陳春伶　徐美隆　楊智等

摘要： 以B5改良的培養(yǎng)基作為基本培養(yǎng)基，比較了添加不同濃度6-BA與IBA組合的培養(yǎng)基對釀酒葡萄“蛇龍珠”莖尖復(fù)蘇及生莖的影響，篩選出適合蛇 龍珠試管苗莖尖復(fù)蘇的培養(yǎng)基為B5（改良）+1 5 mg/L 6-BA+0 05 mg/L [JP3]IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，pH值5 8～6 0；篩選出適合蛇龍珠試管苗生莖的培養(yǎng)基為B5（改良）+1 5 mg/L 6-BA+ 01 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂，pH值=5 8～6 0。

關(guān)鍵詞： 釀酒葡萄“蛇龍珠”；莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基；生莖培養(yǎng)基

中圖分類號：S663 104 文獻標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2015）08-0174-02

蛇龍珠，釀酒葡萄品種，別稱解百納；歐亞種，原產(chǎn)法國，為法國的古老品種之一，與赤霞珠、品麗珠是姊妹品種；1892年引入中國，現(xiàn)在山東煙臺、寧夏等地區(qū)有較多栽培。葡萄莖尖因其頂端分生細胞分裂生長速度大于病毒在細胞間傳遞感染的速度，加之頂端分生組織代謝產(chǎn)生的內(nèi)源激素對病毒具有鈍化作用 [1]，所以莖尖頂端分生組織通常不含或含少量病毒 [1-5]。因此，通過蛇龍珠莖尖剝離脫毒技術(shù)，獲取無病毒組織，再進行組織培養(yǎng)，可得到脫毒的蛇龍珠健康植株。本研究通過篩選脫毒過程中莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基及生莖培養(yǎng)基，以期獲得適合蛇龍珠的優(yōu)良莖尖順利復(fù)蘇生長的培養(yǎng)基，為蛇龍珠的無毒苗快繁提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1 1 材料

復(fù)蘇培養(yǎng)材料：4周齡蛇龍珠試管苗莖尖；生莖培養(yǎng)材料：在莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基上培養(yǎng)3周的葡萄莖尖發(fā)育成的小苗。

1 2 方法

本研究以0 8～1 0 mm的蛇龍珠試管苗莖尖為脫毒處理材料，處理后的莖尖需要復(fù)蘇培養(yǎng)才能生長為完整的植株。參考Wang等的研究 [6-8]，設(shè)計試驗。莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基及生莖培養(yǎng)基均以B5為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，對6-BA和IBA 2種植物生長調(diào)節(jié)劑進行濃度篩選。

1 2 1 復(fù)蘇培養(yǎng)基篩選

根據(jù)文獻報道以B5（改良）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，對6-BA設(shè)計1 0、1 5、2 0 mg/L 等3個水平，對IBA設(shè) 計0 05、0 10、0 15、0 20 mg/L等4個水平，設(shè)計完全試驗，配制培養(yǎng)基（附加30 g/L蔗糖和7 g/L瓊脂，以形成固體培養(yǎng)基），倒莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基平板；以4周齡蛇龍珠試管苗為材料，解剖鏡下取 0 8～1 0 mm 莖尖于待篩選的莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)平板中，每板15個莖尖，每個處理設(shè)置3次重復(fù)；避光暗培養(yǎng) 3 d，然后光照培養(yǎng)。培養(yǎng)條件：溫度（25±2）℃；光照度2 000～2 500 lx；光照時間16 h/d。1周后統(tǒng)計成活率，2周后統(tǒng)計生長狀態(tài)。

1 2 2 生莖培養(yǎng)基篩選

根據(jù)文獻資料以B5（改良）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，設(shè)定6-BA為1 0、1 5、2 0 mg/L，設(shè)完IBA為 0 05、0 10、0 15、0 20、0 30 mg/L 5個水平，設(shè)計完全試驗，配制生莖培養(yǎng)基（附加30 g/L蔗糖和7 g/L瓊脂，以形成固體培養(yǎng)基），倒入300 mL玻璃瓶內(nèi)，每瓶60 mL。以莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基處理1、處理5所得到的3周齡莖尖為材料，每瓶生莖培養(yǎng)基接種3～4株葡萄小苗；光照培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：溫度 （25±2） ℃，光照度2 000～2 500 lx，光照時間 16 h/d。4周后統(tǒng)計成活率及生長狀況。

