葉盛恒

（廣州市白云區(qū)人和鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，廣東廣州510470）

1 材料與方法

1.1 試驗動物及基礎日糧 豬傳染性胸膜肺炎病豬150頭，體重25～30kg，70日齡，未使用過胸膜肺炎放線桿菌疫苗，公母兼有，選自廣東省廣州市白云區(qū)豬場。經(jīng)鼻黏膜采樣分離細菌，并從前腔靜脈采血3mL分離血清，采用ELISA法進行血清學確診。胸膜肺炎放線桿菌（APP） 及血清學檢測呈陽性方可參與試驗分組。按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料參照家畜營養(yǎng)需求標準配制的不含任何抗菌藥物的仔豬全價日糧。

1.2 供試藥品和菌種 供試藥物：替米考星緩釋顆粒，含量10%，批號201201101，由華南農業(yè)大學獸醫(yī)藥理研究室提供，試驗前由廣東省獸藥飼料監(jiān)察所檢測含量合格。

對照藥物：替米考星預混劑，市售，有正規(guī)廠家和批號、含量信息。

豬胸膜肺炎放線桿菌（APP259） 購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。血清1型，生物Ⅰ型。凍干保存，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

豬胸膜肺炎放線桿菌（APP260） 購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。血清2型，生物Ⅰ型。凍干保存，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗試劑 MH肉湯培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基均購自環(huán)凱生物科技有限公司。

脫纖維綿羊血購自廣州蕊特生物技術有限公司。

新生小牛血清、輔酶Ⅰ（NADⅠ） 均購自普博欣生物技術有限公司。

胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、胰蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB） (OXIDE)。

上述培養(yǎng)基在使用前，121℃高壓20分鐘，冷卻至50～60°C后，加入新生牛血清（或者脫纖維綿羊血） 和NADⅠ，使其終濃度分別為8%和100μg/mL。

血細胞分析儀溶血劑、血細胞分析儀清洗液DH-520、血細胞分析儀稀釋液DH-640均購自廣州市貝立醫(yī)學科技有限公司。

豬傳染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA抗體檢測試劑盒購自武漢科前動物生物制品有限責任公司。

1.4 病原菌的分離、培養(yǎng)及鑒定

1.4.1 病原菌的分離與培養(yǎng) 無菌取肺臟、氣管、脾臟等病料組織，經(jīng)分離純化及生化PCR鑒定后，接種于含終濃度為8%的脫纖維綿羊血和100μg/mLNADⅠ的TSA平板上備用。

1.4.2 病原菌的鑒定 剖檢病死豬，取肺臟、肝臟涂TSA培養(yǎng)基進行病原菌分離并采用ELISA法進行血清學鑒定。

1.5 試驗豬分組及給藥方案 從2013年1月10日開始安排實驗事宜。在廣州人和橫瀝、廣東佛山、肇慶廣寧和廣州從化太平等地區(qū)共4個豬場（均為1～3萬頭規(guī)?；i場） 于2013/1/10～2013/3/20期間共收集了4批疑似豬傳染性胸膜肺炎的自然感染病例豬190頭，長白、大白、杜洛克等品種及公母均有，大多數(shù)豬在40～90日齡間。經(jīng)以下豬傳染性胸膜肺炎診斷方法進行確診后，選擇150頭病豬為試驗用豬，所有被選的試驗豬的發(fā)病程度基本一致，即在確診后表現(xiàn)為輕至中度臨床癥狀，已發(fā)病約為2～4天。另選相同日齡或體重的健康豬30頭作為健康對照組。

所有試驗豬均分成5組（保證每批試驗均包含有各個試驗組），每組30頭：

第1組：供試藥物高劑量組（替米考星緩釋顆粒2倍推薦劑量）；

第2組：供試藥物中劑量組（替米考星緩釋顆粒推薦劑量）；

第3組：供試藥物低劑量組（替米考星緩釋顆粒1/2倍推薦劑量）；

第4組：對照藥物組（替米考星預混劑推薦劑量）；

第5組：發(fā)病不給藥對照組（感染對照組）。

1.6 傳染性胸膜肺炎病豬的確診 接種前和接種14天后，從前腔靜脈采血3mL，分離血清，采用ELISA法進行胸膜肺炎放線桿菌ApxIV毒素抗體血清學檢測。

在酶標儀上測各孔OD630nm值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630nm值大于或等于0.6，陰性對照孔平均OD630nm值小于0.2。根據(jù)公式：S：樣品孔OD630nm值?P:陽性對照孔平均OD630nm值。如果S≥P×0.29，判為陽性，S＜P×0.29判為陰性。

