卓宇楨（正大青春寶藥業(yè)有限公司，浙江 杭州 310023）

作為當(dāng)前分離分析技術(shù)中的典型代表，高效液相色譜以其自身應(yīng)用范圍廣、分析速度快、靈活度與分析效率高等優(yōu)勢被廣泛用于生化醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中。然而實(shí)際操作過程中也可能存在故障現(xiàn)象，使分析結(jié)果受到不同程度影響，要求操作人員做好及時(shí)排查與維護(hù)，提高高效液相色譜儀的使用效果。

1 故障產(chǎn)生的原因與解決方法分析

1.1 液相色譜儀的泵壓問題

泵壓問題在高效液相色譜儀運(yùn)行中主要體現(xiàn)在：第一，無壓力問題。該問題產(chǎn)生的原因可能因泵內(nèi)存有氣體，或流動(dòng)相單向閥因緩沖鹽過多而發(fā)生堵塞，也因設(shè)備高壓密封墊的使用造成變形問題。對(duì)此問題的解決要求對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行合理選擇，擰松排氣閥并控制流速，同時(shí)需對(duì)高壓密封墊及時(shí)更換。第二，壓力過高問題。產(chǎn)生這種問題的原因?yàn)槿軇┻^濾頭、管路與手動(dòng)進(jìn)樣器發(fā)生堵塞以及保護(hù)柱、混合氣與色譜柱出現(xiàn)被污染情況等。解決方式需利用沖洗液對(duì)堵塞情況沖洗，而污染問題要求對(duì)保護(hù)柱進(jìn)行更換，利用沖洗液清除色譜柱的污染并引入HPLC級(jí)水使混合器置于其中完成清洗。第三，壓力過低問題。該問題存在的原因如系統(tǒng)漏液或氣泡存于泵內(nèi)等，需要對(duì)漏液部位檢測且及時(shí)更換裝置，氣泡現(xiàn)象則需使排氣閥擰松，實(shí)現(xiàn)排氣的目標(biāo)。第四，壓力不穩(wěn)問題。除高壓密封墊受損或污染與堵塞等因素外，如比例閥失效或空氣存于溶劑內(nèi)都可能造成壓力不穩(wěn)，需要對(duì)比例閥進(jìn)行更換，并通過排氣閥的設(shè)置與流速的控制實(shí)現(xiàn)超聲脫氣[1]。

1.2 高效液相色譜儀基線問題分析

基線問題方面的故障主要包括基線漂移與噪聲過大兩方面問題。其中基線漂移問題的產(chǎn)生主要受色譜柱、流動(dòng)相、檢測池的污染以及不穩(wěn)定的電壓與柱溫波動(dòng)等影響，解決方式通常應(yīng)利用清洗劑解決污染問題，并適時(shí)檢查電壓，避免在陽光充足或氣流作用明顯區(qū)域放置柱子。另外也存在流動(dòng)相不合理的情況出現(xiàn)基線的上下波動(dòng)，要求在溶液使用方面做到精密量取，保證混合配制合理。而噪聲問題存在的原因主要取決于電干擾所引起的偶然噪聲、污染引起的隨機(jī)噪聲以及氣泡或檢測器等方面產(chǎn)生的噪聲，對(duì)此需對(duì)如水溶等產(chǎn)生干擾的來源進(jìn)行檢查，清洗設(shè)備污染情況并對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣。

1.3 峰形問題的分析

峰形問題常見的故障類型主要包括：第一，平頭峰故障。這種故障產(chǎn)生的原因體現(xiàn)在紫外燈、檢測池方面的原因以及進(jìn)樣量過大，應(yīng)在高效液相色譜儀運(yùn)行中對(duì)紫外燈與檢測池進(jìn)行適時(shí)檢修與清洗，并控制進(jìn)樣量。第二，分叉峰故障。分叉峰故障多表現(xiàn)在雙峰或肩峰方面，產(chǎn)生的原因除檢測池、色譜柱、進(jìn)樣閥與保護(hù)柱污染方面，也存在溶劑選擇不合理以及樣品過載等原因，可采取清洗措施，保證溶劑合理選擇并減少進(jìn)樣量。第三，拖尾峰故障，其產(chǎn)生的原因體現(xiàn)為：流動(dòng)相的pH、流速、配比等不合理，且樣品純度較低，要求對(duì)流速進(jìn)行控制，合理選擇pH與配比，對(duì)樣品需進(jìn)一步純化。第四，伸舌峰故障。產(chǎn)生的原因與拖尾峰故障較為相似，不同的是柱溫較低、樣品過載，應(yīng)做好溫度與進(jìn)樣量的控制。

