★　董寧霞 邊瑞民 成植溫 宋德海 盧立明 （濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院　山東濱州256603）

HPLC法同時(shí)測(cè)定復(fù)方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量

★董寧霞 邊瑞民 成植溫 宋德海 盧立明 （濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院山東濱州256603）

目的：建立復(fù)方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量測(cè)定方法。方法 ：采用反相高效液相色譜法，選擇Agilent ZORBAX SB-C18柱 （4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)265nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿、黃芩素均得到較好分離，分別在0.092～2.3mg/mL，0.064～1.6 mg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.96%、98.18%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量測(cè)定。

復(fù)方三黃酊；鹽酸小檗堿；黃芩素；高效液相色譜

復(fù)方三黃酊由黃連、黃芩、黃柏、冰片等藥材組成，具有抗菌消炎、止痛消腫、祛腐生肌的功效，用于治療各期褥瘡和慢性皮膚潰瘍、軟組織損傷、Ⅱ度以下燒燙傷等［1］，在我院應(yīng)用20多年，臨床療效顯著。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方三黃酊中鹽酸小檗堿和黃芩素的含量，為工藝改進(jìn)和質(zhì)量控制提供科學(xué)的方法依據(jù)。

1　儀器與試藥

Agilent 1260（DAD檢測(cè)器）；KQ-300V臺(tái)式超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

乙腈為色譜純，磷酸、乙醇、十二烷基硫酸鈉等均為分析純；復(fù)方三黃酊由濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院藥學(xué)部制劑室提供 （批號(hào)20130422、20131007、20140307）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)110713-20121 2）、黃芩素對(duì)照品（批號(hào)111595-201306）均購于中國(guó)食品藥品檢定研究院。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相：A乙腈-B 0.1%磷酸水溶液（每100mL加十二烷基硫酸鈉0.1g），梯度洗脫：0～10min 10%～45%A，10～15min 45%A，15～30min 45%～90%A；流速：1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；柱溫：室溫。

2.2對(duì)照品溶液制備精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品9.20mg、黃芩素對(duì)照品6.41mg置于2mL量瓶中，用50%乙腈-水溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品溶液的制備將樣品搖勻后，精密量取10 mL，超聲處理5min，放冷后轉(zhuǎn)移至10 mL容量瓶?jī)?nèi)，加乙醇至刻度，搖勻。臨用前用0.45μm微孔濾膜濾過。

2.4線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液20，50，100，200，500μL分別置于5個(gè)1mL量瓶中，用50%的乙腈-水溶液稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣2μL，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積y對(duì)進(jìn)樣濃度x進(jìn)行回歸處理，結(jié)果見表1。

表1　鹽酸小檗堿和黃芩素的線性回歸方程

2.5精密度試驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次進(jìn)樣2μ L。計(jì)算鹽酸小檗堿含量的RSD為0.65%，黃芩素的RSD為1.24%，精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0，4，8，16，24h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果：鹽酸小檗堿含量的RSD 為1.09%，黃芩素的RSD為1.53%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批樣品（批號(hào)20130422）共6份，分別精密稱定，按照2.3項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣2μL，測(cè)定峰面積，鹽酸小檗堿、黃芩素的RSD為1.69%，1.72%，表明該測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.8加樣回收試驗(yàn)精密量取已知含量的樣品6份，每份10mL，分別加入鹽酸小檗堿和黃芩素對(duì)照品適量，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.9樣品測(cè)定取樣品3批，按”2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣2μL，記錄色譜圖（圖1），計(jì)算鹽酸小檗堿、黃芩素含量，結(jié)果見表3。

表3　樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=3）　mg·mL-1

3　討論

圖1　對(duì)照品（A）及樣品（B）的HPLC圖譜

復(fù)方三黃酊是以黃連、黃芩、黃柏為君藥的中藥復(fù)方制劑。小檗堿是黃連、黃柏的主要有效成分，具有抗菌、抗炎等作用［2］；黃芩素是黃芩抗菌的有效成分，并可通過多種環(huán)節(jié)影響花生四烯酸代謝，抑制組胺釋放，減輕炎性反應(yīng)［3］。二者的藥理作用與復(fù)方三黃酊的功效一致，可作為該制劑工藝改進(jìn)和質(zhì)量控制中的指標(biāo)成分。

采用HPLC法同時(shí)測(cè)定鹽酸小檗堿和黃芩素含量時(shí)，小檗堿的有明顯的拖尾現(xiàn)象，峰形對(duì)稱性差，且較難與鄰近化學(xué)成分分離，故在流動(dòng)相0.1%磷酸水溶液中加入十二烷基硫酸鈉作掃尾劑，顯著改善了小檗堿的峰形。

供試品溶液未經(jīng)過精制，成分復(fù)雜，等度洗脫的效果不理想，故改為梯度洗脫，可較好地分離各化學(xué)成分。該高效液相色譜法可同時(shí)測(cè)定復(fù)方三黃酊中鹽酸小檗堿、黃芩素的含量，準(zhǔn)確快速，具有實(shí)際應(yīng)用意義。

［1］成新蓮，王玉，王洪巖，等.復(fù)方三黃酊和地榆酊的制備與臨床應(yīng)用［J］.中華護(hù)理雜志，2001，36（9）：706-707.

［2］侯家玉.中藥藥理學(xué)［M］.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007，3.

［3］高燕，顧振綸，蔣小崗，等.黃芩素藥理學(xué)研究新進(jìn)展［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，21（7）：1765-1767

R284.1

A

*第一作者：董寧霞（1983-），女，碩士，主管藥師。研究方向：醫(yī)院藥學(xué)。E-mail：dongnx@163.com。

（2014－11－07）編輯：曾文雪