張曉鈿

（海南省藥物安全性評(píng)價(jià)研究中心 海南 ?？?71199）

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

供試品：復(fù)合磷酸氫鉀注射液，規(guī)格：2mL（含磷酸氫二鉀0.639g，磷酸二氫鉀0.4354g），批號(hào)：111201，由海南合瑞制藥股份有限公司提供。

平行對(duì)照品，復(fù)合磷酸氫鉀注射液，規(guī)格：2mL（含磷酸氫二鉀0.639g，磷酸二氫鉀0.4354g），批號(hào)：110610，由蘇州天馬醫(yī)藥集團(tuán)天吉生物制藥有限公司提供。

陰性對(duì)照品0.9%（g/mL）氯化鈉注射液，規(guī)格：500mL：4.5g，批號(hào):10100531，由海南國(guó)瑞堂制藥有限公司提供；蒸餾水，由本中心實(shí)驗(yàn)室自制雙蒸水。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

新西蘭家兔6 只，雄性，體重：2.094～2.378kg，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：№0103055。

1.3 方法和劑量

1.3.1 方法

取檢疫合格家兔6 只，將6 只家兔按體重排序隨機(jī)分為2組，分別為供試品組（1～3 號(hào)）和平行對(duì)照品組（4～6 號(hào)）。采用同體左右側(cè)自身對(duì)比，1～3 號(hào)家兔左側(cè)外耳緣靜脈給予供試品溶液，4～6 號(hào)家兔左側(cè)外耳緣靜脈給予平行對(duì)照品溶液，1～6 號(hào)家兔右側(cè)外耳緣靜脈給予等體積陰性對(duì)照品。每天給藥1 次，連續(xù)給藥3d，靜脈滴注速度：約30 滴/min，總藥量在25min 內(nèi)注射完畢。每次給藥前后及末次給藥后24、48、72、96h 對(duì)動(dòng)物及注射部位進(jìn)行肉眼觀察，觀察動(dòng)物全身及注射部位是否有充血、紅腫、潰瘍、瘀斑、硬結(jié)等局部刺激反應(yīng)，觀察期結(jié)束后用空氣栓塞法處死1、2 號(hào)和4、5 號(hào)動(dòng)物，剪取含有血管的耳緣組織，固定后作組織病理學(xué)檢查。留存3 號(hào)和6 號(hào)動(dòng)物繼續(xù)觀察14d 后處死，剪取含有血管的耳緣組織，固定后作組織病理學(xué)檢查，以了解刺激性反應(yīng)的可逆程度。家兔血管過(guò)敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為：0 級(jí)，給藥部位無(wú)明顯反應(yīng)；1 級(jí)，給藥部位靜脈血管輕度瘀血、紅腫；2 級(jí)，給藥部位靜脈血管中度瘀血、紅腫；3 級(jí)，給藥部位靜脈血管重度瘀血，周?chē)M織嚴(yán)重紅腫[1]。

1.3.2 劑量

供試品溶液和平行對(duì)照品溶液給藥劑量為40.29mg/kg，陰性對(duì)照品為0.9%（g/mL）氯化鈉注射液，給藥體積均為15.0 mL/kg。血管刺激性試驗(yàn)采用臨床用藥相同濃度[2]。

2 結(jié)果

2.1 一般癥狀觀察家兔靜脈滴注給藥后，試品組1-3 號(hào)和平行對(duì)照品組4-6號(hào)家兔一般癥狀觀察均無(wú)異常表現(xiàn)。

2.2 注射部位肉眼觀察

末次給藥后和恢復(fù)期，供試品組除1 號(hào)左右耳和3 號(hào)右耳在末次給藥后24h 出現(xiàn)充血刺激反應(yīng)外，其余家兔給藥部位均未見(jiàn)明顯局部刺激反應(yīng)發(fā)生；平行對(duì)照品組除5 號(hào)右耳在末次給藥后24h 出現(xiàn)充血刺激反應(yīng)外，其余家兔給藥部位均未見(jiàn)明顯局部刺激反應(yīng)發(fā)生。

2.3 病理檢查

末次給藥后96h 和恢復(fù)期病理鏡下觀察：

供試品組2 號(hào)家兔左右側(cè)取材血管均未見(jiàn)明顯局部血管刺激反應(yīng)；1 號(hào)家兔右側(cè)取材血管可見(jiàn)局灶性血管內(nèi)皮下纖維結(jié)締組織增生，伴有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)及出血；3 號(hào)（恢復(fù)期）家兔右側(cè)取材血管可見(jiàn)小血管一側(cè)血栓機(jī)化。故考慮上述病變系操作引起的損傷，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)為0。

平行對(duì)照品組4 號(hào)、6 號(hào)（恢復(fù)期）家兔左右側(cè)取材血管均未見(jiàn)明顯擴(kuò)張、充血、內(nèi)皮細(xì)胞變性壞死、周?chē)M織水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等局部血管刺激反應(yīng)；5 號(hào)家兔右側(cè)取材血管可見(jiàn)部分血管壁平滑肌消失，伴有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，因右側(cè)外耳緣靜脈給予等體積的0.9%（g/mL）氯化鈉注射液，故考慮上述病變系操作引起的損傷。

3 結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，供試品組1 號(hào)、2 號(hào)、3 號(hào)（恢復(fù)期）家兔，平行對(duì)照品組4 號(hào)、5 號(hào)、6 號(hào)（恢復(fù)期）家兔，第2、3 段取材血管鏡下觀察均未見(jiàn)明顯擴(kuò)張、充血、潰瘍、出血、變性、壞死、周?chē)M織水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)等局部血管刺激反應(yīng)發(fā)生。

綜上所述，供試品復(fù)合磷酸氫鉀注射液在給藥劑量為40.29mg/kg，給藥體積為15mL/kg 試驗(yàn)條件下，每天給藥1 次，連續(xù)給藥3d，對(duì)家兔耳緣靜脈未見(jiàn)明顯局部血管刺激反應(yīng)，提示該供試品復(fù)合磷酸氫鉀注射液無(wú)血管刺激反應(yīng)。

[1]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則:化學(xué)藥物刺激性、過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005:116-131.

[2]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)(第2 版)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006.