1.4 保留時(shí)間問題

高效液相色譜儀中保留時(shí)間問題首先表現(xiàn)在保留時(shí)間變化方面，其產(chǎn)生的原因?yàn)橹鶞嘏c柱內(nèi)條件的變化、柱污染以及緩沖液容量不足等。對(duì)此需要引入恒溫箱，適時(shí)清洗柱，并利用緩沖液解決緩沖液容量不足問題。其次，保留時(shí)間過長問題，該故障出現(xiàn)的原因主要受流動(dòng)相組成變化、管路泄漏與硅膠柱活性點(diǎn)發(fā)生改變等，需要避免流動(dòng)相出現(xiàn)沉淀顯現(xiàn)，進(jìn)行泵密封圈的更換，同時(shí)需將改性劑引入流動(dòng)相中[2]。

2 對(duì)高效液相色譜儀采取的主要維護(hù)方式分析

日常維護(hù)設(shè)備過程中主要針對(duì)進(jìn)樣閥、溶劑過濾頭、單向閥、色譜柱以及檢測池等方面。從進(jìn)樣閥方面，在實(shí)驗(yàn)過程中進(jìn)樣閥的污染容易造成如分叉峰等問題，對(duì)設(shè)備的準(zhǔn)確性產(chǎn)生一定影響。所以在清洗過程中可針對(duì)含有緩沖鹽與不含緩沖鹽的樣品采取不同的策略，若緩沖鹽存于樣品中，則需將HPLC級(jí)水注射在進(jìn)樣口處，直到清洗干凈為止，而對(duì)不含緩沖鹽的樣品清洗時(shí)，在方式上與前者相同，但清洗次數(shù)相對(duì)較少。從溶劑過濾頭清洗角度，如前文所述在使用中往往因污染或堵塞產(chǎn)生泵壓故障問題，在日常維護(hù)過程中需在利用HPLC級(jí)水清洗后對(duì)流動(dòng)相流速進(jìn)行設(shè)置，注意分析過濾器內(nèi)是否存在氣泡問題，保證霉菌菌團(tuán)被破壞后，說明過濾器內(nèi)可使流動(dòng)相自由通過。從單向閥角度，其出現(xiàn)污染或堵塞的情況多由于密封性較差或存有顆粒物質(zhì)，維護(hù)過程中應(yīng)利用純凈水進(jìn)行超聲清洗。在色譜柱清洗方面，其作為HPLC主要部件，很容易在使用過程中出現(xiàn)柱壓不穩(wěn)或峰形變化問題，維護(hù)中在保證鹽類被清洗干凈的前提下，引入甲醇沖洗，并將正相柱在如乙烷等溶劑中保存。

3 結(jié)語

故障的分析與解決是保證高校液相色譜有效運(yùn)行的重要途徑。分析過程中應(yīng)根據(jù)存在的泵壓、基線、峰形以及保留時(shí)間等問題產(chǎn)生的原因進(jìn)行研究并采取相應(yīng)的策略，而在日常實(shí)驗(yàn)后也需對(duì)進(jìn)樣閥以及色譜柱等方面做好日常維護(hù)檢查工作，以此發(fā)揮設(shè)備的應(yīng)有效果。

[1]賀小蔚,李衛(wèi)建,婁炯炯,黃金麗,范中南,汪聰慧.高效液相色譜儀的常見故障及簡易排除方法[J].現(xiàn)代科學(xué)儀器,2012,01:151-154.

[2]徐曉玲,樓雪芳.高效液相色譜儀使用中的常見故障及維護(hù)方法[J].山東化工,2014,09:43-48.

[3]陳蓮,高洪,肖嘯.高效液相色譜儀使用過程中常見問題及其解決方法[J].中國飼料,2010,08:37-38.