±6.23①

3.3各組大鼠腸道傳輸功能比較與對照組、生理鹽水組相比，參附組大鼠根據(jù)伊文氏藍染長度計算所得胃腸道推進率均明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。說明參附組大鼠胃腸道梗阻程度低，間接反映參附注射液對炎癥的抑制作用。見表2。

表2　各組大鼠腸道傳輸功能測定結(jié)果?。ā纒）

表2　各組大鼠腸道傳輸功能測定結(jié)果?。ā纒）

注：與參附組比較，①P＜0.01

組　別　n　小腸總長度（cm）　伊文氏藍染長度（cm）　胃腸推進率（%）參附組　15　89.12±6.54　63.29±6.93　71.61±2.67生理鹽水組　15　90.78±3.45　42.72±10.21①　47.98±4.39①對照組　15　90.33±5.38　40.90±9.27①　45.78±2.03①

4　討論

EPIBO是一種常見的外科腹部手術(shù)并發(fā)癥，是機械性因素和動力性因素混合存在的一種腸梗阻類型。腹部手術(shù)損傷或腹腔內(nèi)炎癥等原因刺激腹膜單核巨噬細胞和中性粒細胞，誘發(fā)炎癥反應(yīng)，釋放各種細胞因子或炎性介質(zhì)，導(dǎo)致腸袢間粘連或與其他臟器間粘連。EPIBO的特點是廣泛腸壁水腫充血、炎性滲出、腸袢相互粘連導(dǎo)致蠕動功能下降，腸腔機械性不暢［4］。國內(nèi)外對于EPIBO的基本防治原則大致相同。預(yù)防方法主要為術(shù)前糾正內(nèi)環(huán)境失衡；術(shù)中操作精細，保護組織及器官，避免腸管長時間暴露，減少首次手術(shù)對腹膜和腸管漿膜面的損傷范圍和程度［5］，盡可能吸凈腹內(nèi)炎癥產(chǎn)生的積液。近年來隨著腹腔鏡技術(shù)的普及，粘連性腸梗阻的發(fā)生率顯著降低［6］。本病治療多采取保守性非手術(shù)治療，包括禁食、持續(xù)胃腸減壓、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、給予適量激素以減少胃腸道消化液分泌等［7］。

外科腹部手術(shù)導(dǎo)致的組織損傷會刺激機體釋放大量TNF-α，TNF-α主要由單核細胞、巨噬細胞分泌產(chǎn)生，在生理情況下具有抗腫瘤、抗感染及免疫調(diào)節(jié)等多種生物功能，是參與機體炎癥反應(yīng)和一系列病理生理過程的重要介質(zhì)，對機體有利。而病理損傷的情況下單核細胞大量分泌TNF-α，過度釋放可激發(fā)更多細胞因子的產(chǎn)生，進而誘發(fā)一系列炎癥連鎖反應(yīng)，同時抑制機體免疫反應(yīng)，提高患者的感染幾率［8］。IL-6的產(chǎn)生就是由于TNF-α誘導(dǎo)的細胞反應(yīng)［9］，兩者往往呈正相關(guān)，申莉萍等［10］臨床研究發(fā)現(xiàn)，EPIBO發(fā)生時IL-6、TNF-α的合成、釋放明顯增多，采用穴位注射加電針的治療組IL-6、TNF-α水平均迅速下降。研究發(fā)現(xiàn)IL-6是一種多向性細胞因子，可通過STAT-3途徑激活核因子-κB（Nuclear Factor-kappa B，NF-κB），進而誘導(dǎo)細胞間粘附分子的極化表達，而粘附分子是炎性腸病患者的中性粒細胞與上皮細胞間相互作用中起重要作用的物質(zhì)。當IL-6表達過度時，機體內(nèi)環(huán)境紊亂，腸上皮細胞電解質(zhì)分泌受到影響，細胞通透性增強，附著的中性粒細胞涌出、浸潤到炎癥部位，產(chǎn)生炎癥反應(yīng)［11］。除了上述兩種炎癥介質(zhì)，IL-8也是腸道炎癥反應(yīng)中的重要且靈敏的炎癥因子，其趨化作用介導(dǎo)并激活中性粒細胞聚集。國外研究證實［12-14］，炎性腸梗阻時細胞免疫產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)，以IL-6、IL-8和TNF-α三者為主，故本實驗以IL-6、IL-8和TNF-α為主要觀察指標。

