周歡，王小平，白吉慶

(陜西中醫(yī)學院，陜西 咸陽 712046)

·基礎研究·

連翹薄層鑒別方法的改進△

周歡，王小平，白吉慶*

(陜西中醫(yī)學院，陜西 咸陽 712046)

目的：對連翹薄層色譜鑒別的展開系統(tǒng)進行改進。方法：改進了原標準的展開系統(tǒng)，增加了蘆丁、槲皮素的鑒別。采用硅膠G板，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)為展開劑，置紫外光燈(365 nm)下，檢視連翹酯苷A和槲皮素；再噴10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點清晰，檢視連翹苷和蘆丁。結果：供試品色譜中，連翹酯苷A、槲皮素、連翹苷和蘆丁的斑點清晰，重復性好。結論：該方法簡單，用毒性較小的二氯甲烷替代了原標準中的三氯甲烷，綠色環(huán)保，同時還可以鑒別連翹中的蘆丁、槲皮素，可替代原標準用于連翹的鑒別。

連翹；薄層鑒別；連翹苷；蘆??；連翹酯苷A；槲皮素

連翹為木犀科植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實。秋季果實初熟尚帶綠色時采收，除去雜質后蒸熟、曬干，習稱“青翹”。其具有清熱解毒，消腫散結，疏散風熱之功能，可用于治療乳癰、丹毒、風熱感冒、瘟病初起，癰疽，瘰疬，高熱煩渴，神昏發(fā)斑，熱淋澀痛[1]。連翹主產(chǎn)于山西、陜西、河南等地。青翹中富含苯乙醇苷類、木質素及其苷類、黃酮類、萜類、生物堿、揮發(fā)油等化合物[2-8]，現(xiàn)代臨床上多用于治療呼吸道感染，急性腎炎、肝炎、腦膜炎等疾病。現(xiàn)代藥理研究表明，連翹具有抗菌、抗炎、抗病毒、保肝解熱等作用[3-4，7-8]。2010版《中華人民共和國藥典》中連翹的薄層色譜鑒別只鑒別了連翹苷，改進方法中新增蘆丁、連翹酯苷A、槲皮素對照品，使方法更科學、更完整。同時原標準中展開劑使用了毒性較大的三氯甲烷，其有潛在的致癌性[9]，因此，本試驗對展開系統(tǒng)進行了改進，以減少對人體的危害及環(huán)境的污染。通過研究，建立了一種較為理想的薄層鑒別展開系統(tǒng)。供試品色譜中所鑒別的成分斑點清晰，分離度好，重復性好。該方法可以替代原標準用于連翹的鑒別。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

JM-B20002電子天平(諸暨市超澤衡器設備有限公司，d=0.01 g)；BT 125D電子分析天平[賽多利斯科學儀器(北京)有限公司，d=0.1 mg，0.01 mg]；200 g多功能粉碎機(上海樹立儀表有限公司)；101-2型電熱鼓風干燥箱(科偉)；KQ300VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)；ZF-90多功能暗箱式紫外透射儀(上海寶山顧村電光儀器廠)；

1.2 試藥

連翹苷對照品、蘆丁對照品、連翹酯苷A對照品、槲皮素對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號分別為110821-200711，080-9705，111810-201103，100081-200907)；二氯甲烷、三氯甲烷、甲酸、甲醇、石油醚、乙酸乙酯等試劑均為分析純。連翹藥材經(jīng)陜西中醫(yī)學院白吉慶副教授鑒定為木犀科植物連翹的果實，產(chǎn)地為陜西商洛、河南三門峽、湖北鄖縣、河北井陘縣。

2 方法和結果

2.1 方法

2.1.1 供試品溶液的制備 取本品粉末1 g，加石油醚(30～60 ℃)20 mL，密塞，超聲處理15 min，濾過，棄去石油醚液，殘渣揮干石油醚；加甲醇20 mL，密塞，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 mL使其溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 對照溶液的制備 精密稱取連翹苷對照品1.61 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得連翹苷對照品溶液；精密稱取蘆丁對照品1.01 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得蘆丁對照品溶液；精密稱取連翹酯苷A對照品1.58 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得連翹酯苷A對照品溶液；精密稱取槲皮素對照品1.02 mg，置10 mL容量瓶中，加甲醇適量使其溶解，稀釋至刻度，搖勻，即得槲皮素對照品溶液。

2.2 結果

2.2.1 改進方法 照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗[8]，吸取上述4種對照品溶液各2 μL和供試品溶液4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干。置于紫外光燈(365 nm)下檢視連翹酯苷A和槲皮素，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，結果見圖1。再噴10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點清晰，檢視連翹苷和蘆丁，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，結果見圖2。

注：1.陜西產(chǎn)連翹；2.連翹酯苷A對照品；3.河南產(chǎn)連翹；4.槲皮素對照品；5.湖北產(chǎn)連翹。圖1 連翹的薄層色譜法鑒別(改進方法)

