喬 杰，趙鵬程，許英健，韓 闖

（中國(guó)刑事警察學(xué)院，沈陽(yáng) 110035）

高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析油脂物證種屬特征

喬 杰，趙鵬程，許英健，韓 闖

（中國(guó)刑事警察學(xué)院，沈陽(yáng) 110035）

目的 采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析確定人體以及七種動(dòng)物油脂的甘油三酯種屬特征。方法 用丙酮溶解19種甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品，分析這19種標(biāo)準(zhǔn)甘油三酯特征峰，色譜柱條件為C18色譜柱，流動(dòng)相是二氯甲烷-乙腈-冰乙酸（30：70：0.2，V/V/V），流速1.0 mL/min，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)，以此得出特征標(biāo)準(zhǔn)峰，再對(duì)樣品進(jìn)行分析；采集人體、七種動(dòng)物 （ 豬、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚(yú)） 油脂，丙酮溶解后直接采用與標(biāo)準(zhǔn)品相同的條件進(jìn)樣分析，分離各種甘油三酯，對(duì)比混合標(biāo)準(zhǔn)樣品特征峰處理各種譜圖數(shù)據(jù)。結(jié)果 人體油脂、七種動(dòng)物油脂的譜圖數(shù)據(jù)特征性強(qiáng)，能夠區(qū)分人以及這七種動(dòng)物。結(jié)論 甘油三酯可以作為鑒定人類和這七種動(dòng)物油脂種屬的依據(jù)，為案件偵破指明方向。

甘油三酯；人體油脂；動(dòng)物油脂；高效液相-蒸發(fā)光散射法

確定一些犯罪現(xiàn)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)的可疑油痕物證是人體油脂、還是動(dòng)植物油脂，對(duì)于判斷案件性質(zhì)、推斷作案方式、鎖定作案工具至關(guān)重要。一些涉假肉類食品和食用油的案件也常涉及動(dòng)物油脂的種屬鑒別。近年來(lái)，油脂種屬檢驗(yàn)有一些新的報(bào)道［1，2］，這對(duì)于促進(jìn)公共安全領(lǐng)域油脂物證檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展具有重要意義［3-5］。史曉凡等［6-9］采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射方法（high performance liquid chromatography-evaporative light-scattering detector，HPLC-ELSD），對(duì)人和動(dòng)物油脂的種屬特征進(jìn)行分析對(duì)比，發(fā)現(xiàn)人體油脂具有獨(dú)特的色譜特征。本文在上述研究基礎(chǔ)上，利用甘油三酯（triglyceride）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)動(dòng)物油脂中常見(jiàn)的甘油三酯進(jìn)行分析。

1 材料和方法

1.1 油脂樣品

人體油脂樣品（解剖時(shí)取自人體的皮下脂肪）；豬油脂樣品12份；牛羊油脂樣品各6份；魚(yú)油脂樣品2份；雞、鴨、鵝油脂樣品各1份；魚(yú)脂肪3份（動(dòng)物油脂為購(gòu)自不同省市的樣本，冷凍保存）。

1.2 甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品

19種標(biāo)準(zhǔn)甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品（瑞典Laroda公司），分別為月桂酸甘油酯（LaLaLa）、硬脂酸甘油酯（StStSt）、油酸甘油三酯（OOO）、1，2-棕櫚酸-3-硬脂酸甘油酯（PPSt）、1，2-棕櫚酸-3-油酸甘油酯（PPO）、1，3-棕櫚酸-2-油酸甘油酯（POP）、1，2-硬脂酸-3-油酸甘油酯（StStO）、1，2-油酸-3-棕櫚酸甘油酯（OOP）、1，3-油酸-2-棕櫚酸甘油酯（OPO）、1，2-油酸-3-硬脂酸甘油酯（OOSt）、1，3-油酸-2-硬脂酸甘油酯（OStO）、1，2-亞油酸-3-棕櫚酸甘油酯（LLP）、1，2-亞油酸-3-油酸甘油酯（LLO）、1-硬脂酸-2-棕櫚酸-3-油酸甘油酯（StPO）、1-棕櫚酸-2-亞油酸-3-硬脂酸甘油酯（PLSt）、1-棕櫚酸-2-油酸-3-亞油酸甘油酯（POL）、1，2-豆蔻酸-3-棕櫚酸甘油酯（MMP）、1，3-硬脂酸-2-棕櫚酸甘油酯（StPSt）、1-硬脂酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油酯（POSt）。

1.3 樣品及標(biāo)準(zhǔn)品處理

1.3.1 甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制

分別稱取19種標(biāo)準(zhǔn)品各2.0 mg置于10.0 mL容量瓶中，用丙酮溶解、定容，配制成甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，檢測(cè)時(shí)分別取等量混合制成混合標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液，待測(cè)。