1.7 實驗性治療 經(jīng)過確診后，立即選擇豬傳染性胸膜肺炎病豬共150頭（均表現(xiàn)有典型癥狀），按表1分別對各組豬給藥。停藥后對豬的臨床情況進行跟蹤觀察，觀察期持續(xù)15天。

2 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用EXCEL軟件進行處理后，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行 Means、χ2檢驗及One-Way ANOVA分析，然后橫向進行Duncan氏法和LSD法多重比較。試驗數(shù)據(jù)的結果以平均數(shù)±標準差表示（P>0.05表示差異不顯著；P<0.05表示差異顯著）。

3 結果與分析

3.1 傳染性胸膜肺炎病豬指標

3.1.1 臨床癥狀 傳染性胸膜肺炎病豬呼吸有濕羅音、精神沉郁、喜靜、喜歡呆在暗角落、體溫升高，部分豬出現(xiàn)短暫性嘔吐。接種后4～6h，豬直腸體溫達到最高值、呼吸困難，腹式呼吸嚴重、不吃料、毛發(fā)豎立、成犬坐狀等臨床癥狀。感染組感染12～24 h，精神極度沉郁、口吐白沫、呼吸困難，全身淺表部位發(fā)紺。病程發(fā)展嚴重，最后死亡時口鼻流血樣泡沫狀液體。

3.1.2 病理剖檢 從對分離菌的生化及PCR鑒定可以得出，從病死豬的肺部分離的細菌為攻毒菌株，再根據(jù)豬的發(fā)病臨床癥狀可以初步判定試驗豬感染了豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。

3.1.3 血清學診斷 根據(jù)試劑盒結果判定標準：樣品孔OD630nm值大于等于0.29倍陽性孔的OD630nm值，可判為陽性 表7中突出顯示為黃色的樣品孔的豬傳染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA抗體檢測呈陽性。

3.2 治療試驗療效評價指標

3.2.1 X光診斷 經(jīng)X光檢查確診，給藥前豬肺部出現(xiàn)明顯的纖維素性滲出特征。與治療豬肺部X光對照，感染豬的左側肺臟出現(xiàn)了白色高密度物質，這表明感染組的左側肺部出現(xiàn)了實質性病變。

3.2.2 病例剖檢 從切片中可以看出，感染死亡豬肺泡內、各級支氣管內出現(xiàn)了紅細胞，充血。炎性細胞滲出，有的甚至填滿整個肺泡腔、肺泡間隔、各級支氣管。

3.2.3 治療結果 本試驗治療效果統(tǒng)計顯示，替米考星緩釋顆粒高、中、低三個劑量組及藥物對照組均能治療豬傳染性胸膜肺炎，治愈率分別為86.7%、76.7%、66.7%、70%，差異不顯著（p>0.05，X2=0.42～3.27）。當與患病不給藥組（自愈有效率為26.7%） 進行比較，差異均極顯著（p<0.01，X2=15.02～27.78）。其中高、中、低劑量治療組、藥物對照組與健康對照組14天增重（5.51kg） 之比分別為96.5%、93.5%、97.7%、94.3%，無顯著差異（P>0.05）。

4 討論

治療效果 各試驗組與感染不給藥組比較：以有效率為主要評價指標時，替米考星緩釋顆粒高、中、低劑量組和替米考星預混劑的有效率分別為93.3%、83.3%、73.3%和76.7%，當與患病不給藥組（自愈有效率為26.7%） 進行比較，差異均極顯著（p<0.01，X2=15.02～27.78）。

各試驗組與藥物對照組比較：替米考星緩釋顆粒高、中劑量組的有效率均高于替米考星預混劑組，但差異不顯著（p>0.05，X2=0.42～3.27）。替米考星緩釋顆粒低劑量組的有效率稍低于替米考星緩釋顆粒預混劑組。

本試驗結果顯示，替米考星緩釋顆粒高、中劑量組每天給藥2次，連續(xù)給藥15天的治療效果高于替米考星預混劑的治療效果，但差異不顯著（P>0.05）。根據(jù)試驗結果，臨床應用替米考星緩釋顆粒治療豬傳染性胸膜肺炎更有效，有利于臨床推廣使用。