注：1.陜西產(chǎn)連翹；2.連翹苷對照品；3.河南產(chǎn)連翹；4.蘆丁對照品；5.湖北產(chǎn)連翹；6.河北產(chǎn)連翹。圖2 連翹的薄層色譜法鑒別(改進方法)

2.2.2 原方法 照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗[8]，吸取上述連翹苷對照品溶液和供試品溶液各3 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(8∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱至斑點清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點，結果見圖3。

注：1.陜西產(chǎn)連翹；2.連翹苷對照品；3.河南產(chǎn)連翹；4.河北產(chǎn)連翹；5.湖北產(chǎn)連翹。圖3 連翹的薄層色譜法鑒別(藥典方法)

3 討論

溫度和濕度是薄層色譜鑒別的影響因素。本試驗對展開環(huán)境的溫度進行考察，結果在15～25 ℃，供試品色譜中主要斑點的分離度較好；同時對展開環(huán)境的相對濕度進行考察，分別考察了相對濕度為20%、30%、60%、75%，結果在20%～60%，供試品色譜中主要斑點的分離度較好。對改進后的方法進行了穩(wěn)定性和重復性試驗，穩(wěn)定性試驗表明，樣品在8 h內(nèi)進行薄層鑒別，供試品色譜中主要斑點的分離度較好；重復性試驗表明，改進后的方法重復性良好。

2010版《中華人民共和國藥典》中連翹的薄層鑒別只鑒別了連翹苷，本試驗對連翹的展開系統(tǒng)進行優(yōu)化，最終以二氯甲烷-甲醇-甲酸(8∶1∶0.5)為展開劑，對連翹進行鑒別。該鑒別方法在鑒別連翹苷的同時，還增加了連翹酯苷A、蘆丁、槲皮素的鑒別，使連翹的鑒別更加完整。本次試驗所建立的方法簡單、專屬性強、重復性好，可為修訂該藥的質量標準提供參考。

原標準中連翹薄層鑒別的展開系統(tǒng)中使用三氯甲烷為主要展開劑，該試劑毒性較大，而本試驗用毒性較小的二氯甲烷代替三氯甲烷。改進后的展開系統(tǒng)不僅不會影響連翹中的連翹苷的鑒別，還能對連翹中的連翹酯苷A、蘆丁、槲皮素進行鑒別，而且還減少了對人體的危害及環(huán)境的污染。

本試驗所建立的方法不僅使連翹的鑒別更加科學、完整，而且還降低了展開系統(tǒng)對環(huán)境的污染及人體的傷害，可替代原標準用于連翹的鑒別。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：159-160.

[2] 白吉慶，王小平，曹林林.不同采收期青翹中4種活性成分的含量分析[J].西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版)，2012，40(7)：193-198.

[3] 付云飛，李清，畢開順.RP-HPLC 法同時測定不同產(chǎn)地連翹中的7種成分[J].中草藥，2013，44(8)：1043-1046.

[4] 胡靜，馬琳，張堅.連翹的研究進展[J].中南藥學，2012，10(10)：760-764.

[5] 雷秋香，單彪，胡小倩.連翹藥理學作用研究進展[J].河北醫(yī)藥，2012，34(24)：3802-3804.

[6] 雷建林，李艷桃，聶會生.HPLC法測定不同產(chǎn)地連翹藥材中連翹苷的含量[J].中華中醫(yī)藥學刊，2012，30(1)：202-204.

[7] 葉良紅.連翹有效成分的提取工藝和藥代動力學研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學，2013.

[8] 許佳.青翅的質量標合理采收期初步研究[D].太原：山西大學，2013.

[9] 王海蘭.三氯甲烷的職業(yè)危害與防護[J].現(xiàn)代職業(yè)安全，2014，153(5)：110-112.

ImprovementofTLCIdentificationMethodforFructusForsythiae

ZHOUHuan，WANGXiaoping，BAIJiqing*

(ShaanxiUniversityofTCM，Xianyang712046，Shaanxi，China)

Objective：To improve the TLC identification method for Fructus Forsythiae.Methods：TLC developing system of the original quality standard was improved，and rutin and quercetin were added for identification.Using silica gel G thin layer plate，the sample，forsythoside A，rutin and quercetin were developed with dichloromethane-methanol-formic acid(8∶1∶0.5).Forsythoside A and quercetin were detected under the uv lamp(365 nm)，thereafter the TLC plate was sprayed with 10% ethanol solution of sulfuric acid，and heated at 105 ℃ to examine forsythoside A and rutin.Result：In the chromatogram，the spots of forsythoside A，rutin and quercetin.The method was repeatable.Conclusion：The method is simple and environment friendly，could replace the original standard to identify Fructus Forsythiae.

Fructus Forsythiae；thin layer identification；forsythia glycosides；rutin；forsythia ester glycosides A；quercetin

2015-01-28)

國家工業(yè)和信息化部中藥材扶持項目(工信部消費[2012]369號)；陜西省科技攻關中藥現(xiàn)代化項目(2014K14-01-01)

*

白吉慶，副教授，碩士生導師，研究方向：中藥資源開發(fā)與利用研究；Tel：(029)38184880，E-mali:baijiqing323@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.4.010