1.3.2 油脂樣品溶液的制備

分別稱取人、豬、牛、羊、雞、鴨、鵝、魚(yú)油脂樣品各2.0 mg，加入0.5 mL丙酮，室溫下，超生震蕩輔助溶解，制成人體油脂、動(dòng)物油脂溶液，待測(cè)。

1.4 儀器及條件

Agilent 1100series高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；色譜柱：C18柱（150 mm×3.9 mm，4 μm）；柱溫：30℃；流動(dòng)相：二氯甲烷-乙腈-冰乙酸（30：70：0.2， V/V/V）；流速：1.0 mL/min；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（Model 1400ELSD）；漂移管溫度：70℃；霧化管溫度：30℃；光學(xué)池溫度：80℃；排氣管溫度：60℃；GAS：45-55P。

2 結(jié)果與討論

2.1 甘油三酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液分析

在最佳分析條件下，對(duì)單個(gè)甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行HPLC-ELSD分析，均得到較好地分離。在實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)脂肪酸種類相同但是在甘油三酯中所處位置不同的甘油三酯樣品的保留時(shí)間相同。對(duì)19種甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液進(jìn)行分析，只有StStSt溶解性不好，有時(shí)不出峰；同分異構(gòu)的甘油三酯為重疊峰，四個(gè)重疊峰分別是OOP和OPO， PPO和POP，OOSt和OStO， StPO和POSt（見(jiàn)圖1）。

圖1 18種甘油三酯標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)混合溶液的HPLC-ELSD譜圖Fig.1 Chromatogram of mixture of 18 types of triglycerides’standards by HPLC-ELSD

2.2 常見(jiàn)家畜類動(dòng)物油脂樣品種屬特征分析

對(duì)豬、牛、羊三種胎生家畜類脂肪所含的甘油三酯進(jìn)行比較分析表明，三種不同種屬家畜類動(dòng)物油脂中甘油三酯的組成特征差異明顯。從甘油三酯種類上講，豬脂、牛脂、羊脂甘油三酯種類數(shù)目分別是10、14、12種，其中， OOP或OPO相對(duì)含量均為最高，POP或PPO和StPO或 POSt兩種甘油三酯的相對(duì)含量在牛、羊脂肪中相對(duì)較高，但在豬脂中含量并不高（見(jiàn)圖2）。

對(duì)不同地區(qū)豬、牛油脂進(jìn)行HPLC-ELSD分析，對(duì)比不同地區(qū)同種種屬的動(dòng)物脂肪中的同種甘油三酯，結(jié)果表明這些樣品中甘油三酯的組成成分相同，但是各種甘油三酯的相對(duì)含量存在差異。具體的差異通過(guò)選取三種地區(qū)豬脂肪、牛脂肪前五種甘油三酯的峰面積占總峰面積的百分比的數(shù)值進(jìn)行比對(duì)，同種甘油三酯在不同地區(qū)不同個(gè)體的同種物種中相對(duì)含量有波動(dòng)，見(jiàn)表1、表2，但不影響物種間的區(qū)分。

圖2 不同種屬家畜類動(dòng)物油脂甘油三酯特征圖。2-1：豬脂肪；2-2：牛脂肪；2-3：羊脂肪。Fig.2 Chromatogram of triglycerides of fats from different species of livestock by HPLC-ELSDk.2-1: pig fat； 2-2: cattle fat；2-3: sheep fat.

表1 不同地區(qū)豬脂肪五種甘油三酯的峰面積相對(duì)百分比Table1 Relative percentage of the peak area of fi ve triglyceride of pig fat from different regions（%）

地 區(qū) LLO LLP MMP POL OPO/OOP河南鄭州 0.874 1.307 5.578 5.143 2.684內(nèi)蒙古 1.528 1.524 4.731 5.911 2.127貴州貞豐 1.015 0.814 1.525 3.937 2.389

2.3 家禽（及魚(yú)）類動(dòng)物油脂樣品的種屬特征分析

圖3 不同種屬家畜（及魚(yú)）類動(dòng)物油脂的甘油三酯特征圖。3-1：雞脂肪；3-2：鴨脂肪；3-3：鵝脂肪；3-4：魚(yú)脂肪。Fig.3 Chromatogram of triglycerides of fats from different species of fowl and fi sh by HPLC-ELSD.3-1: chicken fat； 3-2: duck fat； 3-3: geese fat； 3-4: fi sh fat.