2 結(jié)果與分析

2 1 不同處理對蛇龍珠莖尖復(fù)蘇的影響

從表1可以看出，處理1、處理2的莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基莖尖成活率最高，都能達到100%；處理5、處理6、處理7成活率較高，都在90%以上。

由表2可知，處理1、處理5、處理8莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基莖尖生長情況好，葉片面積大（圖1），最終得分都在90分以上。

綜合考慮，處理1、處理5莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基是效果好的葡萄莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基。

2 2 不同處理對蛇龍珠組培苗生莖的影響

從表3可見，莖尖在處理5復(fù)蘇培養(yǎng)基上復(fù)蘇3周后，轉(zhuǎn)入B5（改良）+1 5 mg/L 6-BA+0 1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂的生莖培養(yǎng)基效果最好：輕度褐化、無明顯愈傷、有單株分化、長勢好（圖2）；其余培養(yǎng)基則表現(xiàn)為愈傷叢芽、嚴(yán)重褐化、長勢過弱或死亡。

3 討論

3 1 莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基篩選

好的莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基不僅莖尖成活率要高，而且莖尖應(yīng)該生長良好、長勢旺盛。本研究從莖尖成活率和莖尖生長情況兩方面對莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基進行綜合考量，最終選出成活率高、長勢旺盛的2種莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基供后續(xù)研究使用。

6-BA是人工合成的植物生長調(diào)節(jié)劑，具有促進細胞延長、細胞分裂、芽形成等作用。IBA也是人工合成的植物生長調(diào)節(jié)劑，是IAA的類似物，具有促進不定根形成和根生長的作用。顧沛雯等研究發(fā)現(xiàn)，6-BA和IBA在莖尖復(fù)蘇中是不可缺少的植物生長調(diào)節(jié)劑，不添加6-BA或不添加IBA都不能誘導(dǎo)莖尖萌發(fā) [7]，只有二者共同使用，才能成功誘導(dǎo)莖尖萌發(fā)。Wang等研究發(fā)現(xiàn)，在莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基中添加IBA比添加NAA效果好，有利于不定根的形成 [6，9]。6-BA的濃度大于0 5 mg/L時對小芽的頂端優(yōu)勢有明顯抑制作用，會產(chǎn)生大量叢芽；6-BA濃度低于0 5mg/L時有利于小芽的正常生長，不易產(chǎn)生大量叢芽。

本研究根據(jù)文獻資料采用賦值加權(quán)的方式將成功復(fù)蘇的莖尖的生長情況量化，從而易于比較和分析。本研究以葉片寬度為基本參考，根據(jù)復(fù)蘇2周的莖尖生長情況將葉片寬度分為3類：A類葉片0 8 cm<葉寬≤1 0 cm；B類葉片0 6 cm<葉寬≤0 8 cm；C類葉片0 25 cm<葉寬≤0 6 cm。A類葉片每張賦值1，B類葉片每張賦值0 5，C類葉片每張賦值025。這樣，復(fù)蘇后莖尖的生長情況得以量化，從而為評價其生長狀況提供了方法和依據(jù)。

3 2 生莖培養(yǎng)基篩選

莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)、生莖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)，各階段的生長調(diào)節(jié)劑配比有所不同。本研究發(fā)現(xiàn)，將1～2 mm的4周齡蛇龍珠葡萄試管苗莖尖接種于B5（改良）+1 5 mg/L 6-BA+0 05 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂的莖尖復(fù)蘇培養(yǎng)基上，暗培養(yǎng)3 d后，見光正常培養(yǎng)，3周齡時轉(zhuǎn)入B5（改良）+0 3 mg/L 6-BA+0 2 mg/L IAA+30 g/L 蔗糖+7 g/L瓊脂的生莖培養(yǎng)基，光照正常培養(yǎng)4周后轉(zhuǎn)入B5（改良）+0 2 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂+ 1 g/L活性炭的生根培養(yǎng)基，最為合適。此方法處理過的蛇龍珠莖尖成活率高、不易褐化、長勢良好。

葡萄生莖培養(yǎng)基篩選試驗中出現(xiàn)大量的愈傷和叢芽現(xiàn)象，其可能原因是6-BA的濃度偏高或添加了IBA而不是IAA。董曉玲等研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中6-BA濃度偏高會導(dǎo)致小芽難以生長成為較長的幼莖并產(chǎn)生叢芽 [9]。如果培養(yǎng)基中添加IBA而不是IAA則會導(dǎo)致芽叢生長緩慢并且難以生長為較長的幼莖。

參考文獻：

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