中醫(yī)認為，EPIBO屬“腸結(jié)”“氣格”“腸脹”等范疇，且手術(shù)對人體是一個驅(qū)邪傷正的過程，手術(shù)創(chuàng)傷和腹腔內(nèi)炎癥耗傷了人體正氣，致正氣虧虛，臟腑功能虛弱，腑氣通行不暢，升降功能失調(diào)。本病病機屬本虛標實，且以本虛為主，因此本次實驗研究以扶正補虛為主要治療原則。足三里為人體足陽明胃經(jīng)上的重要穴位，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實，針灸刺激足三里穴，可使胃腸蠕動規(guī)律有力，提高多種消化酶的活力，改善微循環(huán)，消除炎癥反應(yīng)，雙向調(diào)節(jié)胃腸道功能［15］。參附注射液根據(jù)古方“參附湯”研制。紅參是人參的熟用品，具有大補元氣、復(fù)脈固脫、益氣攝血的功效，常用于治療體虛欲脫、肢冷脈微、氣不攝血、心衰休克等癥狀。附子號稱中藥“回陽救逆第一品”，具有回陽救逆、補火助陽、散寒除濕等功效，常用于感染休克、風(fēng)寒濕痹、四肢厥逆、脈微欲絕等病癥。參附注射液憑借其“多靶效應(yīng)”，已在臨床廣泛應(yīng)用于多種疾病?，F(xiàn)代藥理研究表明，參附注射液主要成分為人參皂苷和烏頭堿，可直接滅活抗氧自由基，改善血液流變性，調(diào)整免疫功能，具有抗炎和提高機體對缺氧的耐受性的作用，同時調(diào)整腸壁運動，促進蠕動以增強腸道張力，減輕并抑制腸黏膜細胞破壞，維持腸黏膜的屏障作用以減少菌群移位，有助于減少感染，還能抑制NF-κB活化，降低TNF-α及IL-6水平，從而起到減輕臟器的病理損傷、保護臟器組織結(jié)構(gòu)的作用［16］。王進等［17］在對全身炎癥大鼠模型的研究中發(fā)現(xiàn)參附注射液可通過降低NF-κB功能來達到減輕炎癥反應(yīng)的作用，以此推測其可以間接降低IL-6，IL-8，TNF-α水平。但參附注射液對大鼠血液單核細胞中IL-6，IL-8，TNF-α活性的直接影響以及對EPIBO的防治效果及相關(guān)機制鮮有報道。

本實驗研究發(fā)現(xiàn)：各組大鼠腹腔內(nèi)均有廣泛粘連，腸壁充血水腫，以對照組最為明顯，證明反復(fù)擦拭腸管的造模方法簡單可行。對照組造模成功后IL-6，IL-8，TNF-α表達水平升高明顯，且大鼠出現(xiàn)活動度下降、精神萎靡、排便減少、不欲飲食、肛溫升高等體征，說明EPIBO通過釋放炎癥介質(zhì)或細胞因子等機制，在產(chǎn)生炎癥反應(yīng)的同時導(dǎo)致腸管間粘連，降低胃腸道蠕動功能。參附組行足三里穴位注射后，IL-6，IL-8，TNF-α表達水平均顯著低于對照組和生理鹽水組（P＜0.05），同時對比參附組實驗前后的體征，表明通過降低IL-6，IL-8，TNF-α表達水平確能消除炎癥反應(yīng)，抑制炎癥進展，有效改善EPIBO，從而減少腸道黏膜損傷。以上結(jié)果進一步說明上述炎癥因子是EPIBO發(fā)病的重要核心因素，確與機體炎癥反應(yīng)與病理損傷有重要聯(lián)系，而三者之間的相互影響機制有待更深入研究。通過計算腸道推進率發(fā)現(xiàn)，參附組的腸道功能顯著強于對照組與生理鹽水組（P＜0.05），說明參附注射液穴位注射一方面通過“多靶效應(yīng)”可抑制EPIBO核心炎癥因子的產(chǎn)生，直接緩解癥狀；另一方面通過穴位刺激可提高胃腸道蠕動，增強機體免疫能力，抑制腸道菌群，保護胃腸組織與器官，恢復(fù)正常消化排泄。

綜上，本實驗研究結(jié)果表明，對EPIBO大鼠進行參附注射液足三里穴位注射，能抑制重要炎癥因子，保護胃腸道功能，對EPIBO確有積極防治作用，為外科臨床應(yīng)用推廣奠定基礎(chǔ)。

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（編輯劉強）

R656

A

2095-4441（2015）03-0005-03

2014-11-04

浙江省中醫(yī)藥管理局項目（編號：2012ZA043）

傅天嘯（1992-），漢族，碩士研究生，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合外科方向

傅永清，Email：fuyongqing1949@163.com