對(duì)雞、鴨、鵝、魚(yú)四種卵生動(dòng)物油脂進(jìn)行HPLC-ELSD分析，其譜圖結(jié)構(gòu)特別相近，但仍然存在種屬性差異見(jiàn)圖3。雞、鴨、鵝和魚(yú)脂肪所含甘油三酯的種類數(shù)目分別是12、11、14、15種，魚(yú)脂肪的甘油三酯種類相對(duì)較多，本文只把通過(guò)對(duì)比混標(biāo)得到的甘油三酯的種類標(biāo)注出來(lái)，其余峰未知其甘油三酯種類。在雞、鴨、鵝、魚(yú)脂肪中， OOP或 OPO、POL、 MMP三種甘油三酯的相對(duì)含量很高。對(duì)比家畜類動(dòng)物與家禽類動(dòng)物油脂譜圖，兩者含量較高的甘油三酯種類相同，都為OOO、POL、MMP、OPO/ OOP、PPO/POP。二者最大的區(qū)別就是實(shí)驗(yàn)中的四種卵生動(dòng)物均不含胎生動(dòng)物油脂中的PLSt。

2.4 人體油脂的種屬特征

在人體油脂中，LLP、POL、LLO三種甘油三酯的相對(duì)含量較高，見(jiàn)圖4。與豬、牛、羊三種胎生動(dòng)物相比，人體油脂甘油三酯出峰時(shí)間較早，且在保留時(shí)間7.5～10 min之間有兩個(gè)未知峰；人體油脂甘油三酯的種類（9種）比豬牛羊少；含量相對(duì)較高的甘油三酯種類也不相同，人體油脂中甘油三酯含量較高的是LLP、POL、LLO，豬、牛、羊油脂中則是OPO/OOP、StPO/POSt，可以明顯區(qū)別人體油脂和豬牛羊的油脂。對(duì)比卵生動(dòng)物，人體油脂相對(duì)卵生動(dòng)物油脂出峰時(shí)間較早，人體油脂甘油三酯的種類（9種）比雞、鴨、鵝、魚(yú)的甘油三酯種類少；含量相對(duì)較高的甘油三酯種類也不相同，人體油脂是LLP、POL、LLO，雞、鴨、鵝、魚(yú)則是OPO/OOP、POL、MMP。分析結(jié)果表明，人體油脂和卵生動(dòng)物油脂的種屬區(qū)別較大。

圖4 人體脂肪甘油三酯特征圖Fig.4 Chromatogram of triglycerides of human fat by HPLC-ELSD

3 結(jié) 論

采用高效液相-蒸發(fā)光散射器法區(qū)分動(dòng)物油脂種屬特征的方法十分有效，可以將該方法用于涉假動(dòng)物油脂的鑒別，為確定制假方式提供科學(xué)證據(jù)。另外，由于人與其它動(dòng)物油脂的色譜特征差異明顯，所以人體油脂的種屬鑒定可以為焚尸案件的偵破提供依據(jù)。

［1］ 丁軍凱，范垂昌.瞬時(shí)裂解甲基化技術(shù)—一種快速鑒別人體脂肪及動(dòng)植物油脂的色譜分析方法［J］.刑事技術(shù)，1996（3）:5.

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引用本文格式：?jiǎn)探埽?趙鵬程， 許英健， 等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法分析油脂物證種屬特征 ［J］.刑事技術(shù)，2015，40（5）:400-403.

Species-characteristic Analysis of Animal Fat by HPLC-ELSD

QIAO Jie， ZHAO Pengcheng， XU Yingjian， HAN Chuang
（National Police University of China，Shenyang 110035， China）

Objective To explore the species characteristics of fat from human and seven kinds of animals （pigs， cattle，sheep， chickens， ducks， geese， fi sh） by the analysis of triglycerides using high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector （HPLC-ELSD）.Methods 19 kinds of triglycerides standards were dissolved in acetone and analyzed by HPLC-ELSD.Chromatography was achieved using a C18 column and an isocratic mobile phase consisting of methylene chloride/acetonitrile/ice acetic acid （30/70/0.2， V/V/V） at a fl ow rate of 1 mL/min， and ELSD detection was performed at 70°C for the drift tube.Fat of human and seven kinds of animals was subjected to the same treatment as that of triglycerides standards in identical conditions， and the resultant chromatograms being compared with those of triglycerides standards to determine the types of triglyceride.Results Human fat has 9 types of triglyceride， and the fat from pig， cattle， sheep， chic ken，duck， goose and fi sh has 10， 14， 13， 12， 11， 14， 15 types of triglycerides， respectively.All of these fats have their own special triglyceride types as their species’ characteristics.For the fats of same species animals raised in different area， the types of triglyceride， though various in content， have shown the same characteristics.Conclusions Types of triglycerides are reliable for identifying whether the fat is from human and seven kinds of animals tested in this study， and this can provide useful information for case investigation.

triglyceride； human fat； animal fat； high performance liquid chromatography-evaporative light-scattering detector

DF795.1

A

1008-3650（2015）05-0400-04

10.16467/j.1008-3650.2015.05.013

公安部應(yīng)用創(chuàng)新計(jì)劃項(xiàng)目（No.2012YYCXXJXY128）

喬 杰（1991—），女，河南周口人，碩士研究生，研究方向?yàn)槲⒘课镒C分析。 E-mail: JOYCCPC@163.com

2015-01-26